任燕

摘 要：目的 探討手足口病患兒中血清淋巴細(xì)胞免疫分型水平變化，為診斷及治療手足口病提供臨床診治意義。方法 選取四川省宜賓市第一人民醫(yī)院2013年3月～2015年3月兒科手足口患兒 150例（分為重癥組54例，輕癥組96例）及行兒科保健健康兒童105例；采用流式細(xì)胞儀進行血清淋巴細(xì)胞免疫分型的水平檢測，并行組間比較。結(jié)果 重癥患兒血清淋巴細(xì)胞免疫分型水平較輕型低，輕型較健康兒童水平低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 手足口病患兒免疫功能較正常健康兒童呈降低趨勢，其中重癥患兒免疫功能更低，分析血清淋巴免疫細(xì)胞分型水平可作為手足口病患兒判斷疾病病情變化及臨床治療觀察的一種方法。

關(guān)鍵詞：手足口病；血清淋巴細(xì)胞免疫分型；T淋巴細(xì)胞

中圖分類號：R725.1 文獻標(biāo)識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.029

文章編號：1006-1959（2018）01-0082-03

Serum Level of Lymphocyte Immunophenotype in Children with Hand-foot-mouth Disease and its Clinical Significance

REN Yan

（Department of Pediatrics，F(xiàn)ourth People's Hospital of Yibin，Yibin 644000，Sichuan，China）

Abstract：Objective To investigate the changes of serum immunocytotyping in children with hand foot and mouth disease and provide clinical diagnosis and treatment of hand foot and mouth disease.Methods From Yibin First People's Hospital of Sichuan Province in March 2013～March 2015 pediatric HFMD patients in 150 cases（54 cases in severe group and 96 cases in mild group）and 105 healthy children for pediatric care；The detection of serum lymphocyte immunophenotyping by flow cytometry，parallel comparison between groups.Results Serum levels of lymphocyte subsets in children with severe light level is low，low level light compared with healthy children，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion The immune function of children with hand foot and mouth disease is lower than that of healthy children.The immune function of severe children is lower.The analysis of serum lymphoid immune cell typing level can be used as a way to diagnose the disease and to observe the clinical treatment of children with hand foot and mouth disease.

Key words：Hand foot and mouth disease；Serum lymphocyte immunophenotype；T lymphocyte

手足口?。╤and foot and mouth disease，HFMD）作為丙類傳染病，在學(xué)齡前期兒童發(fā)病率較高，尤其3歲兒童發(fā)病率最高，對兒童健康造成極大危害[1]，手足口病主要通過密切接觸、呼吸道等途徑進行傳播，臨床表現(xiàn)為手、足、口腔黏膜可見皮疹（以斑疹、皰疹常見）以及發(fā)熱等癥狀；兒童手足口病分為普通型及重癥型；重癥型手足口病患兒可出現(xiàn)肺水腫、心肌炎、呼吸循環(huán)衰竭、神經(jīng)中樞癥狀（如意識障礙、昏迷、腦水腫表現(xiàn)）等癥狀[2]。近年來研究表明，機體免疫系統(tǒng)下降在手足口病發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中發(fā)生重要作用；免疫功能變化表現(xiàn)為細(xì)胞免疫及體液免疫。T淋巴細(xì)胞是機體免疫中主要細(xì)胞免疫細(xì)胞，參與幾乎所有特異性免疫，可以直接抵抗各種細(xì)菌及病毒產(chǎn)生抗原，同時調(diào)節(jié)宿主體液免疫[3]。T淋巴細(xì)胞亞群之間的動態(tài)平衡，對維持機體細(xì)胞免疫及體液免疫尤為重要。本文旨在研究血清中淋巴細(xì)胞免疫分型水平變化，探討手足口患兒免疫功能變化，為臨床治療提供診治依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 選取四川省宜賓市第一人民醫(yī)院2013年3月～2015年3月兒科確診手足口病患兒150例，其中輕型患者96例，男50例，女46例，年齡1～7歲，平均年齡（3.1±1.04）歲；重型患者54例，男28例，女26例，年齡1～7歲，平均年齡（2.0±1.14）歲。手足口病患兒輕型表現(xiàn)：發(fā)熱體溫37.5～39 ℃，咳嗽、干咳為主，體征：手足口可見皰疹及斑疹；重型表現(xiàn)：患者發(fā)熱體溫維持在39℃以上，伴有頭痛、嘔吐、手抖，一過性癱瘓；查體：血壓下降，手足口可見斑疹及皰疹，偶有肝脾腫大，神經(jīng)系統(tǒng)、心血管受累等表現(xiàn)，意識障礙、心肌酶異常等）。兒科保健健康兒童105例，其中男75例，女30例，年齡1～7歲，平均年齡（3.0±1.04）歲。各組患者一般資料差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），有可比性。endprint

1.2儀器與試劑 用BD（Becton-Dick-inson）公司生產(chǎn)的FACSCaLibur流式細(xì)胞儀檢測儀器測定淋巴細(xì)胞免疫分型水平：淋巴細(xì)胞數(shù)（L）、T淋巴細(xì)胞百分比（CD3%）、CD8淋巴細(xì)胞百分比（CD8%）、CD4淋巴細(xì)胞百分比（CD4%）、CD4CD8均陽比例（CD4+CD8+%）、NK細(xì)胞百分比（CD16%）、B淋巴細(xì)胞百分比（CD19%）、T淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD3）、CD8淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD8）、CD4淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD4）、CD4CD8均陽計數(shù)、NK細(xì)胞計數(shù)（CD16）、B淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD19）、CD4/CD8。

1.3收集血清樣本方法 抽取實驗兒童外周靜脈血2.5 ml，放置在加用肝素抗凝真空試劑管中，充分混勻抗凝。放置在室內(nèi)，避光放置。抽取樣本采用Multiset四色免洗淋巴細(xì)胞亞群的絕對數(shù)方法，具體方法：①每個樣本取2支Trucount管，分別標(biāo)號A和B管；②分別在A管中加入10 μl的CD3/CD8/CD4/CD5抗體，B管中加入10 μl的CD3/CD16+CD56/CD45/CD19抗體；③用反向加樣法分別向A、B管中加入50 μl顛倒混勻的抗凝全血，然后渦旋混勻，室溫下避光15 min；④分別向A、B管中加入450 μl 1×FACS溶血素，充分混勻，室溫下放置10 min；⑤24 h內(nèi)上述樣本上機檢測，用Mutiset軟件檢測分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用統(tǒng)計軟件SPSS18對采集得出數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料采用（x±s）表示，同時對其數(shù)據(jù)行正態(tài)性檢驗，組間統(tǒng)計資料符合正態(tài)分布采用t檢驗，不符合正態(tài)分布采用方差分析檢驗，以P<0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

重癥組中淋巴細(xì)胞數(shù)（L）、T淋巴細(xì)胞百分比（CD3%）、CD8淋巴細(xì)胞百分比（CD8%）、CD4淋巴細(xì)胞百分比（CD4%）、CD4CD8均陽比例（CD4+CD8+%）、NK細(xì)胞百分比（CD16%）、B淋巴細(xì)胞百分比（CD19%）、T淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD3）、CD8淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD8）、CD4淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD4）、CD4CD8均陽計數(shù)、NK細(xì)胞計數(shù)（CD16）、B淋巴細(xì)胞計數(shù)（CD19）、CD4/CD8值均低于輕癥組，輕癥組較健康組低，見表1～表4。根據(jù)方差分析得出差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

手足口病在我國處于高發(fā)狀態(tài)，患兒感染如柯薩奇病毒等腸道病毒后，常見在口腔與皮膚上出現(xiàn)皰疹及丘疹，但是隨著病情的進展可出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征，嚴(yán)重可導(dǎo)致多器官功能衰竭。免疫低下患兒感染，常迅速發(fā)展為重型手足口?。灰虼藱z測患者免疫功能尤為重要[1，3，5]。機體免疫功能在手足口患兒疾病發(fā)生發(fā)展以及病情進展中發(fā)生常見作用，隨著大量臨床研究顯示，淋巴細(xì)胞亞群改變導(dǎo)致機體免疫功能受損可能同手足口病情進展有相關(guān)性。目前研究最多是T細(xì)胞亞群[2，4，6-8]。

血清中T淋巴細(xì)胞來源骨髓，成熟器官為胸腺。T淋巴細(xì)胞的特有標(biāo)志為TCR-CD3[T細(xì)胞（抗原）受體與CD3分子復(fù)合物]。T淋巴細(xì)胞根據(jù)其表面標(biāo)志和功能特性，可以分為CD3+CD8+的抑制性T淋巴細(xì)胞（CTL）以及CD3+CD4+的輔助性T淋巴細(xì)胞（CD4+Th）。CTL細(xì)胞通過分泌顆粒酶、穿孔素、通過FasL途徑等導(dǎo)致靶細(xì)胞的分解機凋亡[2，6，8-10]。CD4+Th細(xì)胞可繼續(xù)分化為分泌型的Th細(xì)胞亞群：Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th3細(xì)胞和Th17細(xì)胞。正常狀態(tài)下，T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量處于一個動態(tài)平衡并且相互調(diào)節(jié)的狀態(tài)。其值降低說明機體處于免疫抑制狀態(tài)，易受細(xì)菌及病毒、原蟲、真菌等因素感染[6，9，10-14]。

此臨床研究顯示，重癥組患兒血清中L、CD3%、CD8%、CD4%、CD16%、CD19%、CD3、CD8、CD4、CD16、CD19、CD4/CD8值明顯低于輕癥組，較健康組低，輕癥組較健康組低，說明病情隨著病情加重，細(xì)胞免疫功能處于明顯抑制狀態(tài)。其機制為：①當(dāng)機體遭受手足口病毒感染，如柯薩奇病毒等后，T淋巴細(xì)胞對病毒抗原刺激無增殖性反應(yīng)，T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生分裂及凋亡。使大量活化的T淋巴細(xì)胞遭到清除，并且誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞克隆無反應(yīng)，機體特異性免疫受到抑制[9，11，12-15]；②T淋巴細(xì)胞分化異常，CTL及CD4+Th不處于動態(tài)平衡，從而使分泌細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)，如IL-1、6、8、10，干擾素等分泌減少，使體液免疫功能受損，結(jié)果使機體清除病原體無力，病情惡化[1，5，9，12]。本研究還顯示，重癥組比輕癥組免疫功能障礙更嚴(yán)重，從而說明患者病情越嚴(yán)重，機體的免疫功能抑制越嚴(yán)重，患者的預(yù)后更差。當(dāng)然，由于條件所限，未能同時進行如免疫球蛋白，補體等的檢測是本研究的不足之處，如能進行，將會對患兒的免疫功能監(jiān)測更客觀和全面。

綜上所述，盡早對血清淋巴細(xì)胞亞群檢測，對患兒病情的判斷、臨床治療的指導(dǎo)具有重要意義。

參考文獻：

[1]衛(wèi)生部.手足口病診療指南[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：1-5.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于印發(fā)《手足口病診療指南（2010年版）》的通知[EB/OL].[2016-05-01].http：//www.moh.gov.cn/mohyzs/s3586/201004/46884.shtml.

[3]李國偉，陳巧格，王萬民，等.2013-2015年鄭州市重癥手足口病流行特征分析[J].職業(yè)與健康，2016，32（15）：2107-2109.

[4]Stock I.Hand，foot and mouth disease more than a harmless"childhood disease"[J].Med Monatsschr Pharm，2014，37（1）：4-10.

[5]Hongyan G，Chengjie M，Qiaozhi Y，et al.Hand，foot and mouth disease caused by coxsackievirus A6，Beijing，2013[J].Pediatr Infect Dis J，2014，33（12）：1302-1303.endprint

[6]Wang XD，Huo XM，Zhang YR，et al.Clinical significance of the changes of serum inflammatory indicators in children with severe hand，foot and mouth disease[J].Chin J Nosocomiol，2015，25（24）：5694-5696.

[7]石慶生.重癥手足口病早期診斷和治療[J].臨床薈萃，2012，27（5）：457-459.

[8]Li S，Mo LY，Hu B，et al.Clinical significance of N-terminal pro-brain natriuretic peptide in patients with severe hand，foot and mouth disease[J].China J Infect Chemother，2015，15（4）：354-358.

[9]Gan ZK，Jin H，Li JX，et al.Disease burden of enterovirus 71 in rural central China：A community-based survey[J].Hum Vaccin Immunother，2015，11（10）：2400-2405.

[10]杜興媛，蔣虹.重癥重型手足口病CSF、MRI、EEG檢查的臨床應(yīng)用價值[J].廣西醫(yī)學(xué)，2014，36（1）：118-119.

[11]Wang ZL，Xia AM，Li YF，et al.Socioeconomic burden of hand，foot and mouth disease in children in Shanghai，China[J].Epidemiol Infect，2016，144（1）：138-143.

[12]Fan L，Sidani S，Cooper-Brathwaite A，et al.Feasibility，acceptabilityand effects of a foot self-care educational intervention on minor foot problems in adult patients with diabetes at low risk for foot ulceration：apilot study[J].Can J Diabetes，2013，37（3）：195-201.

[13]黎祖秋，潘利花，李海燕，等.南寧市2008-2014年手足口病流行病學(xué)及病原學(xué)特征[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2015，15（12）：1460-1463.

[14]Lau C，Nygard S，F(xiàn)ure H，et al.CD14 and complement crosstalk and largely mediate the transcriptional response to Escherichia coli in human whole blood as revealed by DNA microarray[J].PloS one，2015，10（2）：e0117261.

[15]鄒小衛(wèi)，蔣豪明，陳棉，等.腸道病毒71型感染的手足口病患兒免疫球蛋白及補體檢測的意義[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，26（18）：4234-4236.

收稿日期：2017-3-29；修回日期：2017-6-18

編輯/楊倩endprint