張 恒，吳春健,田文宗，李金星△

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，濟(jì)南 250011;2.山東省榮軍總醫(yī)院檢驗科，濟(jì)南 250013)

自身免疫病(AID)是指機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身組織或細(xì)胞產(chǎn)生病理性免疫應(yīng)答反應(yīng)而導(dǎo)致的組織損傷或功能障礙的疾病[1]。自身抗體是指自身細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白，血液中存在高效價的自身抗體是自身免疫性疾病的重要特征，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體(譜)，其產(chǎn)生是自身免疫疾病的重要特征之一[2-3]。目前，越來越多的疑難雜癥被診斷為AID，而自身抗體檢測不但是AID診斷最重要的指標(biāo)，而且在病情判斷、監(jiān)測和預(yù)后等方面也同樣具有重要作用，同時自身抗體在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用也逐步闡明[4]。早診斷和及時治療能有效控制病情的發(fā)展，保護(hù)器官功能，改善患者的生活質(zhì)量[5]。間接免疫熒光法在臨床上是一個重要的篩查實(shí)驗，免疫印跡法則對AID的診斷和鑒別診斷、病情評估與治療檢測等都具有重要的臨床應(yīng)用價值[6]。為了解本地區(qū)自身抗體的陽性率及特異性抗體的分布情況，本研究回顧分析了2017年1-12月本院門診及住院患者抗核抗體(ANA)及抗核抗體譜(ANAs)的試驗結(jié)果，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1-12月本院門診及住院檢測自身抗體患者5 539例。其中男1 155例，年齡8個月至95歲；女4 384人，年齡4個月至95歲，排除重復(fù)送檢的患者標(biāo)本。在5 539例ANA檢測者中，有3 171例同時檢測了ANAs。其中男841例，女2 330例。

1.2儀器與試劑 (1)ANA檢測：采用歐蒙公司ANA的IgG檢測試劑盒(間接免疫熒光法)，利用EUROBlot Master進(jìn)行檢測。(2)ANAs檢測：采用歐蒙公司ANAs(IgG)檢測試劑盒(性線免疫印跡法)，利用EUROIMMUN IF Sprinter進(jìn)行檢測。

1.3方法 均使用黃色真空采血管，采集全血分離血清。(1)ANA檢測：1∶100稀釋后的患者血清同時與人喉癌上皮細(xì)胞(Hep-2)和猴肝細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，30 min后磷酸鹽溶液(PBS)洗板，浸泡5 min，加入熒光標(biāo)記的二抗；30 min后PBS洗板，浸泡5 min，甘油封片。熒光顯微鏡下人工判讀結(jié)果，以抗體滴度≥1∶100為陽性。(2)ANAs檢測：定性檢測血清中抗核糖核蛋白抗體(RNP)、抗Sm抗體(Sm)、抗干燥綜合征A抗體(SS-A)、抗Ro-52抗體(Ro-52)、抗干燥綜合征B抗體(SS-B)、抗硬皮病70抗體(Scl-70)、抗多發(fā)性肌炎抗體(PM-Scl)、抗Jo-1抗體(Jo-1)、抗著絲點(diǎn)B蛋白抗體(CENP-B)、抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)、抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)、抗核小體抗體(NUC)、抗組蛋白抗體(HI)、抗核糖體P蛋白抗體(RIB)和抗線粒體M2抗體(M2)共15種不同抗原IgG類抗體。先在溫育槽中加入1.5 mL標(biāo)本緩沖液，溫育5 min，棄去液體。加入1.5 mL已稀釋的血清標(biāo)本，搖擺床上室溫溫育30 min。吸去液體，用1.5 mL清洗緩沖液清洗膜條3次，每次5 min。加入1.5 mL的酶標(biāo)二抗，搖擺床室溫溫育30 min，重復(fù)洗滌過程。加入1.5 mL底物液，室溫溫育10 min。吸去液體，蒸餾水清洗膜條3次，每次1 min。膜條風(fēng)干后，采用EUROLineScan軟件掃描膜條，自動判讀結(jié)果。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1患者的自身抗體總陽性率 在5 539例患者中，陽性患者2 502例，陽性率為45.2%(2 502/5 539)。其中男性陽性率32.7%(378/1 155)，女性陽性率48.4%(2 124/4 384)，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=91.232，P<0.05)。在同時檢測ANAs譜的3 171例患者中，陽性患者1 328例，陽性率41.9%。其中男性患者841例，陽性為227例，陽性率為27.0%(227/841)；女性患者2 330例，陽性1 101例，陽性率為47.3%(1 101/2 330)，二者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=104.224，P<0.05)。

2.2ANA陽性標(biāo)本核型分析 細(xì)胞核顆粒型1 199例，均質(zhì)型216例，胞漿型507例，核仁型138例，核膜型19例，混合型289例，著絲點(diǎn)型92例，核點(diǎn)型9例，高爾基體22例，其他未分型及少見核型11例。

2.3ANAs陽性率分布 15種特異性抗體中，Ro-52、SS-A、RNP陽性率最高，分別為22.74%、17.66%、7.73%；PCNA陽性率最低，為1.14%。

2.4ANA與ANAs檢測的符合率 在3 171例同時檢測ANA與ANAs的患者標(biāo)本中，二者結(jié)果的總符合率為73.1%。其中ANA(+)/ANAs(+)共1 101例，占34.7%；ANA(+)/ANAs(-)580例，占18.3%；ANA(-)/ANAs(+)273例，占8.6%；ANA(-)/ANAs(-)1 217例，占38.4%。ANA(+)標(biāo)本中檢測結(jié)果的符合率為65.5%，ANA(-)標(biāo)本中檢測結(jié)果的符合率為81.7%，ANAs (+)標(biāo)本中檢測結(jié)果的符合率80.1%，ANAs(-)標(biāo)本中檢測結(jié)果的符合率67.7%。

3 討 論

本研究對本院2017年1-12月門診及住院5 539例患者的ANA結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示，其陽性率為45.2%。統(tǒng)計結(jié)果與全國其他實(shí)驗室的結(jié)果略有差異，各地陽性率統(tǒng)計結(jié)果為16%～49%[7-11]。原因可能為：(1)效價判斷的差異。目前國內(nèi)大部分實(shí)驗室采用人工鏡檢判讀，很難做到標(biāo)準(zhǔn)化，這是陽性率差異及患者異地就診結(jié)果差異的最主要原因[12]。盡管間接免疫熒光法在ANA檢測中應(yīng)用廣泛，但該方法受手工操作、人工判讀及實(shí)驗室條件等因素的制約，一直以來制約著ANA檢測標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程[13]。(2)就診人群的差異。AID患者集中就診在風(fēng)濕免疫?？戚^強(qiáng)的醫(yī)院，導(dǎo)致陽性率差異比較大，例如協(xié)和醫(yī)院統(tǒng)計的陽性率明顯高于其他地區(qū)[9]。女性患者陽性率高于男性患者，各地研究結(jié)果一致，證明自身免疫性疾病的發(fā)病率在女性人群中更高。研究男女生理因素導(dǎo)致的ANA發(fā)病率差異，可能會更好地指導(dǎo)臨床診療。

ANAs核型檢測結(jié)果顯示，Ro-52、SS-A、RNP、HI、SS-B陽性率高。Ro-52抗體不具備疾病特異性，也可在肌炎、系統(tǒng)性硬化癥、其他膠原病、新生兒紅斑狼瘡、原發(fā)性膽汁性肝硬化、自身免疫性肝炎及病毒性肝炎中檢出該抗體。SS-A、SS-B主要表現(xiàn)為核細(xì)顆粒型熒光，最常見于干燥綜合征，也可見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)及原發(fā)性膽汁性肝硬化。SS-A在新生兒紅斑狼瘡中的陽性率幾乎為100%。RNP、Sm主要表現(xiàn)為核粗顆粒型熒光。高滴度的RNP為混合型結(jié)締組織病的特征性抗體，Sm為SLE的特異性抗體。Scl-70、PM-Scl主要表現(xiàn)為核仁型熒光。Scl-70多見于彌散型進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化病，PM-Scl以多發(fā)性肌炎，系統(tǒng)性硬化病重疊患者中最為常見。CENP-B主要表現(xiàn)為著絲點(diǎn)型熒光，對進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化病有診斷意義。ds-DNA、HI、NUC主要表現(xiàn)為核均質(zhì)型熒光。ds-DNA主要見于SLE，與疾病活動性存在相關(guān)性。HI主要見于藥物誘導(dǎo)性狼瘡，NUC主要見于SLE腎臟損害患者中。PCNA為細(xì)胞周期相關(guān)抗體，主要見于SLE患者中。M2、RIB、Jo-1主要表現(xiàn)為胞漿型抗體。MA對PBC最具有診斷意義。RIB為SLE的特異性抗體之一。Jo-1主要見于多發(fā)性肌炎患者中[4]。

Hep-2細(xì)胞屬于人來源培養(yǎng)細(xì)胞，核抗原豐富、特異性強(qiáng)、含量高，核大、細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、易于結(jié)果觀察及核型分析，被美國風(fēng)濕病學(xué)會譽(yù)為ANA檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”[14]。免疫印跡法在膜條上平行包被了高度純化的抗原，能夠更好地區(qū)分特異性抗體。二者各有優(yōu)勢，ANA抗原種類更全，ANAs能更好地鑒定出特異性抗體。ANA熒光核型與ANAs的抗體類型沒有絕對的規(guī)律可循，不能簡單的依據(jù)熒光核型來判斷相應(yīng)的抗體類型。本研究結(jié)果顯示，二者聯(lián)合檢測總體符合率可以達(dá)到73.1%，有580例標(biāo)本ANA(+)/ANAs(-)，占18.3%，可能是由于ANA不僅與AID有關(guān)，還存在于許多慢性疾病(如慢性肝炎、肝硬化)和老年人外周血中，部分腫瘤(骨髓瘤、淋巴瘤)患者也可能有ANA的存在[15]。273例標(biāo)本ANA(-)/ANAs(+)，占8.6%。有研究認(rèn)為可能是由于患者處于疾病早期，ANA表達(dá)水平較低，低于檢出限，也有可能是由于患者經(jīng)治療后病情緩解，ANA水平下降[16]。聯(lián)合檢測ANA和ANAs可提高陽性檢出率，增加檢測結(jié)果特異性，對自身型疾病的診斷、治療有較大的應(yīng)用價值，在臨床應(yīng)給予患者綜合檢測，以提高診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述，AID患者自身抗體檢測結(jié)果顯示，女性自身抗體陽性率高于男性；ANA核型以核顆粒型、胞漿型、混合型及均質(zhì)型為常見；ANAs以Ro-52、SS-A、RNP陽性率比較高。ANA及ANAs檢測各有優(yōu)勢，聯(lián)合檢測更有助于AID的診斷及療效觀察。