丁麗娜，于 爍，傅志華，武 照，李乾鵬，陳英新

(吉林大學(xué)口腔醫(yī)院，吉林 長春130021)

口腔鱗狀細胞癌(OSCC)是最常見的口腔癌類型，占口腔惡性腫瘤的90%以上。在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中，免疫細胞和炎性反應(yīng)作為腫瘤微環(huán)境中的重要組成，起著關(guān)鍵的作用。Th17細胞以及其主要分泌的IL-17細胞因子不僅在炎癥和免疫中發(fā)揮作用，在炎癥相關(guān)的腫瘤疾病中也扮演著重要的角色。MMP-9是MMPs基質(zhì)明膠酶類的一種，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究通過免疫組化染色檢測IL-17和MMP-9的表達，分析二者之間的相關(guān)性及臨床意義，探討二者在口腔鱗癌中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

31例鱗癌標(biāo)本全部取自吉林大學(xué)口腔醫(yī)院2017年手術(shù)切除并經(jīng)石蠟包埋的組織；12例正常組織，其中6例來自于癌旁組織，6例來自智齒拔除患者。以上全部病例均經(jīng)過我院病理科確診。根據(jù)WHO病例分型,高分化鱗癌18例，中分化7例，低分化6例，共31例(男19例，女12例，年齡38-77歲，中位年齡60歲，≤60歲16例，>60歲15例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例，沒有轉(zhuǎn)移的9例，根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟腫瘤分期T1+T2 7例，T3+T4 24例)；所有鱗癌患者術(shù)前均未接受過放化療、激素等相關(guān)治療。該研究已取得患者及家屬的知情同意。

1.2 方法

IL-17多克隆抗體購買于Abcam公司，MMP-9單克隆抗體購買于北京中杉金橋生物有限公司，SP免疫組化試劑盒購買于福州邁新生物技術(shù)有限公司，按試劑盒說明操作。

1.3 結(jié)果判定

IL-17與MMP-9免疫組化陽性結(jié)果均為胞漿出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。在400倍視野下，隨機選8個染色效果較好的視野，雙盲法判定結(jié)果，根據(jù)細胞著色程度及陽性細胞率進行評分：無顯色計0分，淺黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；著色細胞占計數(shù)細胞百分率 ≤25%為0分，25%-50%為1分，51%-75%為2分，>75%為3分。兩項結(jié)果相加判定結(jié)果：0-2分(-)為陰性，3-4分(+)，5-6分為(++),(+～++)為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，采用χ2檢驗進行分析，指標(biāo)間相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn),以雙側(cè)P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-17、MMP-9的表達

IL-17在鱗癌組中腫瘤細胞的胞漿及周圍間質(zhì)細胞均可見陽性表達(如圖1)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，IL-17在鱗癌組的表達高于對照組，兩者之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(90.3%、58.3%；P<0.05)；IL-17在高、中、低分化鱗癌中的表達率經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(100%、85.7%、66.7%；P<0.05)；IL-17在鱗癌組中的表達與性別、年齡、TNM分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

MMP-9在鱗癌組織中主要以腫瘤細胞胞漿表達為主,部分間質(zhì)內(nèi)也可見,癌巢的邊緣實質(zhì)細胞多見,可呈散在分布(如圖2)。經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)，MMP-9在鱗癌組的表達高于對照組，兩者表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(80.6%、16.7%；P<0.05)；有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MMP-9表達率有顯著性差異(90.9%、55.6%；P<0.05)；MMP-9在鱗癌中的表達與年齡、性別及腫瘤分化程度及TNM分期差異均無顯著性差異(P>0.05)。見表1、表2。

圖1IL-17在口腔鱗癌的表達(×200)圖2MMP-9在口腔鱗癌的表達(×200)

表1 IL-17、MMP-9在口腔鱗癌和正常組織中的表達 例(%)

2.2 IL-17、MMP-9相關(guān)性分析

IL-17、MMP-9 陽性表達的強度以平均光密度值的大小來表示，在口腔鱗癌中，IL-17、MMP-9二者的MD值分別是(0.327±0.080；0.245±0.065)?？谇击[癌組IL-17與MMP-9的表達呈正相關(guān)(r=0.373，P<0.05)。

表2 口腔鱗癌中IL-17、MMP-9的表達與各臨床特征的關(guān)系 例(%)

注：P值采用Fisher精確檢驗。

3 討論

口腔鱗狀細胞癌的發(fā)病機制是復(fù)雜的，據(jù)研究顯示，腫瘤微環(huán)境(TME)中的炎癥反應(yīng)可能在口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展中起作用[1]。細胞因子、趨化因子、前列腺素、活性氧和氮物質(zhì)作為TME中炎癥環(huán)境的一部分，已被證明有助于癌癥的起始，促進其侵襲和轉(zhuǎn)移[1,2]。許多流行病學(xué)和分子生物學(xué)研究也表示，炎癥極大地增加了癌癥的風(fēng)險。慢性炎癥可誘導(dǎo)持續(xù)的組織損傷，并改變組織微環(huán)境中存在的炎癥細胞和細胞因子。已知IL-17在包括腫瘤相關(guān)炎癥的炎癥中起關(guān)鍵作用[3,4]。圖2為鱗癌患者HE染色圖片，發(fā)現(xiàn)在癌細胞周圍有大量炎性細胞的浸潤，說明口腔鱗癌的發(fā)生與炎癥有著密切的關(guān)系。IL-17在乳腺癌，卵巢癌，胃癌和肝癌中與對照組織相比均檢測到IL-17陽性細胞的增加[5-8]。在本研究中，IL-17在鱗癌組的表達率與對照組存在差異，并且具有統(tǒng)計學(xué)意義(90.3%、58.3%；P<0.05),初步推斷，IL-17在口腔鱗癌中也扮演著重要角色。IL-17在鱗癌中的表達與分化程度的相關(guān)提示IL-17在口腔癌的發(fā)展中起到一定作用。

在炎癥及腫瘤的發(fā)生過程中，炎癥介質(zhì)被大量釋放，造成細胞外基質(zhì)的溶解及基膜的破壞，進一步導(dǎo)致炎性細胞的浸潤以及腫瘤的轉(zhuǎn)移。而溶解細胞外基質(zhì)的酶與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)有關(guān)[9,10]。MMP-9是MMPs基質(zhì)明膠酶類的一種。普遍認為MMP-9可以降解幾乎所有的細胞外基質(zhì)成分。MMP-9在多種腫瘤中如胃癌等都有不同程度的表達[11,12]。有學(xué)者[13,14]發(fā)現(xiàn)，MMP-9在口腔鱗癌組織中表達，并且表達與血管密度相關(guān)，從而推斷MMP-9 可促進口腔鱗癌血管生成，在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。本研究顯示，MMP-9在口腔鱗癌組織中的表達與對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(80.6%、16.7%；P<0.05),同其他研究相一致[15,16]；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達率要明顯低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(90.9%、55.6%；P< 0.05)，從而推測MMP-9的表達可能與腫瘤轉(zhuǎn)移能力相關(guān)，腫瘤中的MMP-9的表達不利于患者壽命的延長。但在本研究中有一部分鱗癌組織表達較弱，推斷并不是所有的腫瘤細胞都具有轉(zhuǎn)移潛能。

目前研究認為IL-17與炎性反應(yīng)及免疫相關(guān)疾病有密切關(guān)系[17]。此外，炎癥中IL-17的活性可能與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的組織破壞有關(guān)[18]。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IL-17通過MMP-9促進腫瘤的擴散或誘導(dǎo)血管生成[19]。本實驗應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)分析，IL-17與MMP-9兩者具有相關(guān)性(r=0.373，P<0.05)。由此得出，IL-17與MMP-9在口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。有學(xué)者指出，IL-17誘導(dǎo)IL-6產(chǎn)生，IL-6反過來激活致癌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(Stat)3，從而進一步促進促生長因子和促血管生成基因的表達。Th17反應(yīng)可以部分通過IL-6-Stat3途徑促進腫瘤生長[20]?？梢钥隙ǖ氖窃诳谇击[癌中IL-17與MMP-9在鱗癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。那么在口腔鱗癌中，IL-17與MMP-9之間的作用是如何發(fā)揮的？是否具有相同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)？還需要進一步探索。

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