黃麗瑾 ， 陸 穎 ， 于諱茹 ， 周曉靜 ， 沈文祥 ， 何寶祥 ， 杜玉蘭

(廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 廣西 南寧 530001)

在泌乳早期階段，血糖水平的檢測(cè)是衡量奶牛能量平衡的重要血液生化指標(biāo)之一，奶牛酮病的發(fā)生早期總伴隨著低血糖的癥狀[1]。奶牛在大量泌乳時(shí)鈣、磷、糖、脂類、蛋白質(zhì)、維生素、微量元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)隨乳汁被大量排出, 導(dǎo)致多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括血糖等能源物質(zhì)嚴(yán)重缺乏, 不能為泌乳提供足夠能量，導(dǎo)致體脂過(guò)度動(dòng)員，肝臟產(chǎn)生酮體增加，血液中酮體含量升高，超出肝外組織利用能力的部分酮體在體內(nèi)堆積，導(dǎo)致酮病的發(fā)生[2]。Kvidera等人報(bào)道奶牛免疫系統(tǒng)的快速激活過(guò)程中，在720 min內(nèi)需利用1 kg以上的葡萄糖(GLU)才能保持血糖平衡，滿足乳汁合成的需要[3]。低血糖癥是高產(chǎn)奶牛產(chǎn)后泌乳早期最易發(fā)生的健康隱患，快速檢測(cè)奶牛血糖水平對(duì)防制代謝病有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

目前便攜式的血糖儀在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展得較為成熟，已有多種商品化的手持血糖檢測(cè)儀投入市場(chǎng)使用，它們具有采血量少、成本低、速度快、測(cè)量便捷等優(yōu)點(diǎn)，但國(guó)內(nèi)目前未見(jiàn)以手持血糖儀檢測(cè)奶牛血糖水平的相關(guān)報(bào)道，也沒(méi)有與之相關(guān)的酮病預(yù)測(cè)研究報(bào)道。我們擬采用醫(yī)用手持血糖儀檢測(cè)產(chǎn)后奶牛血糖水平，用GLU試劑盒檢測(cè)血糖水平進(jìn)行驗(yàn)證，并結(jié)合β-羥丁酸(β-hydroxybutyrate，BHBA)測(cè)定結(jié)果，評(píng)價(jià)血糖儀在奶牛產(chǎn)后血糖檢測(cè)中的效果和以其結(jié)果預(yù)測(cè)酮病發(fā)生情況，為奶牛產(chǎn)后健康監(jiān)測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)?zāi)膛槟蠈幨心衬膛?chǎng)分娩后1-7周內(nèi)的2～5胎次奶牛，上一胎次產(chǎn)奶量平均6 000 kg，奶牛體重在560～600 kg之間，分娩前體況中等(5分制評(píng)分中占2.75～3.25分)。有廄舍與運(yùn)動(dòng)場(chǎng)，半圈養(yǎng)方式飼養(yǎng)，精飼料以玉米、黃豆皮、豆粕、麩皮為主，粗飼料以玉米青儲(chǔ)和苜蓿干草為主，每日飼喂2次，擠奶3次。分娩后日產(chǎn)奶量在10～25 kg之間。

1.2 主要儀器試劑 手持血糖儀(ACCU-CHEK performa)及其配套試劑條，購(gòu)自南寧甌寧醫(yī)療科技有限公司；MS-500半自動(dòng)生化分析儀，購(gòu)自美生科技有限公司；GLU試劑盒(氧化酶法)和BHBA試劑盒(微板法),均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 試驗(yàn)方法 在2016年10月30日至12月14日期間，每周六于清晨空腹采集奶牛頸靜脈血樣。用手持血糖儀測(cè)定靜脈全血GLU含量，同時(shí)再采取10 mL血樣置于含有肝素鈉的抗凝管內(nèi)，3 000 r/min離心10 min后，取上清分裝至1.5 mL的EP管，裝入冰盒送回實(shí)驗(yàn)室，在4 h內(nèi)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血漿GLU含量(氧化酶法)，并從200份樣品中隨機(jī)抽取100份測(cè)定血樣中BHBA濃度(微板法)。低血糖判定標(biāo)準(zhǔn)：GLU含量小于等于2.8 mmol/L。酮病判斷標(biāo)準(zhǔn)：BHBA含量大于1.2 mmol/L[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有的檢測(cè)結(jié)果均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,組間差異采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)。P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 GLU和BHBA檢測(cè)結(jié)果 手持血糖儀和生化分析儀對(duì)GLU的檢測(cè)結(jié)果及血漿BHBA的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。手持血糖儀的血糖檢測(cè)結(jié)果極顯著高于生化分析儀的血糖檢測(cè)結(jié)果，但兩者變異系數(shù)相近。

表1 荷斯坦奶牛GLU與BHBA水平檢測(cè)結(jié)果 (mmol/L)

注：表內(nèi)血糖均值右上表字母不同，表示兩組間差異極顯著(P<0.01)

試驗(yàn)中使用BHBA試劑盒檢出患酮病奶牛7頭，手持血糖儀檢出低血糖奶牛樣本8頭，生化儀檢出低血糖奶牛血樣17頭。在患酮病的7頭牛中，血糖儀檢出其中4頭為低血糖患牛，還有1頭酮病牛的血糖值為2.9 mmol/L，另2頭的血糖水平在正常范圍內(nèi)；而生化儀僅檢測(cè)出2頭發(fā)生低血糖。

2.2 檢測(cè)指標(biāo)間的相關(guān)性分析 兩種方法檢測(cè)血糖水平及BHBA檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析結(jié)果見(jiàn)表2。各指標(biāo)間均存在極顯著相關(guān)關(guān)系，其中兩種方法檢測(cè)血糖水平的相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.903，且兩者的回歸直線對(duì)觀測(cè)值的擬合程度好(R2=0.816)。

表2 被檢指標(biāo)間的相關(guān)性分析

以血糖儀的GLU值與BHBA做Pearson相關(guān)分析時(shí)得GLU與BHBA之間相關(guān)性極顯著，但相關(guān)系數(shù)僅為0.348呈中度相關(guān),且兩者線性擬合程度差(R2=0.121)； 生化儀的GLU值與BHBA的相關(guān)性極顯著，同樣呈中度相關(guān)(R2=0.430)，線性擬合程度差(R2=0.185)。

3 討論

隨著養(yǎng)殖場(chǎng)集約化水平的提高，人們?cè)噲D尋找一種儀器或者方法，可以快速檢驗(yàn)?zāi)稠?xiàng)指標(biāo)的變化而及時(shí)采取措施來(lái)控制疾病的發(fā)生。手持血糖儀在醫(yī)學(xué)方面朝著采血量更少、讀數(shù)更快、操作更便捷的方向發(fā)展，已經(jīng)較為成熟，但目前少見(jiàn)有應(yīng)用于奶牛血糖水平診斷的報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，ACCU-CHEK手持血糖儀與生化分析儀的結(jié)果之間存在高度相關(guān)性，說(shuō)明用血糖儀進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)是有價(jià)值的。

本試驗(yàn)中，血糖儀和生化儀檢測(cè)的血糖水平，兩者數(shù)值之間存在著極顯著差異，與現(xiàn)有報(bào)道不符[5-6]。我們認(rèn)為其原因是：血糖儀采用牛旁現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，釆血后立即檢測(cè)；而生化儀檢測(cè)需要將血樣帶回實(shí)驗(yàn)室，路途花費(fèi)時(shí)間近4 h，在此期間因離體活細(xì)胞利用血糖或細(xì)菌污染標(biāo)本利用血糖造成血糖水平的下降，產(chǎn)生低血糖假陽(yáng)性的現(xiàn)象[7]。關(guān)于應(yīng)在多久之前檢測(cè)血糖其值不會(huì)與真實(shí)值有顯著差異，目前仍存在分歧：李鋒發(fā)現(xiàn)血液標(biāo)本室溫4 h放置后血糖水平會(huì)顯著降低，應(yīng)在4 h內(nèi)測(cè)試完畢；而王智新發(fā)現(xiàn)2 h時(shí)血糖值已發(fā)生變化[8-9]。但毋庸置疑，測(cè)試時(shí)間間隔越久越難反映機(jī)體的真實(shí)情況。

試驗(yàn)中用BHBA試劑盒共檢測(cè)出7頭?；加型?，用血糖儀檢測(cè)出8頭低血糖牛，用生化儀檢測(cè)出17頭低血糖牛；在7頭病牛中，血糖儀檢測(cè)出4頭?；嫉脱?，生化儀僅檢查出2頭?？紤]到時(shí)間間隔長(zhǎng)導(dǎo)致生化儀檢測(cè)出的低血糖樣本可能有假性低血糖出現(xiàn)的情況，我們認(rèn)為血糖儀能不受干擾、更快速、精確地檢測(cè)出患有低血糖的酮病牛。

試驗(yàn)測(cè)定BHBA濃度的結(jié)果顯示，GLU與BHBA或存在負(fù)相關(guān)，與之前有關(guān)酮病的研究一致[4]；但差異顯著(P<0.05)，且線性擬合程度差，或有其他因素共同影響兩者，兩者不存在單純的線性相關(guān)，具體的回歸函數(shù)可在研究出其他影響因素后對(duì)其進(jìn)行后續(xù)研究。

試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，有2頭牛的血糖值在正常范圍內(nèi)但仍有高BHBA的情況，與試驗(yàn)設(shè)想中預(yù)計(jì)的“低血糖引發(fā)高酮，因而通過(guò)檢測(cè)低血糖情況可以間接檢測(cè)酮病發(fā)生情況”這一假想不符，考慮到酮病的分型[10]這一情況，這提示工作人員若使用血糖儀對(duì)奶牛進(jìn)行GLU濃度跟蹤檢測(cè)的同時(shí)也要定期檢測(cè)BHBA濃度，防止Ⅱ型酮病(血糖正常或偏高、酮體高)的發(fā)生。Ⅱ型酮病于1996年由Holtenius等人提出，常發(fā)生于奶牛的產(chǎn)后早期，奶牛體況分?jǐn)?shù)良好，顯示葡萄糖耐受和胰島素抵抗的現(xiàn)象[11]。Ⅱ型酮病發(fā)病不明顯但常伴發(fā)其他生產(chǎn)疾病，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)警惕Ⅱ型酮病的發(fā)生。

低血糖是糖代謝紊亂的一個(gè)重要指標(biāo)，糖代謝紊亂妨礙機(jī)體的能量代謝。據(jù)本小組以往對(duì)酮病的研究發(fā)現(xiàn)，BHBA濃度異常的牛均在高BHBA的同時(shí)或之后3周內(nèi)表現(xiàn)出血糖降低的變化，但程度不一。因此，及時(shí)檢測(cè)到低血糖的病例可以提示牛場(chǎng)管理人員及時(shí)調(diào)整奶牛日糧和管理措施，預(yù)防奶牛酮病及其他代謝性疾病的發(fā)生，減少經(jīng)濟(jì)損失。

實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)設(shè)備、環(huán)境要求較高，不適合牛場(chǎng)等基層部門(mén)檢測(cè)血液生化指標(biāo)，而手持血糖儀體積小、攜帶方便、獲取結(jié)果便捷，這一點(diǎn)恰與牛場(chǎng)需求吻合，可以向養(yǎng)殖場(chǎng)推廣使用作為參考依據(jù)，在診斷發(fā)現(xiàn)異常的時(shí)候進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。需要提醒的是，手持血糖儀移植到養(yǎng)殖場(chǎng)領(lǐng)域使用中需要質(zhì)控品校對(duì)，并定期進(jìn)行儀器的校準(zhǔn)。結(jié)論：本試驗(yàn)證明醫(yī)用手持血糖儀檢測(cè)奶牛產(chǎn)后血糖水平是可行的，對(duì)酮病也有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值，值得在牛場(chǎng)推廣使用，希望今后應(yīng)當(dāng)繼續(xù)試驗(yàn)，以獲得更客觀的評(píng)價(jià)。

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