司 和，宋志民，唐賢明，王國(guó)福

(海南省海洋與漁業(yè)科學(xué)院，海南 ?？?570100)

波紋巴非蛤(Paphiaundulata)屬軟體動(dòng)物門、雙殼綱、簾蛤目、簾蛤科、巴非蛤?qū)?，主要分布于我?guó)及東南亞沿海，在澳大利亞及紅海沿岸也有分布[1]。棲息在低潮線下0.5～44.0 m的泥沙底質(zhì)或軟泥底質(zhì)中，營(yíng)埋棲生活，環(huán)境適應(yīng)性廣，繁殖力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快，是淺海增養(yǎng)殖的新品種。同時(shí)波紋巴非蛤含有小分子多肽、生物活性肽、糖胺聚糖等活性成分[2-7]，其提取物具有較好的抗氧化性、降血脂等藥用及保健作用[8-15]。由于波紋巴非蛤的養(yǎng)殖苗種主要依靠自然采捕，致使野生苗種逐年減少，苗種短缺成為制約我國(guó)波紋巴非蛤養(yǎng)殖發(fā)展的瓶頸之一。本文探討了溫度及鹽度對(duì)波紋巴非蛤胚胎、幼蟲及稚貝發(fā)育的影響，為波紋巴非蛤的苗種繁育提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

智能人工氣候箱(PRX-350B)，顯微鏡(XSP6C)，細(xì)胞計(jì)數(shù)板，50 mL燒杯，250 mL燒杯，培養(yǎng)皿，篩絹。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)親貝殼長(zhǎng)(47.7±2.2) mm，殼寬(26.3±1.3) mm，體質(zhì)量(13.4±2.3) g，2014—2016年連續(xù)引自廣西北海。親貝清洗后在室外催熟，主要投喂亞心形扁藻(Platymonassubcordiformis)為主，輔以牟氏角毛藻(Chaetocerosmuelleri)和微綠球藻(Nannochlropsisoculata)。人工催產(chǎn)時(shí)先陰干4 h，再流水刺激，之后清洗并收集受精卵進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.1 溫度對(duì)波紋巴非蛤發(fā)育的影響

通過光照培養(yǎng)箱調(diào)節(jié)不同的溫度來研究溫度對(duì)波紋巴非蛤胚胎、幼蟲及稚貝發(fā)育的影響，設(shè)置溫度梯度為15、20、25、30、35 ℃，鹽度30，光照度1000 lx，晝夜光周期為12 h∶12 h。

1.2.1.1 溫度對(duì)波紋巴非蛤胚胎發(fā)育的影響

將收集的受精卵按100個(gè)/mL的密度放入50 mL小燒杯中，每個(gè)燒杯放入35 mL滅菌的海水，微波充氣，每個(gè)溫度梯度設(shè)置3個(gè)平行。12 h后計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)發(fā)育成D形幼蟲的孵化率及畸形率。

1.2.1.2 溫度對(duì)波紋巴非蛤幼蟲發(fā)育的影響

用400目篩絹收集D形幼蟲，計(jì)數(shù)后按100個(gè)/mL的密度放入250 mL的燒杯中，每個(gè)燒杯放入200 mL滅菌的海水，下覆載玻片方便觀察，微波充氣，每個(gè)溫度梯度設(shè)置3個(gè)品行。每隔12 h觀察一次。

1.2.1.3 溫度對(duì)波紋巴非蛤稚貝生長(zhǎng)的影響

將發(fā)育的稚貝放入培養(yǎng)皿中進(jìn)行觀察，培養(yǎng)皿鋪設(shè)1～2 mm厚的細(xì)砂。設(shè)置密度設(shè)為5個(gè)/mL。每隔一周計(jì)數(shù)一次。設(shè)置3個(gè)平行。

1.2.2 鹽度對(duì)波紋巴非蛤發(fā)育的影響

通過光照培養(yǎng)箱調(diào)節(jié)鹽度來研究鹽度對(duì)波紋巴非蛤胚胎、幼蟲及稚貝發(fā)育的影響，鹽度梯度為15、20、25、30、35，溫度30 ℃，光照度1000 lx，晝夜光周期為12 h∶12 h。試驗(yàn)方法同相應(yīng)的溫度試驗(yàn)，測(cè)定孵化率、畸形率、變態(tài)率、附著率及存活率。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel 2007及SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析或T-test分析，設(shè)顯著水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對(duì)波紋巴非蛤發(fā)育的影響

2.1.1 對(duì)胚胎發(fā)育的影響

隨著溫度的升高胚胎孵化率逐漸升高，在30 ℃時(shí)達(dá)到最大值，之后逐漸降低(圖1)?；温逝c孵化率呈負(fù)相關(guān)，在低溫和高溫時(shí)均較高，在30 ℃時(shí)達(dá)到顯著性的最低值。

2.1.2 對(duì)幼蟲發(fā)育的影響

幼蟲存活率隨著溫度的升高先升后降，在30 ℃達(dá)顯著最大值，25 ℃次之，其他3組存活率都不高，三者均無顯著性差異，15 ℃存活率最低。附著率隨溫度的升高而先升后降，30 ℃附著率最高，20～25 ℃次之，兩者差異不顯著。30 ℃變態(tài)率最高，25 ℃次之，20 ℃變態(tài)率極低，三者均存在顯著性差異，35 ℃及15 ℃不適合幼蟲的發(fā)育生長(zhǎng)(圖2)。

2.1.3 對(duì)稚貝生長(zhǎng)的影響

30 ℃稚貝生長(zhǎng)最快，4周后稚貝殼長(zhǎng)達(dá)(2782±489.5) μm(圖3)。25 ℃生長(zhǎng)次之，但在第3周及第4周時(shí)與30 ℃差異不顯著。35 ℃不適合稚貝生長(zhǎng)，15 ℃生長(zhǎng)最慢。

2.2 鹽度對(duì)波紋巴非蛤發(fā)育的影響

2.2.1 對(duì)胚胎發(fā)育的影響

隨著鹽度的增高，孵化率逐漸提高，在30時(shí)最高，35雖略有下降，但與鹽度30時(shí)無顯著性差異(圖4)?；温孰S鹽度的升高先降后升，鹽度30時(shí)最低。

2.2.2 對(duì)幼蟲發(fā)育的影響

幼蟲存活率、附著率及變態(tài)率均隨鹽度的升高先升后降(圖5)。在鹽度30時(shí)存活率、附著率及變態(tài)率都最高。鹽度35與30，幼蟲附著率差異不顯著。鹽度15不適合幼蟲生長(zhǎng)。

圖2 溫度對(duì)波紋巴非蛤幼蟲發(fā)育的影響

圖3 溫度對(duì)波紋巴非蛤稚貝生長(zhǎng)的影響

圖4 鹽度對(duì)波紋巴非蛤胚胎發(fā)育的影響

圖5 鹽度對(duì)波紋巴非蛤幼蟲發(fā)育的影響

2.2.3 對(duì)稚貝生長(zhǎng)的影響

隨鹽度增高生長(zhǎng)速率逐漸加快，鹽度30生長(zhǎng)最快，但相比鹽度35差異不顯著(圖6)。鹽度小于20時(shí)波紋巴非蛤全部死亡。

圖6 鹽度對(duì)波紋巴非蛤稚貝生長(zhǎng)的影響

3 討 論

20世紀(jì)80年代起，我國(guó)對(duì)波紋巴非蛤育苗及養(yǎng)殖技術(shù)陸續(xù)開展了一系列研究[16-19]。吳洪流等[20-22]觀察了波紋巴非蛤的性腺組織組織學(xué)，并對(duì)性腺發(fā)育進(jìn)行了分期，為育苗工作提供了理論依據(jù)及指導(dǎo)。陳何東[23]進(jìn)行了波紋巴非蛤育苗試驗(yàn)，在28～29 ℃，海水相對(duì)密度1.021～1.022下育成了大量的波紋巴非蛤稚貝，在室外軟泥底池塘中進(jìn)行了稚貝培育。王萬東等[24-26]在育苗過程中發(fā)現(xiàn)，高溫天氣對(duì)育苗產(chǎn)生負(fù)面影響。徐小偉等[27]系統(tǒng)研究了幾種生態(tài)因子對(duì)波紋巴非蛤胚胎發(fā)育的影響，發(fā)現(xiàn)波紋巴非蛤胚胎發(fā)育的適宜溫度為27～30 ℃；適宜鹽度為27～33，與本研究的結(jié)果一致。徐小偉等[28]對(duì)波紋巴非蛤的胚胎發(fā)育進(jìn)行了掃描電鏡觀察，豐富了胚胎發(fā)育的形態(tài)學(xué)內(nèi)容。洪一川等[29]在室外條件下對(duì)波紋巴非蛤進(jìn)行了催產(chǎn)及幼蟲培育，發(fā)現(xiàn)14.6～20 ℃時(shí)幼蟲發(fā)育緩慢且無法完成變態(tài)，23～29.6 ℃時(shí)則發(fā)育正常，這與本試驗(yàn)的結(jié)果相吻合。陳志等[30]通過響應(yīng)面法研究了溫度、鹽度和密度交互作用對(duì)波紋巴非蛤稚貝生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，鹽度對(duì)稚貝的生長(zhǎng)影響最為顯著，其次是溫度。李俊輝等[31-32]通過研究溫度及鹽度對(duì)波紋巴非蛤耗氧率及排氨率的影響發(fā)現(xiàn)，15～30 ℃，耗氧率和排氨率隨著溫度的升高而增大；在鹽度20～28時(shí)，耗氧率和排氨率隨著鹽度的升高而升高，28～36時(shí)，單位耗氧率與排氨率均隨鹽度的增大而降低。王冬梅等[33]發(fā)現(xiàn)，在鹽度為24～32時(shí)，波紋巴非蛤?yàn)V水率隨鹽度的升高而增大，鹽度為32～36時(shí)則隨鹽度的增大而減小。陳堅(jiān)等[1,30]的研究發(fā)現(xiàn)，波紋巴非蛤成貝隨著鹽度的升高存活率先升后降，適宜鹽度為24～36。張躍平等[34]首次對(duì)波紋巴非蛤胚胎及浮游幼蟲的形態(tài)發(fā)育和生長(zhǎng)特點(diǎn)進(jìn)行了報(bào)道,并與簾蛤科另外5種經(jīng)濟(jì)種類進(jìn)行了比較。邵艷卿等[35]利用組織學(xué)方法對(duì)斧文蛤(Meretrixlamarckii)性腺發(fā)育及生殖周期進(jìn)行了研究，在水溫29 ℃、鹽度28、pH 7.8～8.5的條件下由受精卵孵化成D形幼蟲，并經(jīng)培養(yǎng)最終發(fā)育變態(tài)為稚貝。

溫度和鹽度是決定育苗成敗的關(guān)鍵的重要因子。隨著波紋巴非蛤需求量的逐漸增加，大規(guī)模開展育苗工作迫在眉睫。根據(jù)近年公布的研究成果，在室外開展波紋巴非蛤育苗工作總是難以持續(xù)的獲得波紋巴非蛤成貝，這與南方各海區(qū)夏秋兩季的海水特點(diǎn)密切相關(guān)。夏季水溫合適，但雨水偏多，加之臺(tái)風(fēng)的影響，海水鹽度變化過大，各育苗中心受此影響較大。進(jìn)入秋冬季節(jié)，臺(tái)風(fēng)雨水減少，水溫下降至偏低的階段，對(duì)波紋巴非蛤的育苗工作不利。尋找合適的溫度及鹽度是育苗成敗的關(guān)鍵之一，本研究確立了育苗過程中的合適溫度、鹽度，對(duì)波紋巴非蛤育苗工作確立了有利條件。但是，其他因素，如餌料、光照、pH值等影響波紋巴非蛤發(fā)育的環(huán)境因子的研究還不充分，需要深入研究。

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