王麗娟，羅尚星，崔榮飛，左玉柱

（1. 河北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，河北保定　071001；2. 河北省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北石家莊　050081；3. 石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，河北石家莊　050000）

豬藍耳?。≒RRS）是由套式病毒目的豬藍耳病毒（PRRSV）引起的豬繁殖障礙、高熱，出現(xiàn)呼吸道癥狀的一種傳染病。本病于20世紀80年代末首先在美國被發(fā)現(xiàn)[1]，后迅速蔓延至其他國家，20世紀90年代傳入我國。本病具有高致死性，不僅會使仔豬成活率降低，還會導致育肥豬生長停滯[2]，對養(yǎng)豬業(yè)危害較大。目前PRRSV兩個基因型：一個是歐洲型，通常引起經(jīng)典型PRRS；另一個是美洲型，引起變異型PRRS，危害往往更嚴重，會引發(fā)豬的急性死亡[3]。由于PRRSV基因組有10個開放閱讀框，且ORF1、ORF3、ORF5極易變異[4]，使得PRRS防治變得非常困難。

目前疫苗免疫仍是PRRS防控的重要措施之一，因此對豬群PRRS抗體水平的檢測十分重要。它既可以評價免疫效果，也可以了解豬群健康狀況，以便豬場及時調(diào)整免疫程序，從而減少經(jīng)濟損失。

本研究通過對河北省內(nèi)不同規(guī)模豬場送檢的血樣進行PRRS抗體檢測，對檢測數(shù)據(jù)進行匯總分析，尋求PRRS的流行規(guī)律，為PRRS防控提供一些數(shù)據(jù)支持。

1　材料與方法

1.1　臨床樣品

2016—2017年來自河北省保定、石家莊、滄州、張家口、邯鄲、衡水、邢臺等7個地區(qū)送檢的，對種群分類較為明確的豬場血樣共計1 182份，其中散養(yǎng)戶11家196份，中型豬場5家380份，大型豬場2家606份（表1）。每只豬采血2～3 mL，室溫靜置至血清析出，分離血清，置于4 ℃保存。

表1　不同規(guī)模豬場基本情況

1.2　主要試劑

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒（美國IDEXX）：購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；Multiskan FC型酶標儀：購自Thermo公司。

1.3　試驗方法

試驗前將抗體試劑盒與血樣室溫孵育1 h，用血清稀釋板將血樣進行40倍稀釋（5 μL血清+195 μL樣品稀釋液）；將稀釋好的樣品轉(zhuǎn)至抗原包被板中，每孔100 μL，分別加入2孔陰性對照與2孔陽性對照，每孔100 μL，陰陽性對照不稀釋；室溫下孵育30 min，棄去孔中液體，用配好的洗液洗滌板孔（洗液用蒸餾水10倍稀釋），每孔250 μL，洗滌3～4次，最后一遍用力拍干；每孔加入100 μL酶標抗體，室溫下孵育30 min，棄去孔中液體后洗滌，重復操作；每孔加入100 μL TMB底物液，在室溫下孵育15 min，最后加入終止液，每孔100 μL，于酶標儀中650 nm條件下測量吸光值。

1.4　結(jié)果判定與計算

當陰性對照平均值＜0.15，陽性對照平均值-陰性對照平均值＞0.15時，試驗結(jié)果有效。本試驗通過S/P對結(jié)果進行判定。S/P=（樣品OD值-陰性對照平均值）/（陽性對照平均值-陰性對照平均值）。當S/P＜0.4時，判定為陰性；當S/P＞0.4時，判定為陽性；當S/P＞2.5時，如果樣品數(shù)據(jù)離散度較高，則可能存在感染并發(fā)病，如果度較低，則可能存在感染但處于穩(wěn)定期。

離散度計算公式：

離散度=D（樣品方差）/樣品平均值

2　結(jié)果與分析

2.1　不同規(guī)模豬場

對送檢血樣按規(guī)模豬場分類后，進行檢測結(jié)果分析。結(jié)果顯示，大型場陽性率最高，散戶陽性率最低（表2）。這可能與大型豬場有較為系統(tǒng)或者固定的免疫程序有關(guān)。

表2　不同規(guī)模豬場檢測結(jié)果統(tǒng)計

2.2　不同生產(chǎn)豬群

2.2.1散戶 對11家散戶的不同種群進行分析發(fā)現(xiàn)，不同生產(chǎn)豬群陽性率均在80%左右，但21～60日齡仔豬與公豬的陽性率偏低；散戶不同豬群的離散度大部分低于60%，但21～60日齡仔豬、哺乳母豬、公豬的離散度高于60%（圖1）。

圖1　散戶不同種群PRRS抗體水平分析

2.2.2中型場 對5家中型場不同豬群檢測數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，不同豬群陽性率基本在80%以上，離散度在60%以下，其中100～150日齡育肥豬與空懷母豬的陽性率高于其他階段豬群，21～60日齡仔豬、公豬的陽性率偏低（圖2）。

圖2　中型場不同種群PRRS抗體水平分析

2.2.3大型場 對2家大型場的不同種群的檢測結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，不同種群的抗體陽性率基本在90%以上，但21～60日齡仔豬相對偏低，離散度大部分在40%左右，僅哺乳母豬與空懷母豬離散度稍高（圖3）。

圖3　大型場不同種群PRRS抗體水平分析

2.3　不同地區(qū)

對來自保定、石家莊、滄州等7個地區(qū)送檢的血樣，按照地區(qū)進行分類統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，各地區(qū)的抗體陽性率在80%左右，地域差異不大，其中大于2.5抗體值的豬場基本在15%左右，說明PRRS在河北省普遍存在（表3）。

表3　不同地區(qū)PRRS抗體檢測結(jié)果分析

3　討論

PRRS是豬場危害較重的傳染病之一，多發(fā)于夏秋季節(jié)[8]。由于其具有傳播途徑廣、病死率高、致病力強、仔豬與育肥豬極其易感的特點[9-10]，使得PRRS的預防與控制一直是我國養(yǎng)豬業(yè)以及動物疫病研究的熱點。在美洲型PRRSV流行以前，該病通過免疫接種就可取得較好的防控效果，但在2008年以后，由于PRRSV變異株的流行，使得該病防控出現(xiàn)了病毒不斷變異；毒力持續(xù)增強[11]的新問題，使得原本較為穩(wěn)定的豬場大規(guī)模發(fā)病。鑒于以上問題的出現(xiàn)，對豬群免疫情況、豬群健康情況、豬群感染情況的監(jiān)測顯得尤為重要。對豬群做好抗體水平檢測已經(jīng)成為現(xiàn)階段豬場科學養(yǎng)殖的重要手段。

本研究對2016—2017年河北省送檢的1 182份血樣進行了PRRS抗體檢測。對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)：大型場陽性率（93%）高于中型場（87%）和散戶（80%），抗體整齊度也較好。其原因可能與大型場免疫程序較為規(guī)范，飼養(yǎng)水平較為科學有關(guān)。21～60日齡斷奶仔豬抗體陽性率偏低，說明此階段豬群易感染PRRSV，此外母豬的抗體整齊度也較差，需要加強對這些豬群的監(jiān)管和免疫。7個地區(qū)的抗體陽性率基本在80%左右，地域差異不大，說明送檢樣品豬場的PRRS免疫情況相似。因此，在PRRS防控中，應對抗體水平進行定期檢測，根據(jù)整個豬群的健康狀況、免疫情況及感染情況，合理制定疫苗免疫程序。這樣才能降低PRRS發(fā)病率，減少經(jīng)濟損失。

此外由于目前的抗體檢測并不能區(qū)分野毒抗體和疫苗抗體，需要根據(jù)樣本數(shù)據(jù)的離散度和陽性率并結(jié)合豬場實際情況進行推測，所以分析結(jié)果具有一定的主觀性，只能作為參考。

4　結(jié)論

本研究對2016—2017年河北省保定、石家莊、滄州等7個地區(qū)送檢的1 182份血樣進行了PRRS抗體檢測，發(fā)現(xiàn)整體免疫效果較好，平均陽性率均在80%以上，尤其是大型規(guī)?；i場，免疫效果更好。地區(qū)差異不大，各地陽性率在75%～92%之間。散養(yǎng)和斷奶仔豬群的陽性率相對偏低，是發(fā)生PRRS的威險豬群，應對其加強防控；母豬與育肥豬的整齊度較差，可能與其本身易感染PRRSV有關(guān)。PRRS的免疫程序需要根據(jù)抗體檢測情況進行合理制定，只有這樣，才能取得好的免疫效果。

參考文獻：

[1] 張青嫻，王克領(lǐng)，張立憲，等. 高致病性藍耳病的研究進展[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2008，35（9）：105-107.

[2] EMANUELA P，ENRIC M，王學強. 豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）傳播的研究進展及其對免疫程序的影響[J]. 中國豬業(yè)，2017（4）.

[3] 陳澤芳，趙愛莉. 豬藍耳病的研究進展[J]. 畜禽業(yè)，2017，28（3）：1-3.

[4] 楊曉花，張其艷，艾軍，等. 高致病性藍耳病的研究進展[J]. 今日畜牧獸醫(yī)，2010（7）：24-26.

[5] 黃哲新. 一例規(guī)模豬場藍耳病抗體監(jiān)測分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)，2016，10（15）：168-169.

[6] 于桂芳，王國良，溫富勇. 高致病性豬藍耳病免疫抗體監(jiān)測分析報告[J]. 當代畜牧，2011（4）：14-15.

[7] 權(quán)玉先，張洪智. 豬藍耳病的綜合防控措施[J]. 中國畜牧獸醫(yī)文摘，2017，33（4）：134-134.

[8] 吾際舟. 高致病性豬藍耳病的研究進展[J]. 中國豬業(yè)，2007（8）：4-6.

[9] 李建玲，楊小亮. 高致病性豬藍耳病的研究進展[J].中國獸醫(yī)雜志，2014，50（6）：61-63.

[10] 吳增堅. 高致病性豬藍耳病[J]. 北方牧業(yè)，2007（15）：7.

[11] 劉金彪. 豬藍耳病的綜合防控[J]. 中國動物檢疫，2008，25（1）：33-34.