張 穎，金美花，杜玉玲

（ 吉林省延邊州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，吉林 延邊 133002）

定性檢查就是對研究對象進(jìn)行“本質(zhì)”方面的檢查，即確定是什么，而不注重量的多少。很多方法可以診斷出動(dòng)物患何種或哪些寄生蟲病。

1 直接涂片法

直接涂片法是將少量糞便搗碎涂布于1滴生理鹽水中，該方法簡單、快速。門診檢查時(shí)，許多小動(dòng)物從業(yè)者通常將黏附在直腸溫度計(jì)上的糞便直接涂在載玻片上，并加蓋玻片以提高光學(xué)效果、抑制液體流動(dòng)并防止沾污顯微鏡的物鏡。利用鹽水（而不是水）是為了防止原蟲滋養(yǎng)體的溶解，因?yàn)楫?dāng)滲透壓改變時(shí)蟲體容易變形。由于制成的混懸液必須稀薄到足以允許顯微觀察的程度，故只能檢查少許糞便，該方法的唯一缺點(diǎn)就是檢出率低。陰性結(jié)果不可靠，但陽性結(jié)果與其他更有效的濃集技術(shù)獲得的結(jié)果一致。實(shí)際上，當(dāng)處理脆弱的蟲體如線蟲幼蟲和原蟲滋養(yǎng)體時(shí)，其會(huì)受漂浮液的影響而變形或被破壞，或者相對密度大的蟲卵在漂浮液中無法漂浮，在此情況下涂片法比濃集法更具優(yōu)勢。新鮮糞便的直接涂片可以觀察到阿米巴蟲、鞭毛蟲、線蟲幼蟲等蟲體的運(yùn)動(dòng)。因此，濃集技術(shù)應(yīng)該是作為補(bǔ)充而不是替代直接涂片法，但在實(shí)際操作中，通常采用其中一種方法作為常規(guī)的檢測方法。

2 糞便中寄生蟲抗原的檢測

利用各種抗原捕獲免疫試驗(yàn)來檢測糞便中的抗原（糞抗原）越來越普遍。寄生蟲糞抗原的檢測，特別是賈第蟲和隱孢子蟲的檢測方法已存在較長時(shí)間了。目前，常規(guī)的檢測犬、貓糞便中賈第蟲囊壁抗原的方法是愛德士SNAP Giadia Test，許多實(shí)驗(yàn)室利用類似的平板試驗(yàn)對送檢樣品進(jìn)行檢測。

為了將危險(xiǎn)的細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲蟲卵與豆?fàn)顜Ы{蟲及其他帶科絳蟲蟲卵進(jìn)行區(qū)分，則需要研制檢測這些寄生蟲糞抗原的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。該方法的建立使某些實(shí)驗(yàn)室檢測寄生蟲抗原成為可能，有可能區(qū)分細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲，并與其他帶科絳蟲種類和其他腸道寄生蟲及病原體區(qū)分開來。從而也表明這類抗原試驗(yàn)可用于犬棘球絳蟲病實(shí)驗(yàn)性感染的追蹤和療效的監(jiān)測。目前，該方法已用于犬群中細(xì)粒棘球絳蟲和多房棘球絳蟲的檢測，以及此類疾病控制效果的監(jiān)測。

關(guān)于通過糞抗原診斷牛毛圓線蟲病的有效性，目前正在進(jìn)行研究。用初篩?；蚱渌雌c獸的藥敏試驗(yàn)已證實(shí)糞抗原具有較高的實(shí)用性。糞抗原捕獲ELISA用于牛實(shí)驗(yàn)性感染奧氏奧斯特線蟲的結(jié)果非常理想，在感染過程中糞抗原水平升高。遺憾的是在感染早期，ELISA值與剖檢查到的蟲體數(shù)量并不完全一致，但有某種程度的相關(guān)性。近期研究發(fā)現(xiàn)用ELISA檢測綿羊寄生的環(huán)紋背板線蟲也取得了預(yù)期的效果，且糞便樣品熱處理可使交叉反應(yīng)減至最小。完全有理由相信糞抗原ELISA檢測技術(shù)的應(yīng)用將越來越普遍，正如檢測賈第蟲一樣成為一種常規(guī)方法。

3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）

在幾種原蟲檢測中，選擇不同的遺傳標(biāo)記檢測糞便中不同寄生蟲已成為常規(guī)技術(shù)。其中，應(yīng)用最為普遍的是目前檢測賈第蟲和隱孢子蟲的多種技術(shù)。這些技術(shù)的迅速發(fā)展得益于對不同水源性人獸共患病中寄生蟲的溯源。最近，不同毛圓線蟲的檢測工作已開始進(jìn)行。一旦這些工作與定量試驗(yàn)相結(jié)合，采用糞便中提取的DNA，就可以確定反芻動(dòng)物體內(nèi)不同蟲體的相對蟲荷。反向線點(diǎn)雜交也于最近用于馬圓線蟲的鑒定，如果該方法能應(yīng)用于宿主糞便以及對其各自寄生蠕蟲的檢測，將會(huì)成為多數(shù)家畜感染診斷的一個(gè)強(qiáng)有力的工具。

4 蟲卵和包囊的漂浮濃集

所有的漂浮技術(shù)均是利用寄生蟲與相關(guān)食物殘?jiān)g浮力的差異。如果將糞便混于水中，蟲卵和糞渣將沉淀下來，這樣便可以去除上清液中的脂肪以及溶解的色素。然后將此沉淀物重懸于密度介于蟲卵和碎糞渣之間的溶液中，蟲卵將浮于上層而碎糞渣將沉于下層。基于漂浮原理的技術(shù)可以有效用于檢測線蟲、絳蟲卵和一些原蟲包囊，但是不能用于檢測某些吸蟲卵，且可使原蟲滋養(yǎng)體和某些線蟲幼蟲變形并使原蟲包囊難以辨別。硫酸鋅（相對密度1.18）對于漂浮原蟲包囊和線蟲幼蟲來說優(yōu)于蔗糖，原因是硫酸鋅使包囊和幼蟲皺縮變形的速度比蔗糖慢。

糞便攪勻并不意味著就能得到精確的結(jié)果。重視其基本原理要比實(shí)際操作步驟更為重要。重力可以代替離心力，但由于力量很弱，因此需要較長時(shí)間。許多商業(yè)化生產(chǎn)的一次性糞便分析試劑盒便是基于重力原理而設(shè)計(jì)的，也獲得了滿意的結(jié)果。如果用硝酸鈉溶液（相對密度1.20）作為漂浮溶液，制作的玻片樣本10 min內(nèi)即可檢查完畢。而飽和蔗糖溶液需要在15～20 min才能檢查完畢，原因是蔗糖黏性較大。但使用硝酸鈉的一個(gè)缺點(diǎn)是載玻片必須及時(shí)檢測，否則可能由于滲透壓破壞蟲體形態(tài)而使蟲體很難辨認(rèn)，或者由于硝酸鈉的結(jié)晶可能使顯微鏡視野模糊不清。