許蘊怡 蔡杏珊 譚耀駒 劉燕文 周輝林 曾少芳 馬品云 劉 欣

WHO估算中國2014年的新發(fā)肺結核人數(shù)約93萬，我國位居全球第三名僅次于印度和印度尼西亞。傳統(tǒng)方法中結核分枝桿菌培養(yǎng)及痰涂片是確診肺結核的重要手段，雖然痰涂片所需時間較培養(yǎng)法快，但陽性率總體并不高,Bactec MGIT 960平均陽性報告時間14.1 d，快速培養(yǎng)法報告陰性需時42 d，因此，傳統(tǒng)方法由于陽性率低且耗時較長，已經無法滿足臨床上對肺結核患者快速診斷的需求。

近幾年，結核分枝桿菌的分子生物學快速診斷方法已漸趨成熟，主要是以核酸作為檢測靶標的分子生物學技術、基因芯片法等[1-3]。其中，結核分枝桿菌RNA恒溫擴增實時檢測技術(SAT-TB)是以結核分枝桿菌活菌中特異性16s rRNA為擴增靶標，準確快速地判斷待檢樣本中結核分枝桿菌存在與否。本研究將涂陰疑似肺結核患者收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，進行SAT-TB的檢測，評價SAT-TB通過檢測BALF對涂陰肺結核的快速診斷價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2016年9月1日—2016年11月4日期間，共有80例廣州市胸科醫(yī)院涂陰疑似肺結核患者進入最后分析。研究對象首先必須滿足以下條件：①發(fā)現(xiàn)肺部異常陰影，臨床診斷為疑似肺結核患者；②痰涂片行熒光染色法結果連續(xù)3次陰性者(3次熒光染色時間間隔范圍不超過1周)。入院后肺結核疑似患者行痰涂片熒光染色結果為陽性者排除此項研究。

1.2 試劑和儀器

試劑:結核分枝桿菌(TB)核酸檢測試劑盒(仁度生物科技公司)；熒光涂片法染色液及快速液體法培養(yǎng)前處理液均由我院檢驗科自配。儀器：應用公司ABI7300熒光定量擴增儀；BACTEC MGIT960儀器。

1.3 方法

1.3.1 BD960快速培養(yǎng)法 采用Bactec MGIT 960快速培養(yǎng)法，按照此實驗的說明書標準嚴格進行實驗。

1.3.2 SAT-TB檢測 取液化好的痰標本1 mL于EP管中，以13 000 r/min 離心 5 min,后棄上清，再加入1 mL PBS緩沖液重懸離心，棄上清。將痰液標本加入50 μL裂解液重懸，該樣品即為待測樣本，用超聲破碎儀破碎15 min，功率300 W。后將2 μL處理物加入含30 μL擴增檢測液的潔凈微量反應管或者反應板中，置恒溫熒光檢測儀上進行檢測。

1.3.3 熒光涂片染色鏡檢法 用竹簽挑取標本的膿樣、血樣或干酪樣部分0.05～0.1 mL于玻片正面的右側2/3中央處，并均勻涂抹成1.0 cm×2.0 cm橢圓形痰膜，薄厚適中，室溫下自然干燥。將痰涂片進行染色和鏡檢。

1.4 統(tǒng)計學分析

直接涂片檢查、Bactec MGIT 960培養(yǎng)、SAT-TB法，所有研究對象行支纖鏡刷檢涂片熒光染色及支氣管肺泡灌洗液，收集BALF5-10ML檢測，并記錄數(shù)據(jù)。

根據(jù)SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析，各以培養(yǎng)法和臨床診斷為標準作為參考標準，計算診斷的敏感度、特異度、陽性預測值(PPV)、陰性預測值(NPV)。

2 結果

2.1 以臨床診斷為標準，SAT-TB法檢測BALF對涂陰肺結核的價值

若以臨床診斷作為判斷肺結核的陽性標準，臨床診斷肺結核包括培陽及涂陰肺結核，非肺結核或疑似肺結核為陰性標準，以臨床診斷作為參考標準，SAT-TB診斷涂陰肺結核的敏感度31.7%(20/63)、特異度88.2%(15/17)、陽性預測值91.0%(20/22)、陰性預測值25.9%(15/58)。見表1。

表1 以臨床診斷為標準，SAT-TB法檢測BALF對涂陰肺結核的診斷結果 (n)

2.2 以培養(yǎng)法為標準，SAT-TB檢測BALF診斷涂陰肺結核的價值

以培養(yǎng)法(BD960)作為參考標準，SAT-TB診斷涂陰肺結核的敏感度為53.3%(8/15),特異度為88.2%(15/17)，陽性預測值80.0%(8/10)，陰性預測值68.1%(15/22)。見表2。

表2 SAT-TB法檢測BALF對涂陰肺結核的診斷結果 (n)

3 討論

SAT-TB檢測的靶標為結核分枝桿菌的16s rRNA，此檢測技術特點：活菌檢測、準確、快速、簡便。最大的優(yōu)點在于檢測RNA反映標本活菌的存在與否。SAT-TB的操作時間及檢測時間大大減少，與痰涂片熒光染色相比較，操作時間從1 d縮短到1.5～2 h。

將該技術與目前最新使用的其他分子生物學診斷方法進行比較，近期發(fā)表的研究報道Xpert Mtb/RIF診斷涂陰肺結核的敏感61%～81%不等[4-5]，Le Palud等[6]同樣用BALF的Xpert Mtb/RIF診斷涂陰肺結核的敏感度為80%，特異度為98.6%;其他方法如Kim等[5]研究巢式PCR法診斷結核病的敏感度僅為69.4%，同一研究中的巢式PCR法和家庭式普通PCR法[7]的診斷敏感度僅分別為79.2%和59.7%,特異度為100%，而本實驗若以培陽作為計算肺結核的金標準，非肺結核為陰性標準，SAT-TB診斷涂陰肺結核的敏感度為53.3%,特異度為88.2%。因此，與其他最新使用的分子生物學診斷技術相比，本研究用SAT-TB檢測BALF診斷涂陰肺結核的敏感度與最新使用的其他分子生物學技術中的家庭式普通PCR法相似，只能說，SAT-TB法檢測BALF能提供有價值的診斷敏感度及特異度。但是，在已有研究結果中發(fā)現(xiàn)SAT-TB檢測BALF對結核分枝桿菌的檢出率較低(見表2),在SAT-TB法陰性培陽患者臨床數(shù)據(jù)中，SAT-TB對肺結核的檢出率略高于Bactec MGIT 960培養(yǎng)法，但臨床上仍有約30%以上的培陽患者通過SAT-TB法無法檢出。究其原因，發(fā)現(xiàn)如下因素可能影響該項研究SAT-TB的檢測效率：第一：標本取出后放置的時間過久，在課題實施過程中將BALF取出、分裝等室溫下經歷的時間長達4 h以上，留取涂片熒光染色的BALF也需要放置一段時間，與痰液相比，室溫放置的時間較之過長，可能導致SAT-TB對標本中16s rRNA的檢出率降低；第二：臨床操作氣管鏡時對支氣管沖洗的部位BALF的量偏少，這些因素都可能導致對結核分枝桿菌的檢出率降低；第三：究其培陽而SAT-TB法陰性的比例中，且臨床診斷為肺結核者，筆者認為，Bactec MGIT 960培養(yǎng)法有其自身的優(yōu)點，只要達到一定的菌量則會在培養(yǎng)基中正常生長。而SAT-TB操作技術雖然污染率低，速度快，但因為RNA降解快，如果患者的菌量不多，而SAT-TB操作時間控制不當或者標本前處理后，如放在超聲破碎儀中留置時間過長，也可能造成SAT-TB檢出率下降，出現(xiàn)假陰性可能性增加。此次實驗標本量較少，若適當擴大標本量，預期會達到更加完善的實驗數(shù)據(jù)。

此外，此次實驗研究仍然發(fā)現(xiàn)了2例假陽性結果，因此分析在取BALF時容易通過內鏡消毒不嚴、標本運送等操作環(huán)節(jié)造成標本污染[8]；在該項技術的今后臨床使用中，以上所提及的因素是值得關注的。否則，可能限制該技術在臨床上的廣泛應用，降低其實際診斷價值。

綜上所述，從檢測時間上比較，SAT-TB的檢測速度明顯快于快速培養(yǎng)法；檢測結果與培養(yǎng)法的一致率達72.5%，也就是說SAT-TB能夠在最短的時間內提供準確率為72.5%的診斷結果；從表1、表2中可見： SAT-TB檢測結核分枝桿菌陽性例數(shù)比Bactec MGIT 960快速培養(yǎng)法的結核分枝桿菌多(20>15)。因此，SAT-TB的檢出率略高于培養(yǎng)法陽性檢出率(31.7%>23.8%)，敏感度高。有1例非結核分枝桿菌(龜-膿腫分支桿菌)肺病患者培養(yǎng)為陽性，但SAT-TB對標本中含有非結核分枝桿菌者檢測結果為陰性，以上實驗數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)：SAT-TB法優(yōu)于涂片法和Bactec MGIT 960培養(yǎng)法。而SAT-TB法含有非結核分枝桿菌者檢測結果陽性有2例，考慮操作過程存在污染。也說明培養(yǎng)法和SAT-TB法各有各自的優(yōu)點，而SAT-TB法更有其快速、敏感度高的顯著特點。

因此，本實驗表明SAT-TB檢測BALF是一項對涂陰肺結核患者快速、有價值的診斷方法之一。

[1] 肖和平.菌陰肺結核在結核病控制中的重要性[J].中華結核和呼吸雜志,2005,28(10):665-666.

[2] DINNES J, DEEKS J, KUNST H, et al. A systematic review of rapid diagnostic tests for the detection of tuberculosis infection[J]. Health Technol Assess, 2007,11(3):1-196.

[3] YANG Y C, LU P L, HUANG S C, et al. Evaluation of the Cobas TaqMan MTB test for direct detection of Mycobacterium tuberculosis complex in respiratory specimens[J]. J Clin Microbiol, 2011,49(3):797-801.

[4] SCOTT L E, MCCARTHY K,GOUS N, et al. Comparison of Xpert MTB/RIF with other nucleic acid technologies for diagnosing pulmonary tuberculosis in a highHIV prevalence setting:a prospective of study[J]. PLos Med,2011,8(7):e1001061

[5] KIM C H,WOO H,HYUN I G, et al. A comparison between the efficiency of the Xpert MTB/RIF assay and nested PCR in identifying Mycobacterium tuberculosis during routing clinical practice[J]. J Thorac Dis,2014,6(6):625-631.

[6] PALUD P L, CATTOIR V, MALBRUNY B, et al. Retrospective observational study of diagnostic accuracy of the Xpert MTB/RIF assay on fiberoptic bronchoscopy sampling for early diagnosis off smear-negative or sputum-scarce patients with suspected tuberculosis[J]. BMC Pulm Med,2014,14(1):137

[7] 范 琳,王 鵬,楊 妍,等.RNA恒溫擴增實時熒光檢測技術檢測支氣管肺泡灌洗液對涂陰肺結核的快速診斷價值[J].中國防癆雜志,2015,37(2):140-144.

曲妥珠單抗如何發(fā)揮Her2陽性乳腺癌的靶向治療作用?

曲妥珠單抗屬于靶向治療性藥物，乳腺癌細胞常常產生一種蛋白質——表皮生長因子受體2(英文名叫 HER2或ERBB2)，在表皮生長因子受體2作用下，乳腺癌細胞不斷分裂，腫瘤便不斷生長。因此，科學家希望設計一種抗體來阻斷表皮生長因子受體2，于是誕生了曲妥珠單抗。曲妥珠單抗被注射到乳腺癌患者體內后，抗體與乳腺癌細胞表面的表皮生長因子受體2結合，誘導抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用從而殺傷腫瘤細胞。另外曲妥珠單抗結合乳腺癌細胞表面的HER2受體后導致胞內信號傳導通路的抑制，乳腺癌細胞便停止增殖，腫瘤也就停止生長。

作者：佚名 來源：腫瘤資訊