周平 鄭強 胡深 談暠媛 王峻

摘要：探討了利用QuEChFRS凈化柱快速處理飼料樣品，采用液相色譜-串聯質譜儀準確測定豬濃縮飼料、精料補充料、預混合飼料等不同飼料樣品中金霉素、土霉素含量的可行性，結果表明：該方法試驗結果的相對平均偏差在2.09%～3.74%，回收率在71.5%～83.7%，說明該方法準確度高、重復性好，可用于飼料中金霉素、土霉素含量的測定。

關鍵詞：液相色譜—串聯質譜法;飼料;金霉素;土霉素;測定

中圖分類號：S859.796;TQ465.4? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2018）12-0007-02

金霉素、土霉素均為四環(huán)素類抗生素藥，對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有抑制作用，是一種高效廣譜抗生素，普遍用于動物各種傳染性疾病的治療，是常用的生產和臨床用抗生素藥物，也具有良好的促進動物生長的作用，常應用于飼料添加，但長期使用會產生耐藥性和藥物殘留[1]。為規(guī)范飼料中金霉素、土霉素的使用，2005、2008年我國分別頒布了飼料中金霉素、土霉素的高效液相色譜法測定標準[2，3]，部分地區(qū)也相繼頒布了地方標準來規(guī)范金霉素、土霉素等抗生素的使用，同時也在逐步優(yōu)化測定方法[4，5]。目前，金霉素、土霉素的檢測方法主要有高效液相色譜法[2，3]、液相色譜-串聯質譜測定法[4]、紫外分光光度法[6]等。本試驗對液相色譜-串聯質譜法測定飼料中金霉素、土霉素的含量進行了研究，旨在為生產實際中相關檢測提供參考。

1? 材料與方法

1.1? 儀器設備

QTRAP4500液質聯用儀（美國Sciex）;AE-200型電子天平; QuEChFRS凈化柱;離心機。

1.2? 試劑

試驗用水為雙重蒸餾水;金霉素、土霉素標準物質（純度≥95%）：德國DR公司;甲醇、乙腈、甲酸為色譜純;檸檬酸、磷酸氫二鈉、乙二胺四乙酸二鈉、氨水為分析純。

Na2EDTA-Mcllvaine緩沖液（0.1 mol/L）：稱取11.8 g檸檬酸-水合物，13.72 g磷酸氫二鈉二水合物，33.62 g EDTA-2Na溶解于1 L水中，溶解搖勻后用氫氧化鈉和鹽酸調節(jié)pH至4.5。

甲酸水0.1%。

復溶液：甲酸水∶乙腈（90∶10，體積比）。

1 mg/ml的標準儲備液：準確稱取適量的金霉素、土霉素標準物質分別用甲醇配成1 mg/mL的標準儲備液（-18 ℃保存）。

1.3? 方法

1.3.1? 樣品前期處理? 準確稱取5 g樣品于100 mL容量瓶中，加入60～70 mL Na2EDTA-Mcllvaine混勻，超聲20 min，用Na2EDTA-Mcllvaine定容至100 mL備用。

取5 mL超聲后的溶液于QuEChFRS凈化柱中，混勻，5 000 r/min離心10 min，取中間層清液2 mL，40 ℃氮氣吹干，加入1 mL復溶液復溶，過0.2 μm膜后供液相色譜-串聯質譜儀測定。

1.3.2? 最佳儀器條件的選擇? 對儀器進行調試和調整，確定最佳的儀器測定參數。

液相色譜條件：色譜柱，C18柱，150 mm×3.0 μm;粒徑3.0 μm;柱溫，33 ℃;進樣量，20 μL。

質譜條件：離子源，電噴霧離子源;掃描方式，正離子掃描模式;檢測方式，多反應監(jiān)測;電噴霧電壓、碰撞電壓等條件優(yōu)化至最佳。

1.3.3? 液相色譜-串聯質譜測定? 用金霉素、土霉素基質混合標準工作溶液進樣，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中金霉素、土霉素的響應值應在曲線范圍內。

1.3.4? 加標回收率試驗? 分別于空白樣品中各加入5 μg的金霉素、土霉素標準使用液，利用“1.3.1”的前處理方式對樣品進行處理，進行加標回收率的測定。

1.3.5? 精密度試驗

（1）平行性試驗。將含有金霉素、土霉素的樣品分別按照“1.3.1”的前處理方式對樣品進行處理，每組3個平行，進行平行性試驗。

（2）重現性試驗。分別對樣品進行連續(xù)3 d的測定，對此方法的穩(wěn)定性進行檢測。

2? 結果與分析

2.1? 線性范圍和檢出限結果

用標準儲備液配制成0、10、20、50、100、200、500 ng/mL的濃度，以峰面積為縱坐標，標準工作溶液為橫坐標繪制標準曲線，結果表明其線性關系較好（圖1、圖2、圖3）。

2.2? 樣品加標回收率結果

由表1可見，樣品加標回收率在71.5%～83.7%。表明該方法有較高的準確性。

2.3? 精密度試驗結果

由表2可見，3種樣品本底測定值之間的相對平均偏差在2.09%～3.74%。由此可看出該種方法有較好的重復性。

對3種飼料進行連續(xù)3 d的試驗結果見表3。由表3可見，其相對平均偏差在2.27%～3.23%，可看出該方法重現性良好，有較高的精密度。

3? 結論

本試驗利用QuEChFRS凈化柱對豬的幾種飼料進行處理，用液相色譜-串聯質譜法測定飼料中金霉素、土霉素的含量，結果表明，該方法的重復性、平行性良好，精密度高、準確性好，回收率在71.5%～83.7%，試驗前處理較為簡單，便于大批量飼料樣品中金霉素、土霉素含量的準確檢測，可推廣應用于飼料中金霉素、土霉素的監(jiān)察測定等。

參考文獻：

[1] 宋慧敏，耿士偉，馮三令，等.高效液相色譜法測定飼料中土霉素[J].中國農業(yè)科技導報，2008，10（S2）：43-47.

[2] GB/T 19684—2005飼料中金霉素的測定 高效液相色譜法[S].

[3] GB/T 22259—2008飼料中土霉素的測定 高效液相色譜法[S].

[4] DB13/T 1384.2—2011河北省地方標準 飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測定[S].

[5] 李北罡，王? 義.高效液相色譜法研究飼料金霉素中金霉素和四環(huán)素含量的分別測定[J].內蒙古石油化工，1999，25（4）：48-50.

[6] 林紅華，黃冬菊.用紫外分光光度法測定鹽酸金霉素含量實驗[J].福建畜牧獸醫(yī)，2000，22（4）：24-26.