劉紫薇，楊慶根，張朝，高琴，肖先儀，尤本武，陳學(xué)平

1 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)煙草與健康研究中心，安徽合肥市徽州大道1129號(hào)，230051；

2 江西省煙草公司贛州市公司，江西贛州市青年路40號(hào)，341000；

3 安徽中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，安徽合肥市天達(dá)路9號(hào)，230088；

4 安徽皖南煙葉有限責(zé)任公司，宣城市鰲峰中路72號(hào)，242000

據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全世界6％的陸地和20％的灌溉農(nóng)用地是鹽堿地，預(yù)計(jì)至2050年將有50％以上的耕地發(fā)生鹽堿化[1]。土地鹽堿化影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定和生物多樣性，已成為世界性的環(huán)境問題。鹽堿脅迫影響植物生長發(fā)育，導(dǎo)致植物產(chǎn)量和品質(zhì)下降，是主要的非生物逆境因素之一[2]。由堿性鹽造成的土壤堿化除滲透脅迫、離子毒害、營養(yǎng)缺失外，還存在高pH危害，比由中性鹽造成的土壤鹽化問題更加嚴(yán)重[3]。趙楠等[4]研究表明隨堿脅迫濃度升高堿蓬種子萌發(fā)以及幼苗生長均降低；堿脅迫下枸杞活性氧代謝、離子均衡等方面均遭到比鹽脅迫下更大的破壞[5]；低濃度鹽脅迫可促進(jìn)虎尾草生物量增加，而相同堿脅迫則會(huì)降低其生物量[6]。植物對(duì)鹽堿脅迫的適應(yīng)過程復(fù)雜，研究植物對(duì)堿脅迫的響應(yīng)機(jī)制對(duì)改良利用鹽堿土地具有重要意義。

血紅素加氧酶(heme oxygenase，HO)是催化降解血紅素(Heme)的起始酶和限速酶，存在3種不同亞型(HO-1、HO-2和HO-3)。研究表明HO在植物中有多種重要功能，Lin等[7]研究發(fā)現(xiàn)HO-1參與黃瓜不定根的伸長。Chen等[8]研究表明，小麥幼苗葉片中H2O2通過誘導(dǎo)HO的表達(dá)以提高氧化脅迫適應(yīng)性。Cui等[9]研究發(fā)現(xiàn)苜蓿HO-1參與了水楊酸對(duì)重金屬鎘造成的氧化脅迫的緩解。

氯化血紅素(hemin)是天然血紅素的體外純化形式，其化學(xué)性質(zhì)與血紅素類似。Hemin既是HO-1的底物，同時(shí)又是HO-1的促進(jìn)劑，能誘導(dǎo)HO-1的活性，提高植物抵抗氧化脅迫的能力并調(diào)節(jié)植物代謝[10]。研究表明，血紅素可誘導(dǎo)番茄側(cè)根形成[11]，緩解鹽脅迫對(duì)小麥幼苗[12]和煙草幼苗[13]的傷害。但目前有關(guān)氯化血紅素誘導(dǎo)植物抵御堿脅迫的研究尚未見報(bào)道。本研究通過向培養(yǎng)液中加入Na2CO3進(jìn)行煙苗的堿協(xié)迫實(shí)驗(yàn)，研究不同濃度hemin預(yù)處理對(duì)煙株抵御堿脅迫的影響，并測(cè)定煙株抗氧化酶活力、抗氧化物質(zhì)和抗?jié)B透物質(zhì)含量、無機(jī)離子吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)以及相關(guān)基因表達(dá)以探究外源hemin誘導(dǎo)煙株抵御堿脅迫的機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

煙草品種“云煙 87”由安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供；氯化血紅素由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)提供；RNA提取試劑盒和熒光定量PCR試劑盒購于北京天根生物技術(shù)有限公司；Taq聚合酶和反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于大連TaKaRa公司。

1.2 生長條件與處理

將消毒后的煙草種子均勻撒于經(jīng)霍格蘭營養(yǎng)液潤濕的滅菌珍珠巖中，發(fā)芽后選取生長一致的3～4片真葉齡幼苗移至含有相同體積營養(yǎng)液的育苗盒中。分4組，每組設(shè)3盒重復(fù)，每盒12株，溫度(28±2)℃，16h光照/d。預(yù)處理24h后，將堿脅迫組和hemin組煙苗移入含有10mmol/LNa2CO3的營養(yǎng)液中，同時(shí)對(duì)照組更換營養(yǎng)液。具體操作如表1所示。堿脅迫10d后觀察煙株表型，并拍照取樣，提取RNA，進(jìn)行生理指標(biāo)測(cè)定。所有實(shí)驗(yàn)均設(shè)置3次重復(fù)。

表1 水培條件Tab.1 Hydroponics culture

1.3 生理指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生物量及相對(duì)含水量測(cè)定

取出完整煙株后用去離子水沖洗，濾紙吸干葉片及根部水分，稱取鮮重，量取根長。相對(duì)含水量測(cè)定采用李玲等[14]方法。

1.3.2 丙二醛(MDA)含量及相對(duì)電導(dǎo)率測(cè)定

相對(duì)電導(dǎo)率測(cè)定采用張清莉等[15]的方法，MDA測(cè)定采用硫代巴比妥酸比色法[16]。

1.3.3 抗氧化酶活力測(cè)定

SOD活力測(cè)定采用張清莉等[15]的方法；POD活力測(cè)定采用李玲等[14]的方法；APX活力測(cè)定采用鄒琦等[17]的方法；CAT活力測(cè)定參照南京建成生物試劑公司CAT測(cè)試試劑盒說明書。

1.3.4 光合色素含量和根系活力測(cè)定

光合色素含量測(cè)定采用丙酮提取法[18]，根系活力測(cè)定采用氯化三苯基四氮唑(TTC)法[17]。

1.3.5 谷胱甘肽(GSH)和抗壞血酸(AsA)含量測(cè)定

GSH含量測(cè)定參照南京建成生物工程研究所GSH測(cè)試盒說明書；AsA含量測(cè)定采用李玲等[14]的方法。

1.3.6 脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白及有機(jī)酸含量測(cè)定

脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量測(cè)定分別采用酸性茚三酮法[19]、蒽酮法[17]和考馬斯亮藍(lán)法[17]。有機(jī)酸含量測(cè)定采用李玲等[14]的方法。

1.3.7 Na+、K+、Ca2+、Mg2+ 含量測(cè)定

用去離子水沖洗植株3次，濾紙吸干后置于105℃烘箱殺青15min，后于80℃烘干至恒重。根和葉分別研磨成粉，利用Optima 7300DV等離子體原子發(fā)射光譜儀測(cè)定各元素含量。

1.3.8 相對(duì)定量PCR

莖葉混合物的總RNA提取參照植物總RNA提取試劑盒說明書。RNA反轉(zhuǎn)錄參照TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書。相對(duì)定量PCR測(cè)定參照北京天根公司SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)試劑盒說明書。應(yīng)用LightCycler96并設(shè)定兩步法PCR反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)。內(nèi)參基因?yàn)棣?tubulin，目的基因?yàn)镹tPDR1、NtPDR3、NtNAC和NtGSH1，引物序列見表2。

表2 基因引物序列Tab.2 Gene sequence of primers

1.4 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析，置信區(qū)間P＜0.05，統(tǒng)計(jì)分析軟件使用origin 9.1。

2 結(jié)果與討論

2.1 hemin對(duì)煙株生長的影響

如圖1所示，與對(duì)照組相比，堿脅迫組煙株生長受到抑制，葉片變小(圖1A，B)、發(fā)黃(圖1A，B)，鮮重(圖1C)、根長(圖1D)及相對(duì)含水量(圖1E)較對(duì)照組分別降低了59.00％，50.40％，19.60％。而經(jīng)hemin處理后，煙株鮮重和根長的生長抑制以及葉片發(fā)黃都得到明顯緩解，且相對(duì)含水量得到提高。經(jīng)1μmol/L hemin處理的煙株鮮重(圖1C)和根長(圖1D)較堿脅迫組分別增加了64.05％和47.56％，2μmol/L hemin處理的煙株鮮重(圖1C)和根長(圖1D)較脅迫組分別增加了47.80％和32.91％，經(jīng)1μmol/L hemin和2μmol/L hemin處理后相對(duì)含水量也分別增加了17.01％％，17.28％(圖1E)。

圖1 堿脅迫下hemin對(duì)煙株長勢(shì)(A,B)，鮮重(C)，根長(D)及相對(duì)含水量(E)的影響Fig.1 Effect of hemin on the growth(A,B),fresh weight(C),root length(D)and relative water content(E)of tobacco seedlings under alkali stress

2.2 hemin對(duì)光合色素含量及根系活力的影響

如圖2A所示，與對(duì)照組相比，堿脅迫下煙株的葉綠素a，葉綠素b，類胡蘿卜素含量分別減少了73.49％，67.66％，68.86％。經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后較堿脅迫組煙株葉綠素a含量分別增加了20.29％，75.80％，葉綠素b含量分別增加了13.98％，47.81％，類胡蘿卜素含量分別增加了23.45％，71.52％。受到堿脅迫后，煙株的根系活力較對(duì)照組降低了79.37％，而經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后根系活力較堿脅迫組分別升高了132.71％，129.00％(圖2B)。

圖2 對(duì)照組、堿脅迫組、hemin組煙株光合色素含量(A)和根系活力(B)Fig.2 Photosynthetic pigment content(A)and root activity(B)in the control,alkali stress and hemin groups

2.3 hemin對(duì)氧化脅迫損傷的影響

受到堿脅迫后，煙株體內(nèi)MDA含量(圖3A)以及相對(duì)電導(dǎo)率(圖3B)較對(duì)照組均有所升高。而經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin 處理后，與堿脅迫組相比，MDA含量(圖3A)分別減少了9.62％，10.84％，而相對(duì)電導(dǎo)率(圖3B)分別降低了15.97％和36.76％。

圖3 對(duì)照組、堿脅迫組、hemin組MDA含量(A)和相對(duì)電導(dǎo)率差異(B)Fig.3 MDA content(A)and relative electrical conductivity(B)in the natural,alkali stress and hemin groups

2.4 hemin對(duì)抗氧化酶活力的影響

如圖4A所示，堿脅迫下煙株SOD活力較對(duì)照組降低了 44.22％，經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后SOD活力較堿脅迫組分別升高了23.76％，62.96％。如4B所示，受到堿脅迫后煙株P(guān)OD活力較對(duì)照組有小幅度升高(19.07％)，而經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后POD活力大幅度提升，與堿脅迫組相比，分別升高了221.26％，198.54％。如圖4C所示，堿脅迫組煙株CAT活力較對(duì)照組降低了 54.99％，而經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后CAT活力較堿脅迫組分別升高了71.51％，36.89％。如圖4D所示，堿脅迫處理后煙株APX活力較對(duì)照組降低了31.90％，經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后APX活力較堿脅迫組分別升高了72.89％，67.71％。

圖4 對(duì)照組、堿脅迫組、hemin組煙株SOD(A),POD(B),CAT(C)和APX(D)活力Fig.4 Activity of SOD(A),POD(B),CAT(C)and APX(D)in the control,alkali stress and hemin groups

2.5 hemin對(duì)抗氧化物質(zhì)含量的影響

如圖5A所示，與對(duì)照組相比，堿脅迫組還原型AsA和脫氫AsA含量分別增加了8.99％，38.45％。經(jīng)1μmol/L hemin預(yù)處理后，其還原型AsA含量比堿脅迫組減少了63.08％，脫氫AsA含量增加了16.96％；2μmol/L hemin預(yù)處理后，還原型AsA含量減少了40.82％，而脫氫AsA增加了33.18％。如圖5B所示，煙株受到堿脅迫后，GSH含量較對(duì)照組增加了 26.88％，經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin 處理后煙株體內(nèi)GSH含量較堿脅迫組顯著下降，分別下降了50.87％，48.50％。

圖5 對(duì)照組、堿脅迫組、hemin組煙株AsA(A),GSH(B)含量Fig.5 Contents of AsA(A)and GSH(B)in the control,alkali stress and hemin groups

2.6 hemin對(duì)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響

如圖6A所示，煙株受到堿脅迫后，脯氨酸含量比對(duì)照組增加了271.86％，經(jīng)1μmol/L hemin處理后煙株體內(nèi)脯氨酸較堿脅迫組增加了300.54％，2μmol/L hemin處理后脯氨酸含量積累較少，增加了26.37％。如圖6B所示，堿脅迫下，煙株體內(nèi)可溶性糖含量較對(duì)照組減少了34.05％，經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后可溶性糖含量較堿脅迫組分別增加了49.07％，9.38％。如圖6C所示，煙株體內(nèi)可溶性蛋白含量在受到堿脅迫后較對(duì)照組降低了48.95％，而經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后，可溶性蛋白含量較堿脅迫組分別增加了30.12％，16.87％。如圖6D所示，受到堿脅迫后，煙株葉部有機(jī)酸含量較對(duì)照組增加了27.78％，而根部有機(jī)酸含量則減少了24.81％。經(jīng)hemin處理后，葉部和根部有機(jī)酸含量較堿脅迫組均出現(xiàn)下降。1μmol/L hemin處理后葉部和根部有機(jī)酸含量分別減少了15.55％，28.11％，2μmol/L hemin處理后葉部和根部有機(jī)酸含量分別減少了13.80％，36.61％。

圖6 對(duì)照組、堿脅迫組、hemin組煙株脯氨酸含量(A),可溶性糖含量(B)和可溶性蛋白含量(C)及有機(jī)酸含量(D)Fig.6 Contents of prolinecontent(A),soluble sugar(B),soluble protein(C)and organic acid(D)in the control,alkali stress and hemin groups

2.7 hemin對(duì)離子含量的影響

如圖7A所示，受到堿脅迫后煙株體內(nèi)Na+大量積累，相比于對(duì)照組葉部和根部Na+分別增加了133.94％和35.65％。經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后，葉部Na+含量較堿脅迫組分別減少了16.56％和21.98％，根部Na+含量分別減少了17.05％和18.94％。如圖7B所示，堿脅迫組葉部和根部K+含量較對(duì)照組都有所降低，經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin 處理后，K+的吸收得以提高，葉部較堿脅迫組分別增加了17.01％和14.41％，根部分別增加了42.46％和28.94％。此外，經(jīng)hemin處理后，煙株根部和葉部的K+/Na+比均有提高(圖7C)。如圖7D所示，堿脅迫下煙株體內(nèi)Ca2+含量大量降低，葉部和根部較對(duì)照組分別減少了48.02％和52.45％，而經(jīng)hemin處理后葉部和根部Ca2+含量較堿脅迫組均得以增加。其中1μmol/L hemin處理后分別增加了50.97％和59.98％，2μmol/L hemin處理后分別增加了37.47％和41.07％。如圖7E所示，受到堿脅迫后煙株體內(nèi)Mg2+含量降低，葉部和根部相比于對(duì)照組分別減少了42.86％和43.59％。經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后，較堿脅迫組葉部Mg2+含量分別增加了40.99％和24.88％，根部Mg2+含量分別增加了65.04％和49.22％。

圖7 對(duì)照組、堿脅迫組、hemin組煙株Na+(A)、K+(B)、K+/Na+(C)、Ca2+(D)和Mg2+(E)含量Fig.7Na+ content(A),K+ content(B),K+/Na+(C),Ca2+ content(D),and Mg2+ content(E)in the control,alkali stress and hemin groups

2.8 hemin對(duì)相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖8A所示，NtPDR1和NtPDR3基因在受到堿脅迫后相對(duì)表達(dá)量均上調(diào)，經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin處理后上調(diào)更加顯著。由8B可以看出，經(jīng)1μmol/L hemin，2μmol/L hemin 處理后，堿脅迫下的煙株NtNAC基因表達(dá)大幅上調(diào)。如圖8B所示，堿脅迫組NtGSH1基因表達(dá)下調(diào)，而經(jīng)hemin處理后基因表達(dá)上調(diào)，2μmol/L hemin處理組上調(diào)尤其顯著。

圖8 對(duì)照組組、堿脅迫組、hemin組煙株幼苗NtPDR(A)、NtNAC(B)和NtGSH1(B)基因相對(duì)表達(dá)量Fig.8 Expression of NtPDR(A),NtNAC(B)and NtGSH1(B)genes in the control,alkali stress and hemin groups

3 討論

受到堿脅迫后煙株生長受到抑制，葉片減小發(fā)黃且根長變短，膜脂質(zhì)過氧化程度加劇。經(jīng)外源hemin處理后，上述現(xiàn)象均得到緩解。Han等[20]研究表明，氯化汞導(dǎo)致苜蓿脂質(zhì)過氧化及根的伸長抑制，加入高鐵血紅素則有效減少脂質(zhì)過氧化物含量并促進(jìn)根的伸長，增加SOD等抗氧化酶活性。本研究中Hemin處理可增加煙株根系活力；誘導(dǎo)煙草體內(nèi)SOD、POD、CAT和APX等抗氧化酶活力大幅提高，從而消除多余活性氧，將過量H2O2轉(zhuǎn)化為水和分子氧，這與尤本武等[21]的研究結(jié)果一致。AsA能與O2-反應(yīng)并能猝滅O2-和清除H2O2

[22]；脅迫條件下，H2O2等活性氧也可被GSH還原。Hemin處理后煙株體內(nèi)還原型AsA與GSH較堿脅迫組減少，可能是hemin促進(jìn)了還原型AsA和GSH與活性氧的反應(yīng)，因而AsA和GSH被大量消耗，同時(shí)降低了煙株的氧化損傷。

鹽脅迫下植物受到滲透脅迫，可通過積累對(duì)細(xì)胞無毒的有機(jī)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來進(jìn)行滲透調(diào)節(jié)以增強(qiáng)其耐鹽能力[23]。Hemin誘導(dǎo)脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白等滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)大量產(chǎn)生與積累有利于煙株在堿脅迫下對(duì)水分的吸收，并維持細(xì)胞滲透壓，以保證細(xì)胞正常生理功能。堿脅迫實(shí)驗(yàn)結(jié)果預(yù)示著有機(jī)酸代謝調(diào)節(jié)可能與植物的抗堿機(jī)制密切相關(guān)[24-25]。郭立泉[26]等研究表明，堿脅迫引起星星草體內(nèi)有機(jī)酸的特異積累。而本研究中經(jīng)hemin處理后煙株體內(nèi)有機(jī)酸積累相較堿脅迫組出現(xiàn)減少，具體機(jī)理仍有待進(jìn)一步研究。

鹽脅迫下外界高濃度的Na+會(huì)取代細(xì)胞質(zhì)膜上的Ca2+，質(zhì)膜選擇透過性被破壞并導(dǎo)致胞內(nèi)離子外滲，抑制了根系對(duì)K+、Ca2+的吸收；同時(shí)大量Na+進(jìn)入細(xì)胞影響了部分酶的結(jié)構(gòu)和功能，從而破壞細(xì)胞新陳代謝，導(dǎo)致鹽害[25]；K+、Ca2+、Mg2+是植物生長發(fā)育中重要的無機(jī)離子[27-28]。Hemin可通過降低煙株體內(nèi)Na+積累，增加K+、Ca2+和Mg2+的吸收，提高煙株K+/Na+比，從而緩解堿脅迫對(duì)煙株造成的滲透脅迫和離子毒害，提高煙株的抗堿能力。胡冰等研究[29]也表明高鐵血紅素可以維持鹽脅迫下小麥幼苗根部的離子穩(wěn)態(tài)。Lee等研究證實(shí)擬南芥的AtPDR12所編碼的蛋白在金屬離子的轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起作用[30]。而NtPDR1是AtPDR12的直系同源基因。本研究中hemin 誘導(dǎo)NtPDR1基因表達(dá)上調(diào)，NtPDR1蛋白可能參與了金屬離子Na+、K+、Ca2+、Mg2+等的轉(zhuǎn)運(yùn)。Ducos E研究表明NtPDR3轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可能起到獲取鐵離子的作用[31]。Hemin誘導(dǎo)NtPDR3基因表達(dá)上調(diào)可能促使NtPDR3蛋白從外界向胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)鐵離子，緩解堿脅迫造成的礦質(zhì)元素缺失。

受到脅迫時(shí)植物通過一系列信號(hào)傳遞激發(fā)轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)生，轉(zhuǎn)錄因子與相應(yīng)順式作用元件結(jié)合可激活下游逆境相關(guān)基因表達(dá)[32]。諸多研究也表明了NAC類轉(zhuǎn)錄因子參與非生物脅迫應(yīng)答且發(fā)揮重要作用[33-36]。Hemin處理誘導(dǎo)NtNAC基因表達(dá)上調(diào)，合成NAC轉(zhuǎn)錄因子，并通過基因產(chǎn)物對(duì)堿脅迫做出適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)反應(yīng)。NtGSH1基因表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)GSH合成，加強(qiáng)GSH與活性氧反應(yīng)，清除多余自由基，從而緩解氧化損傷。

4 結(jié)論

外源hemin處理可有效改善堿脅迫下煙株的生長抑制。一方面提高SOD、POD、CAT、APX等抗氧化酶活力，促進(jìn)抗氧化物質(zhì)AsA和GSH與活性氧反應(yīng)并消除多余活性氧；增加脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白等滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量，維持細(xì)胞滲透勢(shì)。另一方面增加根系活力，加強(qiáng)營養(yǎng)物質(zhì)吸收；降低煙株體內(nèi)Na+積累，促進(jìn)K+、Ca2+、Mg2+吸收，維持離子穩(wěn)態(tài)。同時(shí)hemin參與誘導(dǎo)NtPDR1、NtPDR3以及轉(zhuǎn)錄因子NtNAC基因表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)金屬離子和次生代謝物轉(zhuǎn)運(yùn)、激素調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及營養(yǎng)元素吸收，從而緩解堿脅迫對(duì)煙株造成的傷害。本研究結(jié)果表明，外源hemin處理可誘導(dǎo)煙株抵御堿脅迫，可作為新型高效抗逆性物質(zhì)。關(guān)于hemin的其他抗逆性功能還有待更多研究。

[1] Wang W,Vinocur B,Altman A.Plant responses to drought,salinity and extreme temperatures:towards genetic engineering for stress tolerance[J].Planta,2003,218(1):1-14.

[2] Zhu J K.Plant salt tolerance[J].Trends in plant science,2001,6(2):66-71.

[3] Yang C,Shi D,Wang D.Comparative effects of salt and alkali stresses on growth,osmotic adjustment and ionic balance of an alkali-resistant halophyte Suaeda glauca(Bge.)[J].Plant Growth Regulation,2008,56(2):179.

[4] 趙楠,蘆艷,左進(jìn)城,等.堿脅迫對(duì)堿蓬種子萌發(fā)的影響[J].北方園藝,2012(1):45-47.ZHAO Nan,LU Yan,ZUO Jincheng,et al.Effect of alkali stress on seed germination of Suaeda glauca Bunge[J].Northern Horticulture,2012(1),1:45-47.

[5] 毛桂蓮,許興,楊涓.NaCl 和Na2CO3對(duì)枸杞的脅迫效應(yīng)[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究,2004,22(2):100-104.MAO Guilian,XU Xing,YANG Juan.Eff ects of NaCl andNa2CO3on Lycium Barbarum L.[J].Agricultural Research in the Arid Areas,2004,22(2):100-104.

[6] Yang C W,Jianaer A,Li C Y,et al.Comparison of the eff ects of salt-stress and alkali-stress on photosynthesis and energy storage of an alkali-resistant halophyte Chloris virgata[J].Photosynthetica,2008,46(2):273-278.

[7] Lin Y T,Li M Y,Cui W T,et al.Haem oxygenase-1 is involved in hydrogen sulfide-induced cucumber adventitious root formation[J].Journal of Plant Growth Regulation,2012,31(4):519-528.

[8] Chen X Y,Ding X,Xu S,et al.Endogenous hydrogen peroxide plays a positive role in the upregulation of heme oxygenase and acclimation to oxidative stress in wheat seedling leaves[J].Journal of Integrative Plant Biology,2009,51(10):951-960.

[9] Cui W,Li L,Gao Z,et al.Haem oxygenase-1 is involved in salicylic acid-induced alleviation of oxidative stress due to cadmium stress in Medicago sativa[J].Journal of experimental botany,2012,63(15):5521-5534.

[10] Zilli C G,Balestrasse K B,Yannarelli G G,et al.Heme oxygenase up-regulation under salt stress protects nitrogen metabolism in nodules of soybean plants[J].Environmental and experimental botany,2008,64(1):83-89.

[11] Xu S,Zhang B,Cao Z Y,et al.Heme oxygenase is involved in cobalt chloride-induced lateral root development in tomato[J].Biometals,2011,24(2):181-191.

[12] Huang B K,Xu S,Xuan W,et al.Carbon Monoxide Alleviates Salt‐Induced Oxidative Damage in Wheat Seedling Leaves[J].Journal of Integrative Plant Biology,2006,48(3):249-254.

[13] Zhang J,Yang X,Ren Y,et al.β-Cyclodextrin–hemin enhances tolerance against salinity in tobacco seedlings by reestablishment of ion and redox homeostasis[J].Plant Growth Regulation,2017,81(3):533-542.

[14] 李玲,李娘輝,蔣素梅.植物生理學(xué)模塊實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].科學(xué)出版社,北京,2009.LI Ling,LI Nianghui,JIANG Sumei.Plant physiology module experiment guidance[M].Beijing:Science press,2009.

[15] 張清莉,劉再強(qiáng),鐘玉德,等.BABA 誘導(dǎo)煙草抵御高鹽脅迫的初步研究[J].中國煙草學(xué)報(bào),2015,21(3):72-81.ZHANG Qingli,LIU Zaiqiang,ZHONG Yude,et al.A preliminary study on BABA-induced resistance to high salt stress in tobacco[J].Acta Tabacaria Sinica,2015,21(23):72-81.

[16] Stewart R R C,Bewley J D.Lipid peroxidation associated with accelerated aging of soybean axes[J].Plant Physiology,1980,65(2):245-248.

[17] 鄒琦.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，北京，2000.ZOU Qi.Plant physiology experimental guidance[M].China Agriculture Press,BeiJing,2000.

[18] 朱廣廉,鐘誨文,張愛琴.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京大學(xué)出版社,1990.ZHU Guanglian,ZHONG Huiwen,ZHANG Aiqin.Plant physiology experiment[M].Peking University Press,1990.

[19] Michael P I,Krishnaswamy M.The eff ect of zinc stress combined with high irradiance stress on membrane damage and antioxidative response in bean seedlings[J].Environmental and experimental botany,2011,74:171-177.

[20] Han Y,Xuan W,Yu T,et al.Exogenous Hematin Alleviates Mercury‐induced Oxidative Damage in the Roots of Medicago sativa[J].Journal of integrative plant biology,2007,49(12):1703-1713.

[21] 尤本武,董建江,劉紫薇,等.β-氨基丁酸誘導(dǎo)煙草抗堿初步研究[J].中國煙草學(xué)報(bào),2017,23(1):86-94.YOU Benwu,DONG Jianjiang,LIU Ziwei,et al.Preliminary study on BABA-induced resistance to alkaline stress in tobacco[J].Acta Tabacaria Sinica,2017,23(1):86-94.

[22] Davey M W,Montagu M V,Inzé D,et al.Plant L‐ascorbic acid:chemistry,function,metabolism,bioavailability and effects of processing[J].Journal of the Science of Food and Agriculture,2000,80(7):825-860.

[23] 許祥明,葉和春,李國鳳.植物抗鹽機(jī)理的研究進(jìn)展[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào),2000,6(4):379-387.XU Xiangming,YE Hechun,LI Guofeng.Study on salt resistance mechanism of plants[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2000,6(4):379-387.

[24] ZHANG Y,LIN Q,LIU J,et al.Effects of Drought Stress on Photosynthetic Characteristics and Yield of Diff erent Fertilizer and Water Types of Wheat[J].Journal of Triticeae Crops,2011,4:026.

[25] Shi D,Yin S,Yang G,et al.Citric acid accumulation in an alkalitolerant plant Puccinellia tenuiflora under alkali stress[J].Acta Botanica Sinica,2001,44(5):537-540.

[26] 郭立泉,陳建欣,崔景軍,等.鹽,堿脅迫下星星草有機(jī)酸代謝調(diào)節(jié)的比較研究[J].東北師大學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2009,41(4):123-128.GUO Liquan,CHEN Jianxin,CUI Jingjun,et al.Comparative study on metabolic regulation of organic acids in Puccinellia tenuiflora under salt and alkaline stress[J].Journal of Northeast Normal University(Natural Science),2009,41(4):123-128.

[27] Knight H,Trewavas A J,Knight M R.Calcium signalling in Arabidopsis thaliana responding to drought and salinity[J].The Plant Journal,1997,12(5):1067-1078.

[28] Parida A K,Das A B,Mittra B.Effects of salt on growth,ion accumulation,photosynthesis and leaf anatomy of the mangrove,Bruguiera parviflora[J].Trees-Structure and Function,2004,18(2):167-174.

[29] 胡冰,賀子義,林國慶,等.高鐵血紅素對(duì)鹽脅迫下小麥根部生長受抑的緩解和根尖中離子微域分布的影響[J].植物生理學(xué)通訊,2008,44(5):865-868.HU Bing,HE Ziyi,LIN Guoqing,et al.Effects of heme on mitigation of root growth inhibition and ion microdomain distribution in root tip of wheat under salt stress[J].Plant Physiology Communications,2008,44(5):865- 868.

[30] Lee M,Lee K,Lee J,et al.AtPDR12 contributes to lead resistance in Arabidopsis[J].Plant physiology,2005,138(2):827-836.

[31] Ducos E,Fraysse ? S,Boutry M.NtPDR3,an iron‐deficiency inducible ABC transporter in Nicotiana tabacum[J].FEBS letters,2005,579(30):6791-6795.

[32] 戚元成,王菲菲,劉衛(wèi)群,等.煙草中NAC 類轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及分析[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,44(11):2225-2233.QI Yuancheng,WANG Feifei,LIU Weiqun,et al.Cloning and analysis of NAC transcription factor gene in tobacco[J].Scientia Agricultura Sinica,2011,44(11):2225-2233.

[33] Yokotani N,Ichikawa T,Kondou Y,et al.Tolerance to various environmental stresses conferred by the salt-responsive rice gene ONAC063 in transgenic Arabidopsis[J].Planta,2009,229(5):1065-1075.

[34] Yoshii M,Yamazaki M,Rakwal R,et al.The NAC transcription factor RIM1 of rice is a new regulator of jasmonate signaling[J].The Plant Journal,2010,61(5):804-815.

[35] Yu X,Liu Y,Wang S,et al.CarNAC4,a NAC-type chickpea transcription factor conferring enhanced drought and salt stress tolerances in Arabidopsis[J].Plant cell reports,2016,35(3):613-627.

[36] Xu Z,Wang C,Xue F,et al.Wheat NAC transcription factor TaNAC29 is involved in response to salt stress[J].Plant Physiology and Biochemistry,2015,96:356-363.