劉夢(mèng)志 ， 姚龍泉 ， 羅桂燕 ， 王 瑩 ， 劉寶山

(1. 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院 ，遼寧 沈陽(yáng) 110866 ； 2.沈陽(yáng)信科農(nóng)業(yè)技術(shù)有限公司 ，遼寧 沈陽(yáng) 110161)

豬鏈球菌病是由鏈球菌引起的一種豬多系統(tǒng)感染的疾病，在豬場(chǎng)常見(jiàn)多發(fā)。該病一年四季均可發(fā)生，潮濕多雨季節(jié)多發(fā)。環(huán)境衛(wèi)生條件差、消毒措施不力、營(yíng)養(yǎng)不良、豬舍濕度過(guò)高等因素是該病高發(fā)的主要誘因。臨床上除出現(xiàn)急性敗血癥、腦膜炎、肺炎、心內(nèi)膜炎等癥狀外，還引起現(xiàn)在豬場(chǎng)中常見(jiàn)的關(guān)節(jié)炎[1-2]。這種鏈球菌性關(guān)節(jié)炎多發(fā)生于保育豬和育肥豬，作者在臨床診療中確診1例因斷尾后消毒措施不嚴(yán)引起哺乳仔豬后肢癱瘓、脊柱膿腫的鏈球菌感染，具有鏈球菌感染的特殊性。報(bào)告如下。

1 豬場(chǎng)管理保健

仔豬出生正常，1日齡1頭份偽狂犬疫苗滴鼻，3日齡補(bǔ)鐵剪牙。7日齡斷尾，斷尾后僅用2%高錳酸鉀溶液涂擦消毒。

2 發(fā)病情況

15～20日齡仔豬出現(xiàn)后肢跛行、癱瘓，前肢正常，常拖動(dòng)后肢爬行，體溫前期正常，后期發(fā)熱，體溫40 ℃左右，病程1～2周，發(fā)病豬80%死亡。無(wú)其他可見(jiàn)臨床癥狀。

3 剖檢變化

剖檢大多數(shù)器官組織正常，僅見(jiàn)肺臟有輕微出血點(diǎn)，胸腔內(nèi)個(gè)別脊椎關(guān)節(jié)的外側(cè)出現(xiàn)明顯的腫大、突起和增生、質(zhì)地較軟，用注射器可吸出淺黃綠色液體，切開(kāi)后可見(jiàn)有豆腐渣樣膿液(見(jiàn)中插彩版圖1)，剖檢兩例均相似，只是膿腫的大小程度稍有不同。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 微生物學(xué)診斷 無(wú)菌采取膿液樣品，接種鏈球菌鑒別培養(yǎng)基—BETA-SSA瓊脂，37 ℃ 培養(yǎng)18 h，可見(jiàn)特征性的小菌落，染色鏡檢多為革蘭陽(yáng)性雙球菌，偶爾有短鏈出現(xiàn)(見(jiàn)中插彩版圖2)。

4.2 PCR診斷 根據(jù)豬鏈球菌SC19株延伸因子EF-Tu的基因序列CP020863.1，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性的檢測(cè)引物(StuF：5′-TTCTATCGATGCTGCTCCAG AAGAGCGCGAAC-3′，StuR：5′-AGAAGGA TGTGCTCACGAGTTTGTGGCATTGG-3′)，以煮沸的無(wú)菌采取的膿液樣品為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增體系為T(mén)aqPCR Mixer 5 μL，引物(10 nmol/μL)各1 μL，ddH2O 2 μL，模板1 μL，擴(kuò)增條件為94 ℃預(yù)變性3 min后，94 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，35個(gè)循環(huán)后72 ℃延伸2 min。擴(kuò)增產(chǎn)物采用2%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析，結(jié)果擴(kuò)增出221 bp的特定大小的條帶(圖3)。將PCR產(chǎn)物送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測(cè)序，測(cè)序結(jié)果進(jìn)行BLAST比對(duì)，比對(duì)結(jié)果顯示擴(kuò)增片段與豬鏈球菌SC19株的EF-Tu序列一致，相似度為97%，為鏈球菌特異性的EF-Tu序列。

圖3 PCV2 ORF3基因的PCR擴(kuò)增