(廣東醫(yī)科大學(xué)，廣東東莞，523808)

紫杉醇 (paclitaxel， PTX)是從紅豆杉屬植物紫杉醇的樹干和樹皮中提取得到的天然抗癌藥，它的作用位點(diǎn)是微管蛋白多聚體，它會(huì)與微管蛋白多聚體形成穩(wěn)定的微管束，使微管束解聚形成紡錘體，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，是近年來腫瘤化療的最重要的發(fā)現(xiàn)之一[1-2]。PTX對(duì)乳腺癌、卵巢癌有良好的治療效果，但缺點(diǎn)是水溶性極差，為了改善其臨床用藥效果，目前臨床上使用的紫杉醇注射劑溶劑均是聚氧乙基蓖麻油和乙醇等體積比制成的，兩者均會(huì)引發(fā)人體不同程度的不良反應(yīng)，尤其是前者，會(huì)導(dǎo)致高敏性 、神經(jīng)毒性、腎毒性 、心臟毒性等不良反應(yīng)[3]，在給藥過程中能夠溶解靜脈注射液管中的增塑劑[4]，且 PTX本身對(duì)心臟和腎臟等組織亦有毒副作用，易給患者造成嚴(yán)重的全身毒副反應(yīng)，也大大限制了紫杉醇的臨床應(yīng)用效果[5]。因此，研發(fā)PTX的新劑型，減輕因溶劑引起的毒副作用對(duì)于臨床用藥有非常重要的意義。

最近，聚合物納米粒子已經(jīng)廣泛地被用作藥物載體。納米粒子在藥物靶向方面具有特殊的作用。由可生物降解和生物相容性的聚合物制備納米粒子的研究日益受到生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重視，這種納米粒子聚合物可控釋藥物，不僅增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性，提高療效，降低毒副作用， 而且可有效地越過許多生物屏障和組織間隙到達(dá)病灶部位，避免藥物降解和泄漏，從而更有效地對(duì)藥物進(jìn)行靶向輸送和控制釋放[4-6]。本實(shí)驗(yàn)在以前的工作中，成功合成到一種殼聚糖接枝聚賴氨酸芐酯嵌段聚合物[7]，它可以自組裝形成納米膠束用于負(fù)載疏水性的藥物。本研究主要探討了利用這種嵌段聚合物負(fù)載紫杉醇，為開發(fā)脂溶性藥物緩釋系統(tǒng)提供一條新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

CS-g-PZLL由本實(shí)驗(yàn)室自己合成得到，PTX購買于阿拉丁化學(xué)試劑，其余使用試劑均為分析純。

1.2 納米粒子的制備

將PTX和殼聚糖接枝聚賴氨酸芐酯(CS-g-PZLL)溶于DMSO中，然后將此溶液轉(zhuǎn)入分子量3000的透析袋中，于水中進(jìn)行透析24h，將透析得到的載藥膠束凍干即得。

1.3 納米粒子基本性質(zhì)研究

1.3.1 藥物的負(fù)載

用透析法將PTX負(fù)載于CS-g-PZLL。取PTX(5mg)和CS-g-PZLL(10mg)共同溶于5mL二甲基亞砜中，然后將溶液放入截留分子量(MWCO)3000的透析袋中，用蒸餾水透析48h，將透析溶液通過0.45μm過濾器過濾并凍干得到PTX/CS-g-PZLL膠束。為了測(cè)定CS-g-PZLL對(duì)PTX的負(fù)載量，將得到的PTX/CS-g-PZLL載藥體系溶于二甲基亞砜中，在425nm處用紫外分光光度法(TU-1900, 中國)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果為PTX的負(fù)載率為18.9%。PTX負(fù)載率的計(jì)算公式如下：

LC=M1/M0×100%其中，M0為膠束質(zhì)量，M1為負(fù)載的PTX質(zhì)量。

1.3.2 釋放率檢測(cè)

為了測(cè)定PTX從該載藥體系中的釋放情況，將PTX/CS-g-PZLL載藥體系置于37°C的pH值為7.4的磷酸鹽(PBS)緩沖液中，即預(yù)先量取5mL的PTX/CS-g-PZLL PBS溶液封于MWCO 3000的透析袋中，然后將透析袋浸沒在20.0 mL的pH值7.4 PBS的緩沖液中。在預(yù)定的時(shí)間間隔中，取出2.0 mL的緩沖液用于測(cè)量藥物濃度并補(bǔ)充2.0mL的新鮮PBS。于227nm處使用紫外分光光度法(TU-1900, China)測(cè)出PTX的釋放情況。所有測(cè)量實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3次，取均值。

1.3.3 載藥納米粒子的粒徑檢測(cè)

將如1.3.1制備得到的載藥膠束PTX/CS-g-PZLL用Zeta電勢(shì)分析儀(SZ-100Z，Horiba Ltd.，Japan)測(cè)量載藥膠束的粒度。

2 結(jié)果與討論

2.1 PTX從CS-g-PZLL中的釋放

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，CS-g-PZLL對(duì)紫杉醇的負(fù)載率為18.9%，其釋放速率隨時(shí)間變化趨勢(shì)如圖1所示。紫杉醇從膠束中的釋放速度經(jīng)歷了兩個(gè)階段，在最初的12小時(shí)里，PTX的釋放速率達(dá)到了35.2%，屬于快速釋放期。隨后進(jìn)入一個(gè)緩慢釋放期，72h后釋放量達(dá)到61.5%。前期的快速釋放有利于載體進(jìn)入細(xì)胞后迅速殺死癌細(xì)胞，后期的緩慢釋放有利于在細(xì)胞內(nèi)維持一定的藥物濃度。這樣一種釋放規(guī)律說明CS-g-PZLL是一種較好的紫杉醇載體。

2.2 PTX/CS-g-PZLL的粒徑分布

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，自主裝形成的PTX/CS-g-PZLL納米膠束，其測(cè)得的粒徑范圍在40-120nm之間。粒徑是載藥粒子能否順利進(jìn)入細(xì)胞，發(fā)揮抗腫瘤藥效的一個(gè)重要的指標(biāo)。以往的研究結(jié)果表明，粒徑范圍在50-400 nm 之間的粒子更適合被細(xì)胞通過胞吞的方式進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， CS-g-PZLL適合作為紫杉醇的藥物載體。

圖1 PTX在CS-g-PZLL中的釋放曲線

圖2 PTX/CS-g-PZLL的粒徑分布圖