褚一凡 ，陳登宇 ，2，劉從森 ，鄭慶委 ，2，管俊昌 ，2

（1.蚌埠醫(yī)學(xué)院，安徽 蚌埠 233030；2.安徽省感染與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 蚌埠 233030）

實(shí)驗(yàn)課在整個(gè)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)及臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)教學(xué)中地位都十分重要[1]。提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量的關(guān)鍵之一，在于實(shí)驗(yàn)教學(xué)物品的準(zhǔn)備工作。微生物實(shí)驗(yàn)課不同于其他形態(tài)學(xué)課程，使用的物品多是活菌，因而如果沒有事先準(zhǔn)備的新鮮培養(yǎng)的及純化的細(xì)菌、菌種，學(xué)生實(shí)驗(yàn)時(shí)就可能無法做出正確的細(xì)菌傳代培養(yǎng)物、生化反應(yīng)結(jié)果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)教學(xué)失敗。如何做到事半功倍、高效率、高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，是擺在實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備人員、實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員和青年教師面前的一個(gè)課題[2]。新進(jìn)的微生物學(xué)青年教師入職一兩年，根據(jù)教師培養(yǎng)計(jì)劃，要參加實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作，以利于其熟悉菌種、實(shí)驗(yàn)室，掌握實(shí)驗(yàn)技能，為以后的課堂教學(xué)打牢專業(yè)技能基礎(chǔ)[3]。在長期的實(shí)驗(yàn)教學(xué)準(zhǔn)備實(shí)踐上，我們有了些心得和體會(huì)，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備中無菌操作的重要性

醫(yī)學(xué)院校中醫(yī)學(xué)及臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象一般是活的細(xì)菌，而且大多數(shù)是致病菌、病原菌或條件致病菌，如金葡菌、乙鏈?zhǔn)菢?biāo)準(zhǔn)的致病菌，個(gè)別細(xì)菌還有較強(qiáng)的致病性和傳染性，如傷寒桿菌、痢疾桿菌分別是乙類消化道傳染病傷寒、痢疾的病原體。因此要保證自身的安全，樹立無菌觀念、進(jìn)行無菌操作，切勿大意，以免實(shí)驗(yàn)室感染及污染[4]。微生物實(shí)驗(yàn)操作要規(guī)范，嚴(yán)格消毒滅菌，對(duì)于實(shí)驗(yàn)用過的有菌物品如玻璃器皿，要滅菌處理后洗刷干燥回收。無菌觀念的樹立、規(guī)范的無菌操作技術(shù)，是做好微生物實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備的基本功，對(duì)于微生物實(shí)驗(yàn)人員來說，是專業(yè)素養(yǎng)的體現(xiàn)，必須牢記并掌握，不然會(huì)害人害己。無菌操作是保障實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)轉(zhuǎn)的行為規(guī)范，必須嚴(yán)格遵守執(zhí)行，避免實(shí)驗(yàn)室感染或污染事故的發(fā)生。

2 相對(duì)豐富全面的理論知識(shí)才能保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行

理論知識(shí)是做好實(shí)驗(yàn)的奠基石，只有擁有全面豐富的理論知識(shí)，才能及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題、分析問題、解決問題。實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，可能會(huì)因?yàn)楦鞣N不確定因素導(dǎo)致結(jié)果的千差萬別。例如不同細(xì)菌所需生長周期不同，如果菌體未成熟或已老化，則達(dá)不到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[5]。例如大腸桿菌由于多次傳代，吲哚試劑滴進(jìn)去，培養(yǎng)物液面處變紅不明顯，吲哚試驗(yàn)結(jié)果不明顯；霍亂弧菌，實(shí)驗(yàn)室保存菌種常氧化酶陰性結(jié)果，與理論不符。這些基本都是菌種老化或退化的問題，應(yīng)該注意菌種的活化、復(fù)壯或更新標(biāo)準(zhǔn)菌株，保障學(xué)生實(shí)驗(yàn)時(shí)結(jié)果的可靠、穩(wěn)定。腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物，因培養(yǎng)基中還原劑，如果挑取SS平板培養(yǎng)物，則會(huì)出現(xiàn)氧化酶陽性的假陽性結(jié)果，正確做法是應(yīng)該取普通平板的培養(yǎng)物做氧化酶試驗(yàn)才能出現(xiàn)正確的陰性結(jié)果。扎實(shí)的理論知識(shí)是做好實(shí)驗(yàn)的奠基石，實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員發(fā)現(xiàn)問題、解決問題的能力在很大程度上取決于其理論知識(shí)水平和經(jīng)驗(yàn)積累，因而應(yīng)該注重理論的學(xué)習(xí)，才能從容應(yīng)對(duì)出現(xiàn)的問題和變化，并科學(xué)、合理地解決問題。

3 培養(yǎng)熟練的操作技能

對(duì)于醫(yī)學(xué)院校，為了培養(yǎng)學(xué)生的專業(yè)素養(yǎng)，微生物學(xué)作為醫(yī)學(xué)專業(yè)基礎(chǔ)課或?qū)I(yè)課，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容是豐富的，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作量是很繁重的，需做到又快又好，才能保障實(shí)驗(yàn)教學(xué)的順利進(jìn)行。熟練、規(guī)范的操作技能，可以保證實(shí)驗(yàn)操作的高效準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作繁雜，新進(jìn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員切勿為了量而忽略了質(zhì)，因?yàn)椴僮饕?guī)范與否，直接影響到實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的好壞。工作伊始，即使耗費(fèi)的時(shí)間長些，也要著重養(yǎng)成規(guī)范操作的習(xí)慣。比如，最常見的細(xì)菌接種，在每次接種前后，一定要灼燒接種環(huán)或接種針進(jìn)行滅菌，接種前滅菌是為防止環(huán)境中細(xì)菌污染標(biāo)本或純種細(xì)菌，接種后滅菌是防止標(biāo)本或純種細(xì)菌污染環(huán)境。而且灼燒滅菌后的接種環(huán)或接種針在挑取細(xì)菌之前一定要冷卻。重視細(xì)節(jié)、規(guī)范操作不僅是做好實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的必要條件，也是有效防止微生物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備過程中自身感染及環(huán)境污染的有效措施。

4 實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備要有統(tǒng)籌思想，避免重復(fù)勞動(dòng)

對(duì)于實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備的精心計(jì)劃、統(tǒng)籌安排、合理安排，是為了更有效率的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備。教學(xué)工作中，常常一周要針對(duì)不同專業(yè)學(xué)生的微生物實(shí)驗(yàn)課做幾個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備。一個(gè)準(zhǔn)備完了再做下一個(gè)，耗時(shí)耗力。各個(gè)實(shí)驗(yàn)中有相同步驟的，不妨合并在一起，如單糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、細(xì)菌生長現(xiàn)象就是安排在一次實(shí)驗(yàn)課中的?？梢韵雀邏撼鲆后w培養(yǎng)基，部分加入單糖為單糖發(fā)酵試驗(yàn)做準(zhǔn)備。部分加入吲哚和蛋白胨，供吲哚試驗(yàn)使用。細(xì)菌生長現(xiàn)象就需要液體培養(yǎng)基，其中的半固體培養(yǎng)基也可用液體和固體培養(yǎng)基成比例混合而成。掌握實(shí)驗(yàn)教學(xué)全局情況，關(guān)注教學(xué)進(jìn)度，了解耗材的使用情況。根據(jù)學(xué)生的課程內(nèi)容、上課人數(shù)、分組情況提前計(jì)算好下一周需要多少平板，需要哪些現(xiàn)配的染液、示教材料等，并預(yù)留幾份實(shí)驗(yàn)用品，這樣既不浪費(fèi)，又保證了材料充分，防止了教學(xué)事故的發(fā)生。學(xué)期結(jié)束前，保存菌種，整理上報(bào)下學(xué)期要用的試劑、培養(yǎng)基、耗材數(shù)量，以利于學(xué)校統(tǒng)一采購。

5 不要忽略預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確和穩(wěn)定

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備中常會(huì)受到多種影響而難以把握實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為了保證能達(dá)到預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，做預(yù)實(shí)驗(yàn)的重要性不言而喻[6]。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備人員對(duì)此應(yīng)認(rèn)真對(duì)待，不可忽略。做預(yù)實(shí)驗(yàn)也是為了讓實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員及青年教師能更好地理解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、需要的材料及操作過程。若有遺漏的實(shí)驗(yàn)物品，也可在預(yù)實(shí)驗(yàn)中查漏補(bǔ)缺。當(dāng)沒有達(dá)到預(yù)想結(jié)果時(shí)，追根溯源，找到原因。每一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想的原因都可能不同，例如菌種變異、試劑變質(zhì)甚至是試劑批次都會(huì)影響到預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。尋找原因是對(duì)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備人員觀察能力、解決問題能力的考驗(yàn)。如何精準(zhǔn)地發(fā)現(xiàn)是哪個(gè)環(huán)節(jié)出了偏差，并不是一蹴而就的，新進(jìn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員及教師不妨將每次的原因記下來，在摸索中不斷積累經(jīng)驗(yàn)。

6 不斷學(xué)習(xí)，提高綜合素質(zhì)

隨著基礎(chǔ)及檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展、微生物課程教學(xué)的發(fā)展，微生物課程的實(shí)驗(yàn)方法和儀器設(shè)備不斷更新，學(xué)生實(shí)驗(yàn)也在不斷改進(jìn)、內(nèi)容也在不斷更新。這些都是實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員及教師學(xué)習(xí)新知識(shí)的不懈動(dòng)力。只有潛下心來刻苦鉆研，提高綜合素質(zhì)，才能與時(shí)俱進(jìn)，迎接新的挑戰(zhàn)[7]。

做好微生物實(shí)驗(yàn)課實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備，才能確保實(shí)驗(yàn)教學(xué)的順利進(jìn)行，在實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備的過程中，還可以培養(yǎng)新進(jìn)微生物青年教師的實(shí)驗(yàn)技能、提高專業(yè)素養(yǎng)。我們總結(jié)了在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備中的經(jīng)驗(yàn)、技巧和教訓(xùn)，供同行相互借鑒、學(xué)習(xí)探討，以利于保質(zhì)保量地完成微生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)物品準(zhǔn)備工作。