鄧 菲 ， 孫 進(jìn) ， 王紅霄

(1.沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院 ， 遼寧 沈陽(yáng) 117004 ； 2.華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司 ， 河北 石家莊 050041)

加米霉素(Gamithromycin)是一種新型的半合成大環(huán)內(nèi)酯類動(dòng)物專用抗生素，由法國(guó)梅里亞公司研發(fā)，通過(guò)抑制細(xì)菌RNA依賴性蛋白合成而起抑菌和殺菌作用，對(duì)溶血曼氏菌、多殺性巴氏桿菌、睡眠嗜血桿菌等引起牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRD)的病原菌有很強(qiáng)的抗菌活性，對(duì)支原體、馬鏈球菌、馬紅球菌、胸膜肺炎放線菌等的抗菌活性也較強(qiáng)。2007年9月歐盟批準(zhǔn)加米霉素注射液(Zactran)上市，主要用于治療非泌乳牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRD)[1～3]。加米霉素具有單次給藥、吸收迅速、生物利用度高、低殘留、安全高效等優(yōu)點(diǎn)，在養(yǎng)殖動(dòng)物呼吸系統(tǒng)感染性疾病防治中具有廣闊的應(yīng)用前景。按照農(nóng)業(yè)部1247號(hào)公告要求，華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司于2016年4月至2016年10月對(duì)該公司生產(chǎn)的加米霉素注射液開展了治療牛呼吸系統(tǒng)疾病(BRD)的Ⅲ期臨床試驗(yàn)[4]。

1 試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

本試驗(yàn)實(shí)施時(shí)間為2016年4月至2016年10月，試驗(yàn)病例來(lái)自于四川省廣安市某牛場(chǎng)。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)藥物 加米霉素注射液，華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司提供，自主研發(fā)。對(duì)照藥：加米霉素注射液(ZACTRAN?)，梅里亞有限公司生產(chǎn)。

2.2 病例選擇與分組

2.2.1 病例入選標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)自然發(fā)病牛先進(jìn)行全面的臨床檢查，測(cè)量體溫(直腸溫度)，按標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其精神狀態(tài)和呼吸癥狀進(jìn)行評(píng)分。

病牛入選試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：(1)自然發(fā)病牛；(2)至少15日齡，品種、性別、體重不限；(3)表現(xiàn)出典型的牛呼吸道疾病(BRD)癥狀，同時(shí)滿足：精神沉郁評(píng)分≥1；呼吸癥狀評(píng)分≥1，直腸溫度≥40.0 ℃；(4)采集病牛鼻拭子，可檢出引起B(yǎng)RD的病原菌(多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、睡眠嗜組織菌等)。

2.2.2 病例剔除標(biāo)準(zhǔn) (1)患有非BRD相關(guān)疾病、受傷、過(guò)度虛弱；(2)試驗(yàn)開始前6個(gè)月內(nèi)接種過(guò)BRD菌苗，或在試驗(yàn)前30日內(nèi)接受過(guò)抗菌藥治療；產(chǎn)奶供人食用或試驗(yàn)后90日內(nèi)將產(chǎn)奶供人食用的牛，或預(yù)計(jì)在2個(gè)月內(nèi)分娩可能生產(chǎn)人用乳品的懷孕母牛。

2.2.3 病例分組與給藥 篩選出60例符合要求的BRD病牛。根據(jù)牛耳號(hào)，將病牛隨機(jī)分配到2個(gè)組，每組30頭病牛，要求兩組病牛的發(fā)病嚴(yán)重程度基本一致。試驗(yàn)分組與給藥信息見表1。

表1 試驗(yàn)分組與給藥

注：在試驗(yàn)0 d對(duì)病牛進(jìn)行稱重，計(jì)算劑量并給藥

2.3 試驗(yàn)周期 所有病牛的試驗(yàn)周期均為14 d。即從給藥0 d至給藥后14 d，每日對(duì)病牛進(jìn)行檢查。

2.4 試驗(yàn)病例淘汰 給藥后至第1天觀察前，病牛出現(xiàn)死亡，需退出本試驗(yàn)，但不判為治療無(wú)效；判定為治療無(wú)效的病牛，需從本試驗(yàn)中淘汰，并及時(shí)給予其他藥物治療；試驗(yàn)病牛出現(xiàn)與BRD無(wú)關(guān)的不良狀況(如受傷等)時(shí)，由試驗(yàn)負(fù)責(zé)人或主治獸醫(yī)決定是否從本研究中淘汰。

2.5 觀察指標(biāo)

2.5.1 臨床檢查 精神狀態(tài)與呼吸癥狀：從給藥0 d至給藥14 d，每天觀察病牛，按標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其精神狀態(tài)、呼吸癥狀進(jìn)行評(píng)分。體溫：從給藥0 d至給藥后14 d，每天在相同時(shí)間測(cè)量病牛的體溫(直腸溫度)。體重：在試驗(yàn)0 d，測(cè)量病牛體重，并根據(jù)病牛體重計(jì)算其給藥劑量。注射部位反應(yīng)：從給藥0 d至給藥后14 d，每天觀察病牛注射部位反應(yīng)。

2.5.2 微生物學(xué)檢查 在給藥前(給藥0 d)，采集9頭病牛鼻拭子，送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行BRD相關(guān)病原菌(多殺性巴氏桿菌、溶血性曼氏桿菌、睡眠嗜血桿菌等)分離鑒定。在試驗(yàn)過(guò)程中，若有病牛死亡，需對(duì)尸體進(jìn)行剖檢，同時(shí)采集肺組織進(jìn)行BRD相關(guān)病原菌分離鑒定。在試驗(yàn)過(guò)程中，若病牛因BRD治療無(wú)效需淘汰，在淘汰當(dāng)天需采集該病牛鼻拭子進(jìn)行BRD相關(guān)病原菌分離鑒定[5]。

2.5.3 病理剖檢 試驗(yàn)過(guò)程中所有死亡的病牛均要進(jìn)行病理剖檢，對(duì)病變組織進(jìn)行拍照；同時(shí)采集肺組織進(jìn)行BRD相關(guān)病原菌分離鑒定。

2.6 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

2.6.1 無(wú)效 (1)從給藥2 d至給藥后14 d，病牛連續(xù)2日：精神沉郁評(píng)分≥1，且呼吸癥狀評(píng)分≥1，且直腸溫度≥40 ℃，判定為治療無(wú)效；(2)從給藥2 d至給藥后14 d，病牛由于BRD病情嚴(yán)重，需從試驗(yàn)中退出并給予其他藥物治療；或由于BRD死亡，判定為治療無(wú)效。

2.6.2 有效 從給藥2 d至給藥后14 d，病牛未被判定為治療無(wú)效，但精神、呼吸、直腸溫度三項(xiàng)指標(biāo)未完全恢復(fù)正常，判定為治療有效。

2.6.3 治愈 從給藥2 d至給藥后14 d，病牛精神、呼吸、直腸溫度均恢復(fù)正常，且連續(xù)7 d未出現(xiàn)病情反復(fù)，判定為治愈。

2.7 不良反應(yīng) 從給藥0 d至給藥后14 d，每日對(duì)病牛進(jìn)行觀察，對(duì)病牛出現(xiàn)的不良反應(yīng)進(jìn)行評(píng)估，并記錄。

3 結(jié)果與分析

3.1 試驗(yàn)病牛入選與分組 按試驗(yàn)病牛入選標(biāo)準(zhǔn)，從上述70余頭BRD病牛中遴選60頭開展試驗(yàn)。根據(jù)病牛耳號(hào)，將它們隨機(jī)分配到受試藥物組(Ⅰ組)和對(duì)照藥物組(Ⅱ組)，每組30頭。病牛的年齡和體重統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。平均年齡為8月齡，平均體重為198 kg，兩組病牛的年齡與體重比較差異均不顯著(P>0.05)。

3.2 試驗(yàn)病牛臨床表現(xiàn) 觀察所有病牛在給藥0 d(給藥前)至給藥14 d的臨床表現(xiàn)，測(cè)量其體溫(直腸溫度)，按標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其精神狀態(tài)、呼吸癥狀進(jìn)行評(píng)分。

表2 試驗(yàn)病牛年齡與體重統(tǒng)計(jì)結(jié)果

注：組間數(shù)據(jù)比較，具相同大寫字母表示差異不顯著(P>0.05)、具不同大寫字母表示差異顯著(P≤0.05)

3.2.1 試驗(yàn)病牛體溫測(cè)量結(jié)果 從給藥0 d至給藥14 d，每日在相同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量病牛體溫(直腸溫度)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果見中插彩版圖1。結(jié)果可見，給藥前(給藥0 d)所有病牛均存在發(fā)熱癥狀，體溫(直腸溫度)均在40℃以上。

統(tǒng)計(jì)分析病牛的體溫情況，組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)：無(wú)論受試藥物組(Ⅰ組)還是對(duì)照藥物組(Ⅱ組)，給藥1 d至給藥14 d的體溫均顯著降低于給藥0 d(給藥前)的體溫(P≤0.05)；組間比較發(fā)現(xiàn)：給藥前(給藥0 d)兩組病牛的體溫?zé)o顯著差異(P>0.05)，給藥1 d至給藥后14 d，兩組病牛的體溫同樣無(wú)顯著差異(P>0.05)。

3.2.2 試驗(yàn)病牛精神狀態(tài)評(píng)分結(jié)果 從給藥0 d至給藥后14 d，每日觀察病牛的精神狀態(tài)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果見中插彩版圖2。

結(jié)果顯示，兩組病牛在給藥0 d(給藥前)均有明顯的精神沉郁表現(xiàn)。受試藥物組(Ⅰ組)精神狀態(tài)1分的病牛比例為53.3%(16/30)，精神狀態(tài)2分的病牛比例為46.7%(14/30)；對(duì)照藥物組(Ⅱ組)精神狀態(tài)1分的病牛比例為56.7%(17/30)，精神狀態(tài)2分的病牛比例為43.3%(13/30)。

統(tǒng)計(jì)分析病牛的精神狀態(tài)評(píng)分，組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn)：無(wú)論受試藥物組(Ⅰ組)還是對(duì)照藥物組(Ⅱ組)，給藥1 d至給藥后14 d的精神狀態(tài)評(píng)分均顯著降低于給藥0 d(給藥前)的精神狀態(tài)評(píng)分(P≤0.05)；組間比較發(fā)現(xiàn)：給藥前(給藥0 d)兩組病牛的精神狀態(tài)評(píng)分無(wú)明顯差異(P>0.05)，給藥1 d至給藥后14 d，兩組病牛的精神狀態(tài)評(píng)分也無(wú)明顯差異(P>0.05)。

3.2.3 試驗(yàn)病牛呼吸癥狀評(píng)分結(jié)果 從給藥0 d至給藥后14 d，每日觀察病牛的呼吸癥狀。統(tǒng)計(jì)結(jié)果見中插彩版圖3。

上述結(jié)果顯示，給BRD病牛單次皮下注射推薦劑量的受試藥物(華北制藥生產(chǎn)的加米霉素注射液)和對(duì)照藥物(梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液)，均可快速有效地改善病牛的發(fā)熱癥狀，使其體溫恢復(fù)正常；同樣也可快速有效地改善病牛呼吸急促、咳嗽、流鼻液等呼吸困難癥狀；病牛的精神狀態(tài)也能得到快速恢復(fù)。兩藥比較，它們對(duì)BRD病牛臨床癥狀的改善效果基本相當(dāng)。

3.3 注射部位反應(yīng) 從給藥0 d至給藥后14 d，每天觀察病牛皮下注射部位(肩前部)的反應(yīng)情況。結(jié)果可見，所有病牛的皮下注射部位均未出現(xiàn)堅(jiān)實(shí)、水腫、疼痛等刺激反應(yīng)。

3.4 試驗(yàn)病牛鼻拭子微生物學(xué)檢查結(jié)果

3.4.1 試驗(yàn)病牛給藥前鼻拭子病原菌檢測(cè)結(jié)果 數(shù)據(jù)可見，5頭病牛檢出了多殺巴氏桿菌(5/9，55.6%)；3頭病牛檢出了溶血曼氏桿菌(3/9，33.3%)；2頭病牛檢出了牛支原體(2/9，22.2%)；3頭病牛檢出了肺炎鏈球菌(3/9，33.3%)。另外，還從一些病牛鼻拭子分離出了金黃色葡萄球菌(2/9，22.2%)、大腸桿菌(4/9，44.4%)、肺炎克雷伯菌(2/9，22.2%)、芽孢桿菌(1/9，11.1%)等，沒有檢出睡眠嗜血桿菌(0/9，0%)。

表3 給藥前(給藥0天)部分試驗(yàn)病牛鼻拭子病原菌檢出結(jié)果統(tǒng)計(jì)

注：給藥前采集了9頭試驗(yàn)病牛鼻拭子做病原菌檢測(cè)

3.4.2 治療無(wú)效試驗(yàn)病牛鼻拭子病原菌檢測(cè)結(jié)果 試驗(yàn)中(給藥1 d至給藥后14 d)，Ⅰ組、Ⅱ組各有3頭病牛被淘汰，均判定為治療無(wú)效。

表4 給藥后治療無(wú)效病牛鼻拭子病原菌分離鑒定結(jié)果統(tǒng)計(jì)

注：Ⅰ組和Ⅱ組各有3頭病牛被淘汰，判定為治療無(wú)效

數(shù)據(jù)顯示，Ⅰ 組和Ⅱ 組治療無(wú)效病牛鼻拭子中均未檢出多殺巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、牛支原體、肺炎克雷伯菌，也未檢出睡眠嗜血桿菌。但卻分離出了肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、芽孢桿菌等。

上述結(jié)果顯示，給BRD病牛單次皮下注射推薦劑量的受試藥物(華北制藥生產(chǎn)的加米霉素注射液)和對(duì)照藥物(梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液)，對(duì)牛呼吸道感染的多殺巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、牛支原體等病原菌有很好的清除作用；而對(duì)大腸桿菌等不敏感菌的清除作用有限。

3.5 試驗(yàn)病牛死亡及剖檢情況 從用藥0 d至用藥后14 d，未出現(xiàn)試驗(yàn)病牛死亡情況，存活率為100%。因此未對(duì)試驗(yàn)病牛實(shí)施剖檢。

3.6 受試藥和對(duì)照藥療效比較 給藥0 d至給藥后14 d期間，綜合考察各病牛的體溫、精神狀態(tài)、呼吸癥狀等臨床表現(xiàn)，按標(biāo)準(zhǔn)分別判定各試驗(yàn)病牛給予受試藥物和對(duì)照藥物后的療效。統(tǒng)計(jì)兩組病牛的治愈率、有效率和無(wú)效率，結(jié)果見表5。

表5 兩組試驗(yàn)病牛的治療結(jié)果統(tǒng)計(jì) (n=30)

數(shù)據(jù)顯示，給BRD病牛單次皮下注射推薦劑量的受試藥物(華北制藥生產(chǎn)的加米霉素注射液)和對(duì)照藥物(梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液)，均具有良好的治療效果。受試藥和對(duì)照藥對(duì)BRD的療效相當(dāng)，治愈率和有效率均達(dá)到90%。

3.7 不良反應(yīng) 從給藥第0天至給藥后第14天，每天觀察試驗(yàn)病牛的不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果所有試驗(yàn)病牛均未出現(xiàn)BRD癥狀之外的異常表現(xiàn)和體征(如呼吸急劇加快，心跳明顯升高，可視黏膜水腫等過(guò)敏反應(yīng)體征；嘔吐、腹瀉等病癥)；更未出現(xiàn)死亡情況。

4 結(jié)論

4.1 華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液對(duì)牛呼吸道疾病(BRD)有良好治療效果。按推薦劑量(6 mg/kg體重)給BRD病牛單次皮下注射，給藥1 d后即可顯著改善病牛發(fā)熱、精神沉郁，呼吸困難等癥狀(P≤0.05)，給藥4～5 d后病牛即可恢復(fù)正常，治療有效率可達(dá)90%，與梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液療效相當(dāng)(P>0.05)。

4.2 加米霉素可有效清除牛呼吸道內(nèi)BRD相關(guān)主要病原菌。按推薦劑量(6 mg/kg體重)給BRD病牛單次皮下注射華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液，牛呼吸道感染的多殺巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌、牛支原體等病原菌都能得到有效清除，與梅里亞公司生產(chǎn)的加米霉素注射液作用效果相當(dāng)。但加米霉素對(duì)牛呼吸道感染的大腸桿菌等不敏感菌的清除作用有限。

4.3 加米霉素注射液用于牛的BRD治療較安全。按推薦劑量(6 mg/kg體重)給BRD病牛單次皮下注射華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液，注射部位未出現(xiàn)堅(jiān)實(shí)、水腫、疼痛等刺激反應(yīng)，也未觀察到BRD癥狀之外的異常表現(xiàn)和體征，更未出現(xiàn)用藥病牛死亡情況。

4.4 華北制藥集團(tuán)動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的加米霉素注射液用于治療牛呼吸道疾病(BRD)安全有效，臨床中可推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

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[3] http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Maximum_Residue_Limits_-_Report/2015/02/WC500183124[J].pdf. EMA.2014. European public MRL assessment report (EPMAR): Gamithromycin (porcine)[EB /OL].

[4] 農(nóng)業(yè)部.公告第1247號(hào). 抗菌藥物Ⅱ、Ⅲ期臨床藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)指導(dǎo)原則：2016:33-39.

[5] 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所.《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》翻譯組.伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,1984.