趙 建 ，徐倫武 ，康曉東 ，石 河 ，劉 超 ，胡孫林 ，楊幸怡 ，徐曲毅 ，成建定 ，艾 梅

（1.中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，廣東 廣州 510080；2.廣州市刑事科學(xué)技術(shù)研究所 法醫(yī)病理學(xué)公安部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510030；3.南平市公安局延平分局，福建 南平 353000；4.廣東華生司法鑒定中心，廣東 廣州 510610）

水中尸體是法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中常見的類型之一。由于水中尸體的發(fā)現(xiàn)地往往不是其實(shí)際落水點(diǎn)，即非溺死地點(diǎn)，這不利于在實(shí)際辦案中尋找尸源。因此，法醫(yī)學(xué)者們開始對(duì)水中尸體溺死地點(diǎn)推斷進(jìn)行研究[1-3]。本文就國內(nèi)外有關(guān)溺死地點(diǎn)推斷的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，旨在為水中尸體溺死地點(diǎn)推斷的研究提供參考。

1 可用于溺死地點(diǎn)推斷的標(biāo)記物

作為溺死地點(diǎn)推斷的標(biāo)記物須在溺液中較為普遍存在，且具有明顯的區(qū)域性特征。標(biāo)記物在溺液中較為普遍存在，才可以在不同水環(huán)境下的溺死尸體組織器官中檢測到；標(biāo)記物具有明顯的區(qū)域性特征，才可以用于區(qū)別溺死的地點(diǎn)。因此，異物顆粒和硅藻成為了法醫(yī)學(xué)水中尸體溺死地點(diǎn)推斷最常用的標(biāo)記物。

1.1 異物顆粒

異物顆粒是指存在于溺液中、不存在于人體或人體含量較少的外源性物質(zhì)，如含硅、鋁、鈣、鉻等的無定形顆?；蚣?xì)小顆粒集落[4]。在溺死過程中，溺液中的有機(jī)顆粒和無機(jī)顆粒隨著溺液進(jìn)入肺組織，突破肺-血屏障進(jìn)入血液，分布到各個(gè)組織器官。通過對(duì)水中尸體組織器官和可疑溺液中的異物顆粒進(jìn)行分析，可以推斷溺死的地點(diǎn)[4-5]。

1.2 硅藻

硅藻是廣泛分布于水中的一種單細(xì)胞藻類，全世界約有20000～2000000種，體長一般在1～200μm[6]。絕大部分硅藻的細(xì)胞壁高度硅質(zhì)化[7]，抵抗力強(qiáng)而不易被破壞，使用濃硫酸、濃硝酸消解組織器官有機(jī)質(zhì)后可以觀察到其細(xì)胞壁[8]。水域中的硅藻種類受環(huán)境影響很大[9]，其本身即為水環(huán)境監(jiān)測的重要指標(biāo)之一[10]，具有明顯的區(qū)域性特征。硅藻進(jìn)入人體的原理和異物顆粒一樣，通過分析水中尸體組織器官和可疑溺液中的硅藻種類，可以進(jìn)行溺死地點(diǎn)推斷[2，11-16]。

1.3 其他浮游生物

溺液中的其他浮游生物，如藍(lán)藻、綠藻、細(xì)菌等也可以在溺死過程中進(jìn)入人體組織器官[17-20]，這些浮游生物同樣具有區(qū)域性特征，可用于溺死地點(diǎn)分析[17-18]。

2 溺死地點(diǎn)推斷的方法

2.1 通過異物顆粒推斷溺死地點(diǎn)

異物顆粒在水域中的分布比較廣泛，但是具有區(qū)域特征性的異物顆粒只存在于特定的水域中，如化工廠、鋼鐵廠、軍工廠排污口河段等。

萬立華等[4]為探討異物顆粒推斷溺死地點(diǎn)的效果，用掃描電鏡-能譜儀（scanning electron microscopeenergy dispersive X-ray analysis，SEM-EDAX）對(duì)實(shí)驗(yàn)兔和實(shí)際尸體案例的肺、肝、腎等器官組織切面的異物顆粒進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)異物顆粒中含有硅、鋁、鐵、鈣、鋇、鉛、鉻等元素，而死后入水實(shí)驗(yàn)兔和非溺死尸體器官中未見異物顆粒。

通過對(duì)實(shí)驗(yàn)兔、溺死尸體組織與可疑溺死地點(diǎn)的異物顆粒元素進(jìn)行分析，尋找與組織器官中異物顆粒元素組成最相似的水域推斷溺死地點(diǎn)。例如，鋼廠排污口附近富含鐵元素，那么鐵元素就可以成為推斷該位置為溺死地點(diǎn)的有價(jià)值的指示物[6]。

異物顆粒分析為溺死地點(diǎn)推斷提供了有力的證據(jù)，但由于其在水域的分布受沿途工業(yè)排污的影響，在缺乏工業(yè)排污或者排污不穩(wěn)定的情況下，限制了該方法的廣泛應(yīng)用。

2.2 通過硅藻推斷溺死地點(diǎn)

通過硅藻檢驗(yàn)推斷溺死地點(diǎn)的先決條件是掌握了水環(huán)境中硅藻的區(qū)域性特征。為此，國內(nèi)外法醫(yī)學(xué)者們進(jìn)行了大量調(diào)查研究，分析所在地區(qū)的硅藻分布情況。其中，中國[21-28]、日本[29-31]、印度[19，32-34]的報(bào)道較多。

2.2.1 水域硅藻基本情況調(diào)查

KAKIZAKI等[29]對(duì)日本宮崎地區(qū)大淀河河口的硅藻數(shù)量、大小、種類進(jìn)行了調(diào)查，發(fā)現(xiàn)：淡水中的大型羽紋綱硅藻很難在海水中被找到；中心綱硅藻的數(shù)量在靠近海水的區(qū)域有所增加，海水中?？蓹z見大型的中心綱硅藻；淡水和海水很容易根據(jù)硅藻種類進(jìn)行區(qū)別，而淡鹽水（河海之間）中的硅藻很難被區(qū)分；河口同一地點(diǎn)的硅藻群落每月都會(huì)有變化，甚至漲潮、落潮時(shí)均有不同，在進(jìn)行溺死地點(diǎn)推斷時(shí)要慎重。THAKAR等[32]對(duì)印度的部分湖泊、池塘、運(yùn)河和河流進(jìn)行了連續(xù)兩年的分析，發(fā)現(xiàn)不同地點(diǎn)的硅藻種類和大小變化顯著，部分硅藻具有地點(diǎn)特異性，僅在某些地點(diǎn)可以被發(fā)現(xiàn)，且這些硅藻四季都存在，但是比例隨著季節(jié)發(fā)生變化。 國內(nèi)法醫(yī)學(xué)者在北京[22]、上海[23]、寧波[24]、蘇州[25]、沈陽[26]、東莞[27]、貴陽[28]等地的調(diào)查也得到了類似的結(jié)論。

例如，李立平[22]調(diào)查了北京中心城區(qū)各水域硅藻種屬構(gòu)成及相對(duì)豐富度，發(fā)現(xiàn)了各區(qū)域之間的差異：長河的優(yōu)勢屬為直鏈藻，轉(zhuǎn)河、昆玉河、陶然亭的優(yōu)勢屬為針桿藻，東護(hù)城河、壩河、涼水河、永定河均為小環(huán)藻，亮馬河為舟形藻，永定河引水渠為菱形藻。

田露等[23]對(duì)上海市浦東新區(qū)的川楊河進(jìn)行了調(diào)查，也發(fā)現(xiàn)了河流各段的差異，并成功應(yīng)用于實(shí)際案例，在川楊河隨塘河口發(fā)現(xiàn)的1例尸體的肺中僅發(fā)現(xiàn)小環(huán)藻、橋彎藻、羽紋藻等淡水硅藻，推斷溺死地點(diǎn)在發(fā)現(xiàn)尸體上游的8km處，與實(shí)際溺死地點(diǎn)相差僅2km。

ZHAO等[21]曾對(duì)黃河、長江和珠江三大水系的硅藻分布情況進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)：舟形藻、菱形藻、小環(huán)藻、針桿藻、異極藻、橋彎藻、卵形藻、直鏈藻是三大水系共有且最常見的硅藻種類；在硅藻含量方面，三大水系自西向東均呈增加趨勢。而進(jìn)行溺死地點(diǎn)推斷，更重要的是發(fā)現(xiàn)不同水域的硅藻群落特征，尋找“個(gè)性化”的指標(biāo)。

水域硅藻基本情況調(diào)查是通過硅藻檢驗(yàn)推斷溺死地點(diǎn)的基礎(chǔ)，需要大量人力、物力和財(cái)力的支持，尤其是水域豐富的地區(qū)，如長江三角洲、珠江三角洲等地區(qū)，某個(gè)實(shí)驗(yàn)室難以單獨(dú)完成。此外，受制于法醫(yī)學(xué)者藻類知識(shí)的缺乏，在水樣的采集、分析，硅藻種類識(shí)別以及藻類所代表的環(huán)境條件等方面都比較欠缺，在進(jìn)行硅藻分布情況調(diào)查時(shí)可能得出不準(zhǔn)確的結(jié)論。因此，多地區(qū)的法醫(yī)學(xué)者合作、法醫(yī)學(xué)者與藻類學(xué)者的合作將是一種比較合適的解決方法。

2.2.2 推斷溺死地點(diǎn)的方法

（1）硅藻種類一致性和常見硅藻種類相對(duì)豐度一致性分析。LUDES等[2]通過分析20例已知溺死地點(diǎn)和20例未知溺死地點(diǎn)的尸體肺組織硅藻和溺液中硅藻種類一致性及常見硅藻種類相對(duì)豐度的一致性，發(fā)現(xiàn)：在20例已知溺死地點(diǎn)的案例中，肺組織與溺死地點(diǎn)水樣的硅藻種類一致的案例達(dá)100%，相對(duì)豐度一致的案例占65%；而未知溺死地點(diǎn)的案例中，肺組織與可疑溺死地點(diǎn)水樣的硅藻種類一致的案例為70%，相對(duì)豐度一致的也有35%。說明肺組織的硅藻群落可以作為溺死地點(diǎn)推斷的指示性指標(biāo)之一，但是當(dāng)河流缺乏特異性硅藻種類或者種類分布無明顯特征的時(shí)候，這個(gè)方法的應(yīng)用就受到了限制。

（2）現(xiàn)代模擬分析?，F(xiàn)代模擬分析技術(shù)的基本原理是通過相似性或相異性測量對(duì)肺組織或衣物和所有可疑溺死地點(diǎn)的硅藻群落進(jìn)行數(shù)值比較，計(jì)算差異系數(shù)。兩樣本的差異系數(shù)在第10百分位數(shù)以內(nèi)時(shí)，表示“擬合好”，認(rèn)為：肺組織或衣物來自可疑溺死地點(diǎn)的假設(shè)成立；當(dāng)兩樣本的差異系數(shù)大于第10百分位數(shù)時(shí)，則肺組織或衣物的硅藻與可疑溺死地點(diǎn)的硅藻種群不一致的可能性大[35-38]。由于此法采用的是統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，為便于計(jì)算，剔除了種群構(gòu)成比低于2%的硅藻，可能導(dǎo)致一些含量較少的區(qū)域特異的硅藻被排除，不利于溺死地點(diǎn)的推斷。

（3）聚類分析。聚類分析是在相似的基礎(chǔ)上收集數(shù)據(jù)來分類，用作描述數(shù)據(jù)，衡量不同數(shù)據(jù)源間的相似性，以及把數(shù)據(jù)源分類到不同的簇中。通過對(duì)可疑溺死地點(diǎn)的水樣進(jìn)行分析，將其分入類似的集群中，與肺組織和衣物的硅藻進(jìn)行比較推斷溺死地點(diǎn)[12，39]。HORTON等[12]對(duì)河流中發(fā)現(xiàn)的一具溺死尸體應(yīng)用了此法，首先在50km的河段提取了包括尸體發(fā)現(xiàn)處的12份硅藻樣本，共發(fā)現(xiàn)99種硅藻，與各取樣點(diǎn)直接取樣的種類非常相似。為了進(jìn)一步尋找各地點(diǎn)間的差異，將取樣點(diǎn)分為河道、河岸和陰暗處三簇，采用聚類分析比較尸體肺組織與衣物、三簇樣本之間的相似性。結(jié)果顯示，肺組織和衣物中的硅藻與陰暗處樣本，尤其是尸體發(fā)現(xiàn)處的硅藻樣本一致性最高。因此，推斷尸體發(fā)現(xiàn)處即為溺死地點(diǎn)，并且作為證據(jù)被法庭采納。此法同現(xiàn)代模擬分析一樣，會(huì)剔除構(gòu)成比較低的硅藻種類，可能會(huì)遺漏信息。

（4）Sprensen相似性系數(shù)分析。通過對(duì)肺組織和可疑溺死地點(diǎn)的硅藻種類進(jìn)行Sprensen相似性系數(shù)分析，即兩樣本共有的硅藻種類占兩樣本全部硅藻種類的比例，可以與現(xiàn)代模擬分析的差異系數(shù)共同使用。Sprensen相似性系數(shù)越大，差異系數(shù)越小，反映兩樣本之間的相似度越高。賴小平等[27]采用Sprensen相似性系數(shù)和差異系數(shù)將2例溺死尸體與東莞多發(fā)溺死河段的硅藻進(jìn)行分析，結(jié)果顯示溺死者肺組織內(nèi)的硅藻均與其對(duì)應(yīng)的溺死地點(diǎn)硅藻相似度最高。但是Sprensen相似性系數(shù)僅涉及種類信息，沒有種類構(gòu)成比，因此也不能完全代表硅藻群落的特點(diǎn)，最好能與其他方法合用。

（5）除趨勢對(duì)應(yīng)分析。除趨勢對(duì)應(yīng)分析是一種群落排序方法，也是分析肺組織與可疑溺死地點(diǎn)硅藻群落的相似性，從而推斷溺死地點(diǎn)。COELHO等[14]采用除趨勢對(duì)應(yīng)分析法對(duì)37例水中尸體和9處常見的溺死地點(diǎn)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)大部分溺死者的硅藻種類與溺死地點(diǎn)一致。但是如果要確定準(zhǔn)確的溺死地點(diǎn)卻很難，由于硅藻種類受季節(jié)的影響較大，取樣時(shí)的水樣硅藻種群不能代表溺死時(shí)的硅藻種群，這也會(huì)造成溺死地點(diǎn)推斷不準(zhǔn)確。

2.3 通過其他浮游生物推斷溺死地點(diǎn)

與異物顆粒和硅藻一樣，具有區(qū)域性特征的浮游生物都可以作為溺死地點(diǎn)推斷的標(biāo)記物。例如，海水與淡水中存在的細(xì)菌種類差別明顯，淡水中主要是氣單胞菌屬[40]，海水中主要是桿菌屬和弧菌屬[41]，在海水和淡水中溺死者器官的細(xì)菌種類會(huì)出現(xiàn)明顯的差別。在被污染程度不高的水域中溺死，糞大腸菌及糞鏈球菌也可能成為溺死的標(biāo)志細(xì)菌[42]。

組織器官和水樣中的細(xì)菌可以通過培養(yǎng)基培養(yǎng)，也可以通過PCR擴(kuò)增其DNA片段。PCR可同時(shí)擴(kuò)增多種細(xì)菌，甚至可以與藍(lán)藻等其他浮游生物進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物包含更多的浮游生物信息，更能代表溺死地點(diǎn)的浮游生物群落特征，可以對(duì)溺死者組織器官和可疑溺死地點(diǎn)水樣的浮游生物電泳條帶多樣性進(jìn)行比對(duì)分析。不同溺液中由于浮游生物種類不同，導(dǎo)致其DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳條帶具有明顯差異，溺死者肺組織與其溺死地點(diǎn)水樣的浮游生物DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳條帶有顯著的相似性，而與非溺死地點(diǎn)水樣差異顯著[18]。

3 影響溺死地點(diǎn)推斷的因素

3.1 影響異物顆粒變化的因素

異物顆粒不僅廣泛存在于水域中，也廣泛存在于空氣中。樣本暴露在空氣中可能會(huì)受到污染，應(yīng)盡量縮短樣本在空氣中的暴露時(shí)間。取材過程中，金屬工具接觸樣本也可能殘留金屬元素而影響分析結(jié)果。另外，人體自身的病灶和生理學(xué)沉積，如硅肺、鈣化灶等，也會(huì)對(duì)結(jié)果分析產(chǎn)生一定的干擾[43]。

如前所述，異物顆粒依賴于工廠排污，這是個(gè)極不穩(wěn)定的因素，無法進(jìn)行長期監(jiān)測，也難以建立數(shù)據(jù)庫，不利于其在溺死地點(diǎn)推斷中的應(yīng)用。

3.2 影響浮游生物變化的因素

浮游生物對(duì)溫度、光照、流速、pH值、鹽度和電解質(zhì)等的變化敏感，短期內(nèi)可導(dǎo)致群落的變化[9，44]。受環(huán)境影響，不同水域的浮游生物產(chǎn)生了具有區(qū)域性特點(diǎn)的群落結(jié)構(gòu)，這也是進(jìn)行溺死地點(diǎn)推斷的基礎(chǔ)。但是，群落變化速度快，也對(duì)溺死地點(diǎn)推斷提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，因?yàn)闄z驗(yàn)時(shí)無法掌握死者溺水時(shí)該地點(diǎn)的浮游生物群落特征，這也可能導(dǎo)致溺死地點(diǎn)推斷得出錯(cuò)誤結(jié)論。

4 結(jié) 語

在溺死地點(diǎn)推斷方面，水域浮游生物的動(dòng)態(tài)監(jiān)測和地區(qū)性數(shù)據(jù)庫的建立，是溺死地點(diǎn)推斷的基礎(chǔ)。因此，今后應(yīng)加強(qiáng)基礎(chǔ)研究：一是浮游生物的四季變化，淡水、海水的群落特征，湖泊、河涌、河流群落的基本分布研究，為溺死地點(diǎn)推斷奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)；二是結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，如PCR技術(shù)、二代測序技術(shù)等，擴(kuò)展溺死診斷的標(biāo)記物，如藍(lán)藻、綠藻、裸藻、真菌等；三是聯(lián)合多種標(biāo)記物共同分析，以提高溺死地點(diǎn)推斷的準(zhǔn)確性。

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