國(guó) 超，賴 泳

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

美洲大蠊（Periplaneta americana），俗稱“蟑螂”，屬蜚蠊目蜚蠊科大蠊屬，當(dāng)代藥理學(xué)及臨床研究顯示其具有較好的抗腫瘤、修復(fù)破損黏膜、保護(hù)心肌細(xì)胞、增強(qiáng)免疫力及抗炎作用〔1-6〕，美洲大蠊提取物在體外具有抗氧化能力，然而，其在體內(nèi)的抗氧化效果卻未見(jiàn)報(bào)道〔7〕。本實(shí)驗(yàn)研究了美洲大蠊醇提物體內(nèi)的抗疲勞、抗缺氧作用，旨在為研究美洲大蠊的藥理作用機(jī)制提供資料，為美洲大蠊的食用和藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)昆明種小鼠240只，雌雄各半，體重（20±2）g，昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（湘）2013-0004。

1.2 主要試劑及實(shí)驗(yàn)器材美洲大蠊提取物由大理大學(xué)何正春老師提供，美洲大蠊購(gòu)自彌渡縣美洲大蠊養(yǎng)殖中心。取美洲大蠊藥材粉末，用乙醇、水依次加熱回流提取2次，每次2 h，濾過(guò)，回收溶劑，濃縮，得乙醇提取物（美洲大蠊提取物Ⅱ）、水提取物（美洲大蠊提取物Ⅰ），實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水將醇提物配成所需濃度。實(shí)驗(yàn)所用測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。MTX-150低溫高速離心機(jī)（TOMY，日本）；電熱三用水箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠有限責(zé)任公司）；756 MC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；電子天平（sartorius德國(guó)）；恒溫水浴槽；玻璃游泳箱（50 cm×50 cm×40 cm，自制）。

1.3 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠耐常壓缺氧試驗(yàn)取l8～22 g小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，其中3組分別灌服高劑量［80 mg∕（kg·d）］、中劑量［40 mg∕（kg·d）］、低劑量［20 mg∕（kg·d）］的美洲大蠊醇提物的生理鹽水溶液；空白對(duì)照組灌服同體積的生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照組選用心得安（鹽酸普萘洛爾）作為陽(yáng)性藥〔8〕。1 次∕d，持續(xù)14 d，末次給藥30 min后，將小鼠放入盛有10 g鈉石灰的125 mL廣口瓶中（瓶口涂有凡士林），加蓋密封，以無(wú)呼吸（小鼠胸部不起伏）為指標(biāo)，記錄小鼠存活時(shí)長(zhǎng)〔9〕。

1.4 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠的力竭游泳試驗(yàn)取l8～22 g小鼠50只，雌雄各半，分組同“1.3”項(xiàng)。1 次∕d，持續(xù)14 d，末次給藥30 min后，將小鼠置入（30±1）℃、50 cm×50 cm×40 cm玻璃缸內(nèi)，記錄各小鼠自入水開(kāi)始到力竭（小鼠頭部沉入水中10 s無(wú)法浮出水面）溺死的時(shí)長(zhǎng)。

1.5 美洲大蠊醇提物對(duì)正常小鼠免疫器官指數(shù)的影響取l8～22g小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，其中3組分別灌服高劑量［80 mg∕（kg·d）］、中劑量［40 mg∕（kg·d）］、低劑量［20 mg∕（kg·d）］的美洲大蠊醇提物的生理鹽水溶液；空白對(duì)照組灌服同體積的生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照灌服同體積左旋咪唑［50 mg∕（kg·d）］的生理鹽水。1次∕d，持續(xù)14 d。胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的計(jì)算方法為不同分組小鼠試驗(yàn)結(jié)束后小鼠稱重，然后剖取胸腺、脾臟，用天平稱濕重并計(jì)算臟器指數(shù)。

1.6 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠碳粒廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)（校正）α的影響取l8～22 g小鼠50只，雌雄各半，分組同“1.5”項(xiàng)。1次∕d，持續(xù)14 d。末次給藥后1 h，取印度墨汁，反復(fù)振動(dòng)至搖勻，用1%明膠液稀釋4倍。于鼠尾靜脈注入稀釋的墨汁0.01 mL∕g。注入墨汁后30 s及6 min用取血吸管從小鼠眼內(nèi)眥靜脈叢取血0.025 mL，立刻吹入0.1%碳酸鈉（Na2CO3）溶液2 mL中，并反復(fù)吸入、吹出，充分洗出吸管壁附著的血液，校零，于756分光光度計(jì)上675 nm處比色〔10〕，按下式計(jì)算吞噬指數(shù)K及吞噬系數(shù)α：K=（1gC1-lgC2）∕（T2-T1）；α=W*K1∕3∕WLS。公式中C為血中碳粒濃度，T為時(shí)間，W為體質(zhì)量，WLS為肝、脾質(zhì)量之和。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示，用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠耐常壓缺氧實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組相比，通過(guò)連續(xù)14 d的不同劑量美洲大蠊醇提物的服用，各組小鼠耐常壓缺氧存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)，尤以中、高劑量組延長(zhǎng)較為顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠耐常壓缺氧存活時(shí)間的影響（±s，n=10）

表1 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠耐常壓缺氧存活時(shí)間的影響（±s，n=10）

注：與空白對(duì)照組比較*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較#P＜0.05。

組別 劑量∕（mg∕kg） 延長(zhǎng)率∕%—13.40 0.50 16.70 33.03空白對(duì)照組普萘洛爾組美洲大蠊低劑量組美洲大蠊中劑量組美洲大蠊高劑量組— 7 2 0 40 80存活時(shí)間∕min 37.62±4.3 42.64±3.7*37.81±4.4 43.88±4.9*50.02±4.2*#

2.2 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠游泳能力的影響與空白對(duì)照組相比，通過(guò)連續(xù)l4 d的不同劑量美洲大蠊醇提物的服用，各組的游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)，LDH活性升高，尤以中、高劑量組提高更為顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠游泳時(shí)間及耐力運(yùn)動(dòng)小鼠LDH活性的影響（±s，n=10）

表2 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠游泳時(shí)間及耐力運(yùn)動(dòng)小鼠LDH活性的影響（±s，n=10）

注：與空白對(duì)照組比較*P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較#P＜0.05。

LDH∕（U∕10 mL）3.31±0.42 4.18±0.33 3.56±0.12 4.42±0.18*4.93±0.09*#組別空白對(duì)照組普萘洛爾組美洲大蠊低劑量組美洲大蠊中劑量組美洲大蠊高劑量組劑量∕（mg∕kg）— 7 2 0 40 80游泳時(shí)間∕min 298.35±105.26 357.89±92.15*306.64±98.59 399.36±88.57*#420.75±102.46*#

2.3 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響美洲大蠊醇提物高、中、低劑量組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均高于空白對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 美洲大蠊對(duì)小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響（±s，n=10）

表3 美洲大蠊對(duì)小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響（±s，n=10）

注：與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，與空白對(duì)照組比較△P＜0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組比較#P＜0.05。

胸腺指數(shù)∕（mg∕10 g）12.43±1.13 22.61±.2.09*15.85±2.37 21.63±1.45*28.37±2.90*△#組別空白對(duì)照組左旋咪唑組美洲大蠊低劑量組美洲大蠊中劑量組美洲大蠊高劑量組劑量∕（mg∕kg）—50 20 40 80脾臟指數(shù)∕（mg∕10 g）25.72±3.46 35.75±7.65*30.34±7.52 33.32±9.68*42.47±9.77*#

2.4 美洲大蠊醇提物對(duì)小鼠碳粒廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)（校正）α的影響與空白對(duì)照組相比，通過(guò)連續(xù)l4 d的不同劑量美洲大蠊醇提物的服用，各組小鼠碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)均增大，尤以中、高劑量組增大較為顯著（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 美洲大蠊對(duì)小鼠碳粒廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)（校正）α的影響（±s，n=10）

表4 美洲大蠊對(duì)小鼠碳粒廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)（校正）α的影響（±s，n=10）

注：與空白對(duì)照組比較*P＜0.05，與空白對(duì)照組比較△P＜0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組比較#P＜0.05。

吞噬指數(shù)（校正）α 4.823±0.859 17.637±3.059*5.538±1.453 9.893土1.933*24.743±2.564*△#組別空白對(duì)照組左旋咪唑組美洲大蠊低劑量組美洲大蠊中劑量組美洲大蠊高劑量組劑量∕（mg∕kg）—100 20 40 80碳粒廓清指數(shù)K 0.044±0.016 0.064±0.025*0.046±0.016 0.057±0.039*0.081±0.011*#

3 討論

美洲大蠊具有抗肝炎、抗腫瘤、抗菌、抗HIV病毒、提升機(jī)體免疫力、消炎鎮(zhèn)痛、促進(jìn)血管增生、組織修復(fù)等作用〔10-14〕。疲勞是機(jī)體的一種復(fù)雜生理化學(xué)變化過(guò)程，它既標(biāo)志著機(jī)體原有工作能力的暫時(shí)下降，又是機(jī)體發(fā)展到疾病狀態(tài)的一個(gè)征兆。若疲勞得不到及時(shí)緩解將會(huì)逐漸積累，最終導(dǎo)致過(guò)度疲勞，使機(jī)體發(fā)生內(nèi)分泌紊亂、免疫力下降，甚至出現(xiàn)器質(zhì)性病變。運(yùn)動(dòng)耐力的提高是抗疲勞能力增強(qiáng)的直接體現(xiàn)〔15〕。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，美洲大蠊能夠顯著延長(zhǎng)小鼠游泳時(shí)間產(chǎn)生抗疲勞作用。與空白對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn)，美洲大蠊給藥組能明顯延長(zhǎng)小鼠游泳時(shí)間，中劑量組與高劑量組和空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與陽(yáng)性對(duì)照組比較高劑量組延長(zhǎng)游泳時(shí)間有顯著差異。說(shuō)明美洲大蠊醇提物能提升小鼠抗疲勞能力。

缺氧對(duì)機(jī)體是一種厲性刺激，影響機(jī)體代謝，特別是影響機(jī)體的氧化供能，最終會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的心腦等重要器官缺氧、缺少供能，最后死亡〔16〕。此外，小鼠斷頭后，因?yàn)楣┭K止，在短期內(nèi)腦中原有的血液和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)尚能使腦功能維持短時(shí)間，小鼠顯示出有規(guī)律地張口喘氣，以喘氣時(shí)間為指標(biāo)可觀察藥物對(duì)腦缺血的保護(hù)作用〔17〕。在常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，美洲大蠊中劑量組和高劑量組能顯著延長(zhǎng)小鼠在常壓缺氧條件下的存活時(shí)間；與陽(yáng)性對(duì)照組比較顯示，高劑量給藥組能顯著延長(zhǎng)小鼠在常壓缺氧條件下的存活時(shí)間。凡能使腦耗氧減少的藥物均能延長(zhǎng)小鼠喘氣時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)中美洲大蠊醇提物能延長(zhǎng)小鼠斷頭張口喘息時(shí)長(zhǎng)。

碳粒廓清指數(shù)表示在一定范圍內(nèi)，小鼠對(duì)進(jìn)入機(jī)體碳粒的清除速率，是非特異性免疫功能的指標(biāo)〔18〕。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)也作為評(píng)價(jià)小鼠免疫力的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠給藥后的臟器指數(shù)和碳粒清除率進(jìn)行了檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)表明各治療組吞噬指數(shù)K及吞噬系數(shù)α均增高（P＜0.05），中劑量組和高劑量組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明均能增強(qiáng)造模小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，提示美洲大蠊能刺激免疫器官的細(xì)胞增生，使免疫器官指數(shù)升高，從而提高機(jī)體的免疫功能。不同劑量美洲大蠊給藥組小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)也高于空白對(duì)照組，中劑量組和高劑量組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示美洲大蠊醇提物可以通過(guò)提升細(xì)胞免疫功能、增加免疫器官的質(zhì)量等提高機(jī)體的免疫功能。

綜上所述，小鼠灌服美洲大蠊醇提物后提高了小鼠機(jī)體內(nèi)環(huán)境對(duì)氧代謝過(guò)程的調(diào)節(jié)機(jī)能，從而加強(qiáng)了小鼠的低氧游泳耐力，在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性，顯著改善小鼠抗疲勞作用，同時(shí)也增強(qiáng)了機(jī)體的免疫能力，由此認(rèn)為美洲大蠊具有廣闊的應(yīng)用前景。

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