肖先金 張緒哲 陳忠 熊承良

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是男性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，隨著人們生活方式的改變以及環(huán)境污染的加劇，PCa的發(fā)病率正在逐年增加。歐美國家PCa的病例數(shù)已經(jīng)超過肺癌和大腸癌，成為危害男性健康第一位的腫瘤[1]。雖然我國PCa的發(fā)病率低于西方國家，但隨著人均壽命、生活方式和診斷方式的變化，發(fā)病率和死亡率都呈明顯上升趨勢[2]。研究表明，PCa的治療效果與診斷密切相關(guān)，局限性PCa患者5年生存率接近100%，而伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者5年生存率為33%[3]。因此，開發(fā)PCa的早期診斷方法，降低轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率，是當(dāng)前臨床亟待解決的問題。

早期階段PCa無明顯臨床癥狀，早期診斷公認(rèn)的方法為血清前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen, PSA)以及直腸B超檢查。但PSA的特異性不高，常導(dǎo)致不必要的穿刺活檢和過度治療。目前，PSA檢查的意義在廣大臨床醫(yī)生中存在較大爭議[4-5]。因此，有必要發(fā)展新的腫瘤特異性標(biāo)志物替代或者協(xié)助PSA檢查，以達(dá)到更好的PCa診斷效果。

一、液體活檢技術(shù)

近年來，以循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA, ctDNA)、循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell，CTC)和外泌體為檢測目標(biāo)的液體活檢技術(shù)取得了顯著的進(jìn)展[6]。液體活檢具有取樣容易、創(chuàng)傷小等特點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)多次、連續(xù)檢測。ctDNA、CTC和外泌體攜帶腫瘤相關(guān)的基因序列、RNA和蛋白等多維度的信息，可以為癌癥的診斷提供豐富的數(shù)據(jù)，因而具有更高的準(zhǔn)確性和特異性。

1.ctDNA及其檢測技術(shù)：ctDNA是腫瘤細(xì)胞脫落或者凋亡破碎后釋放進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的碎片化DNA。 作為特征性的腫瘤標(biāo)志物，它攜帶腫瘤細(xì)胞的基因突變信息。檢測這些特征性基因突變能夠?yàn)槟[瘤早篩、療效評估和復(fù)發(fā)監(jiān)測提供重要的信息[7]。然而，正常細(xì)胞在程序性凋亡過程中會(huì)釋放大量野生型DNA進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，因而血漿游離DNA(cell free DNA，cfDNA)中，ctDNA所占比例(豐度)很低，相應(yīng)地，特征性基因突變的豐度也非常低。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，血漿cfDNA中特征性基因突變的豐度一般在0.001%～10%之間[8-9]，癌癥早期豐度會(huì)更低。因此，待測樣品中突變型DNA周圍存在著大量野生型DNA，給突變的檢測尤其是癌癥早期階段突變的檢測提出了巨大的挑戰(zhàn)。

目前，檢測ctDNA的常用方法有兩大類：測序法和選擇性PCR擴(kuò)增法。測序法可以對未知突變進(jìn)行檢測，提供序列組成、突變類型、突變位置等豐富的信息。第一代測序法(Sanger測序和焦磷酸測序)檢測限為5%～10%[10]，遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足ctDNA的檢測要求。第二代測序法(next-generation sequencing，NGS)通過增加測序的通量和深度提升了測序的覆蓋范圍，對獲取的大量數(shù)據(jù)進(jìn)行分析后，可以得到超長片段甚至整個(gè)基因組的序列信息[11-12]。Forshew等[13]利用靶向標(biāo)記引物選擇性擴(kuò)增目標(biāo)基因，然后再進(jìn)行深度測序，提升了NGS的靈敏度，檢測限達(dá)到2%。 為了進(jìn)一步提升靈敏度，Newman等[14]開發(fā)了深度測序腫瘤個(gè)體化建檔法(cancer personalized profiling by deep sequencing，CAPP-NGS)，通過人群大樣本分析，篩選出小范圍(0.04%)目標(biāo)基因庫，從而可以對目標(biāo)基因庫實(shí)現(xiàn)超高深度的測序。CAPP-NGS的靈敏度較高，檢測限可達(dá)0.02%，并且能夠同時(shí)檢測數(shù)百個(gè)基因突變，在疾病的機(jī)制研究以及致病基因的大規(guī)模篩選中有著顯著的優(yōu)勢。但是，測序技術(shù)的檢測成本較高，數(shù)據(jù)分析復(fù)雜，周期冗長。開發(fā)更加簡便的測序新技術(shù)用于微量ctDNA的檢測是目前研究的熱點(diǎn)之一。

選擇性PCR擴(kuò)增法是在PCR過程中選擇性地?cái)U(kuò)增突變鏈或者特異性地指示突變鏈信號(hào)的一類方法。用于檢測ctDNA的選擇性PCR擴(kuò)增法主要包括：突變阻滯擴(kuò)增系統(tǒng)(amplification refractory mutation system PCR, ARMS PCR)[15]、定量PCR(quantitative PCR，qPCR)[16-17]、低溫PCR(co-amplification at lower temperature PCR, COLD-PCR)[18]以及將上述選擇性PCR進(jìn)行串聯(lián)組合構(gòu)建的ARMS-qPCR[19]和ice-COLD-PCR[20]方法。相比測序法，選擇性PCR操作簡單，檢測周期短，但靈敏度不如測序法。ARMS-PCR、qPCR和COLD-PCR檢測限為1%；ARMS-qPCR、ice-COLD-PCR等組合型PCR技術(shù)的靈敏度有所提升，檢測限可達(dá)0.05%左右。

新一代的數(shù)字PCR技術(shù)是在微芯片平臺(tái)上將血漿循環(huán)DNA分散成單分子微乳滴，然后在單拷貝DNA分子上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)了“計(jì)數(shù)式”的絕對定量。數(shù)字PCR的靈敏度很高，檢測限可達(dá)0.005%～0.05%[7,21-22]，是ctDNA檢測技術(shù)中靈敏度最高的方法，在熱點(diǎn)突變的臨床檢測中有著廣泛的應(yīng)用。

然而，目前ctDNA檢測技術(shù)的靈敏度均無法完全滿足癌癥早期診斷的要求，基于測序和選擇性PCR的方法，檢測限均為0.01%左右，癌癥Ⅰ期的檢出率不足50%，對于更早期的腫瘤，檢出率會(huì)更低，如要進(jìn)一步提高上述方法的靈敏度，則將顯著增加檢測的成本并降低方法的魯棒性?；跍y序的檢測技術(shù)為了達(dá)到0.01%量級(jí)的靈敏度，測序深度高達(dá)10 000×以上，檢測成本很高，現(xiàn)階段難以在臨床上大規(guī)模應(yīng)用；進(jìn)一步提高選擇性PCR的靈敏度則需要在體系中繼續(xù)疊加突變識(shí)別單元，導(dǎo)致序列的設(shè)計(jì)、反應(yīng)條件的優(yōu)化更加繁瑣，不適合推廣應(yīng)用。為了克服上述缺點(diǎn)，Xiao等[23-27]、Wu等[28]在待測DNA樣品預(yù)處理以及PCR擴(kuò)增后的探針檢測方面開展了一系列研究。樣品處理方面，開發(fā)了基于人工序列特異性核酸酶的ctDNA富集技術(shù)，可以大幅提升待測樣品中突變鏈(ctDNA)的豐度，為后續(xù)檢測提供巨大幫助[23]。PCR擴(kuò)增后的檢測方面，構(gòu)建了一系列基于核酸探針的高靈敏檢測體系，包括基于內(nèi)切酶Ⅳ識(shí)別單堿基錯(cuò)配的空位探針循環(huán)放大體系[24-26]，基于Lambda外切酶識(shí)別單堿基錯(cuò)配的常溫探針體系[27-28]以及基于DNA鏈遷移探針的常溫、無酶快速檢測體系[27]。這些探針技術(shù)可以與開發(fā)的樣品預(yù)處理方法結(jié)合起來，構(gòu)建針對不同檢測需求的ctDNA超靈敏分析平臺(tái)。

2.CTC及其檢測技術(shù)：隨著實(shí)體腫瘤的長大，部分腫瘤細(xì)胞會(huì)發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從原發(fā)腫瘤上脫落，并通過血液循環(huán)系統(tǒng)或者淋巴系統(tǒng)去往身體各處尋找落腳點(diǎn)。其中，經(jīng)過血液循環(huán)的脫落腫瘤細(xì)胞稱為CTC。外周血中CTC數(shù)量極少，平均每105～107個(gè)單核細(xì)胞中存在1個(gè)CTC[29]。因此，CTC的檢測包含細(xì)胞富集和細(xì)胞分析兩個(gè)步驟。

CTC的富集方法可以分為化學(xué)特性富集法(免疫親和)和物理特性富集法。建立在CTC生化特性的分離富集方法，主要是利用特異性抗體與細(xì)胞表面抗原進(jìn)行特異性結(jié)合來富集CTC，或者去除血細(xì)胞留下腫瘤細(xì)胞。主要包括陽性富集法[30]、陰性富集法[31]和微流體法。①陽性富集法(免疫磁珠吸附CTC)：以CellSearch為代表，在磁珠上包被細(xì)胞表面粘附分子(EpCAM)，以捕獲CTC。②陰性富集法(免疫磁珠吸附其他細(xì)胞)：也稱為白細(xì)胞去除法，用特異性抗體CD45、CD14等與白細(xì)胞結(jié)合，從而去除全血中的白細(xì)胞。該方法較其他富集方法捕獲效率更高，但特異性明顯低于其他方法。③微流體法：將抗CTC表面特定蛋白標(biāo)志物EpCAM抗體與磁珠或微流體進(jìn)行偶聯(lián)，利用這些固相載體上的抗體直接從血中捕獲CTC。物理特性富集法是根據(jù)CTC的物理特性，如密度、尺寸以及可變形性等進(jìn)行富集。包括密度梯度離心[32]、過濾法[33]以及微流控芯片法[34]。①密度梯度離心：根據(jù)CTC密度較白細(xì)胞、紅細(xì)胞大的原理，通過離心將它們分開。是一種非常廉價(jià)、高效的CTC分離方法。臨床實(shí)驗(yàn)證明，密度梯度離心富集CTC較CellSearch系統(tǒng)效率更高。②過濾法：依據(jù)CTC體積大于血細(xì)胞的特性，對CTC進(jìn)行捕獲。CTC的直徑約為10～20 μm，而血細(xì)胞大小為7～12 μm，通過過濾，留下體積比較大的CTC。③微流控芯片法：針對CTC的體積和可變形性對CTC進(jìn)行捕獲，CTC的捕獲率和特異性均可達(dá)到80%以上。綜合來看，物理特性富集法較生化特性法操作簡單、成本低廉，但特異性低，也無法克服CTC在物理特性上的異質(zhì)性。未來，將兩者結(jié)合的新型富集技術(shù)將是發(fā)展的趨勢。

通過上述富集方法獲得CTC后，需行有效的下游分析。一方面，由于現(xiàn)有富集方法無法保證獲得的細(xì)胞百分之百都是CTC，因而需要通過下游分析檢測技術(shù)進(jìn)一步鑒定確認(rèn)。另一方面，通過檢測和分析CTC表面和內(nèi)部的癌癥標(biāo)志分子，能夠反映腫瘤發(fā)生發(fā)展的動(dòng)態(tài)變化，為腫瘤的精準(zhǔn)診斷和臨床分期提供豐富多維的信息。常用的CTC檢測技術(shù)包括：免疫熒光[35]、PCR[36]、熒光原位雜交(FISH)[35]和二代測序。①免疫熒光法：腫瘤細(xì)胞一般為上皮來源，細(xì)胞內(nèi)會(huì)表達(dá)角蛋白(cytokeratin, CK)或其他腫瘤標(biāo)志物(如HER2)。通過免疫熒光染色，可對來自實(shí)體瘤CTC中的標(biāo)志蛋白進(jìn)行識(shí)別，從而實(shí)現(xiàn)對CTC的檢測。該方法檢測靈敏度高、速度快，是目前最常用的檢測手段。②FISH：根據(jù)已知的胞內(nèi)特異性DNA序列，設(shè)計(jì)探針與細(xì)胞內(nèi)的基因組中DNA分子雜交，檢測該特異基因序列的存在與豐度，從而指示CTC的存在。③PCR：提取CTC中的DNA或RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)對基因的表達(dá)進(jìn)行檢測，還可以利用選擇性PCR檢測DNA突變。④二代測序：CTC數(shù)量少，直接進(jìn)行二代測序難度大，需要將單細(xì)胞的DNA擴(kuò)增后，再利用二代測序讀取基因序列信息。雖然單細(xì)胞二代測序技術(shù)目前尚處于實(shí)驗(yàn)室階段，但它能分析未知突變的序列信息和腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性，不僅能更加準(zhǔn)確地鑒定CTC，還能通過對比不同CTC的序列信息，分析腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，是未來CTC檢測的發(fā)展趨勢。

3.外泌體及其檢測技術(shù)：外泌體是源于細(xì)胞出芽或存儲(chǔ)顆粒分泌的細(xì)胞外囊泡(cellularvesicles, EVs)樣結(jié)構(gòu)家族的總稱，其通常伴隨細(xì)胞激活、壞死和凋亡等過程而產(chǎn)生。EVs由富含脂質(zhì)的外膜包裹，攜帶源細(xì)胞的部分生物活性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和各類核酸片段等[37]。外泌體在數(shù)量上多于CTC，更易富集；在形式上分泌小泡能夠有效保護(hù)核酸類物質(zhì)，克服了ctDNA在血液中容易降解的問題，在臨床應(yīng)用上大有可為。與CTC類似，外泌體的檢測也包括分離富集和后續(xù)檢測兩個(gè)步驟。外泌體的分離富集主要依據(jù)物理特性(密度、大小)和生化特性(表面蛋白)來實(shí)現(xiàn)，包括差速離心、密度梯度離心、過濾和免疫分離[38]等手段。外泌體的分析根據(jù)不同目標(biāo)物采用不同的分析技術(shù)，分析外泌體中的蛋白，可使用Western blot、SDS-PAGE和蛋白組學(xué)分析等方法；分析外泌體中的核酸，則可采用PCR、基因芯片和二代測序等。

CTC、ctDNA和外泌體都是液體活檢的檢測對象，但各有特色。CTC能提高診療的精確性，而ctDNA側(cè)重于靶向用藥和耐藥性指導(dǎo)，外泌體目前還沒有成熟的產(chǎn)品，但是外泌體穩(wěn)定性強(qiáng)，且適用范圍廣。單獨(dú)檢測CTC的臨床意義越來越弱，與ctDNA聯(lián)合檢測，可以充分體現(xiàn)ctDNA的高靈敏度，以及CTC的高特異性和“全息化”的優(yōu)勢。未來，各種方式聯(lián)合使用將是液體活檢的大趨勢。

二、PCa液體活檢新進(jìn)展

1.CTC檢測與PCa： 近年來，基于CTC的液體活檢技術(shù)在結(jié)直腸癌、乳腺癌、PCa、胃癌等實(shí)體腫瘤的檢測中得到了廣泛的應(yīng)用。2008年，美國FDA批準(zhǔn)了CellSearch平臺(tái)用于轉(zhuǎn)移性PCa的評估。2016年，中國國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)了CellSearch檢測系統(tǒng)在結(jié)直腸癌、PCa和乳腺癌中的臨床應(yīng)用，開啟了液體活檢技術(shù)在國內(nèi)臨床應(yīng)用的新篇章。

Nagrath 等[34]對來自上皮細(xì)胞腫瘤患者的116份血樣進(jìn)行了CTC-Chip 檢測，115 份(99%) 血樣中檢測到CTCs，其中7例早期PCa患者血樣中均檢測到CTCs，具有較高的靈敏度和特異度。雖然CTC在早期PCa診斷中的應(yīng)用還未得到學(xué)術(shù)界的廣泛認(rèn)可，但在進(jìn)展和轉(zhuǎn)移性PCa的臨床應(yīng)用中已經(jīng)取得了巨大的成功。IMMC-38招募了276例轉(zhuǎn)移性PCa患者，對其中231例進(jìn)行了有效評估。該研究利用CellSearch平臺(tái)在治療前后按月對患者的外周血CTC進(jìn)行持續(xù)動(dòng)態(tài)的檢測[39]。研究發(fā)現(xiàn)CTC 5個(gè)/7.5 μl外周血為Cutoff值。該項(xiàng)研究最終使得FDA在2008年批準(zhǔn)了CellSearch平臺(tái)的臨床應(yīng)用。Okegawa 等[40]應(yīng)用CellSearch 系統(tǒng)對76 例激素難治性PCa患者外周血CTCs進(jìn)行了檢測，探究CTC的數(shù)量與患者生存時(shí)間的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，CTC數(shù)量≥5的患者生存時(shí)間(12.0個(gè)月)顯著低于CTC數(shù)量<5的患者(26.0個(gè)月)，并且前者的死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯高于后者。Schwarzenbach 等[41]對81 例PCa患者外周血CTC 進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)外周血CTC 與PCa的分期、Gleason 評分存在密切關(guān)系。可見CTC 計(jì)數(shù)可以用來評估PCa患者的身體狀況和病情進(jìn)展。

CTC除了可以用于PCa的診斷，還可實(shí)時(shí)監(jiān)測PCa的治療效果，并根據(jù)結(jié)果調(diào)整治療方案，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化精準(zhǔn)醫(yī)療。Scher 等[42]對164 例去勢抵抗性PCa(CRPC)患者進(jìn)行了類似研究，發(fā)現(xiàn)大部分患者治療后CTCs 計(jì)數(shù)明顯下降，且CTCs 計(jì)數(shù)的變化與生存時(shí)間關(guān)系密切。Darshan 等[43]研究證實(shí)，CRPC 患者外周血CTC 中AR 的亞細(xì)胞水平定位與患者對多西他賽化療的反應(yīng)密切相關(guān)。Antonarakis 等[44]研究發(fā)現(xiàn)，在AR-雄激素受體剪接變異體7(V7)陽性的CRPC 患者中，紫杉烷的療效優(yōu)于阿比特龍，而AR-V7 陰性的患者中兩種藥物的療效相當(dāng)，推測AR-V7 可用于指導(dǎo)CRPC患者化療藥物的選擇。

利用二代測序技術(shù)檢測PCa CTC中的單核苷酸變化(SNVs)可以提供更豐富的診斷信息，甚至為分子生物學(xué)機(jī)制研究提供新視野。通過全外顯子組測序發(fā)現(xiàn)CTCs與原發(fā)腫瘤組織具有較高的一致性，對1例PCa患者CTCs的檢測發(fā)現(xiàn)，73種突變類型有51種出現(xiàn)在配對組織中，一致性達(dá)70%。 而腫瘤組織中的56種突變類型有41種在CTCs中檢出。

2.ctDNA檢測與PCa：目前PCa ctDNA檢測的研究熱點(diǎn)包括ctDNA的總量、相關(guān)基因(致病基因)的點(diǎn)突變和甲基化分析。

大量研究表明ctDNA與腫瘤相關(guān)特征具一致性：正常人血漿循環(huán)DNA水平很低，而PCa患者循環(huán)DNA的濃度明顯增高。Goessl等[45]發(fā)現(xiàn)，PCa患者中循環(huán)DNA的檢出率高達(dá)100%。Tombal等[46]也發(fā)現(xiàn)，PCa患者血液中循環(huán)DNA的總量在手術(shù)前后、復(fù)發(fā)前后的變化很大，因此可以作為腫瘤復(fù)發(fā)的監(jiān)測手段。

基因啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化致使相關(guān)基因表達(dá)沉默，并進(jìn)一步影響下游的分子生物學(xué)通路，干擾PCa的病理進(jìn)展和臨床預(yù)后。與PCa相關(guān)的熱點(diǎn)甲基化基因包括：癌甲基化蛋白Ⅰ基因、原鈣黏附蛋白8基因以及生長阻滯和DNA損傷基因(growth arrest and DNA damage gene，GADD)等。Reis 等[47]通過檢測 34 例PCa患者和 48 例前列腺良性腫瘤患者的血清GADD45a基因甲基化水平發(fā)現(xiàn)，PCa組織中的 GADD45a 甲基化的發(fā)生率明顯高于前列腺良性腫瘤組織。調(diào)控microRNA表達(dá)基因的甲基化水平也與PCa的發(fā)生密切相關(guān)，Lin 等[48]研究發(fā)現(xiàn),PCa中 miR-31基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA高甲基化導(dǎo)致其表達(dá)沉默，AR表達(dá)升高，有利于PCa的惡性行為發(fā)生。大量研究證實(shí) miR-143、miR-218、 miR-375、miR-22、miR-29a 等的高甲基化也參與了PCa形成[49-52]。基因的甲基化異常在PCa早期階段非常普遍，因此，檢測ctDNA的甲基化水平對于PCa的早期診斷有著重要的臨床價(jià)值。

3.外泌體檢測與PCa：EVs是近年來的研究熱點(diǎn)，無論在腫瘤，如肺癌、卵巢癌、乳腺癌、直腸癌等，還是在非腫瘤性疾病，如心血管疾病、腎臟病和自身免疫性疾病等領(lǐng)域中均有大量研究報(bào)道。在PCa中，對EVs的研究主要集中在前列腺小體、外泌體。①前列腺小體：當(dāng)離心速度在～100 000×g時(shí)，分離出的PCa相關(guān)的EVs稱為外泌體或前列腺小體。實(shí)際上，前列腺小體就是外泌體[53-54]，為避免混淆，本文對前列腺小體和外泌體分開闡述。PCa患者血漿中的前列腺小體數(shù)量通常顯著增多，較正常組高3～7倍。因此，前列腺小體的數(shù)量可用于輔助診斷惡性腫瘤。前列腺小體中蛋白組學(xué)的變化也與PCa密切相關(guān)，在PCa PC-3細(xì)胞株源性前列腺小體中，可見小窩蛋白Caveolin-1表達(dá)[53]，而腫瘤相關(guān)蛋白CDCPl和CDl51的表達(dá)高于正常人[54]。②外泌體：外泌體中含有的蛋白、miRNA和基因組DNA(gDNA)均攜帶腫瘤細(xì)胞的信息。PCa外泌體的miRNA 譜與源細(xì)胞相似，但具有選擇性。在分析PCa患者和健康個(gè)體血漿MVs(外泌體和微囊泡)的742種miRNAs中發(fā)現(xiàn)，有12種在數(shù)量上存在差異，其中11種在轉(zhuǎn)移性PCa患者M(jìn)Vs 中的數(shù)量明顯多于無轉(zhuǎn)移者[55]。Lazaro-Ibanez等[56]在不同PCa細(xì)胞株來源的外泌體等EVs中檢測腫瘤相關(guān)基因MLHl、PTEN和TP53的片段后發(fā)現(xiàn)，不同來源EVs所攜帶的gDNA不同，可包含特異的突變基因。最新研究發(fā)現(xiàn)，PCa外泌體攜帶的NKG2D配體[57]和Fas配體[58]可抑制淋巴細(xì)胞毒性功能及增殖，表明調(diào)節(jié)外泌體的生成和釋放，可能是腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的生理機(jī)制之一。

三、總結(jié)與展望

液體活檢技術(shù)通過非侵入式的取樣方式獲得腫瘤信息，輔助癌癥治療，可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)、高頻的監(jiān)測，是“精準(zhǔn)醫(yī)療”代表性的診斷技術(shù)。通過研究血漿中CTC、ctDNA和外泌體的數(shù)量、蛋白組學(xué)、突變情況以及甲基化水平等多個(gè)方面的特征，可以為包括PCa在內(nèi)的多種惡性腫瘤的診斷和治療提供“全息化”的信息。但目前液體活檢技術(shù)仍面臨一些亟待解決的問題：中晚期癌癥檢測技術(shù)相對成熟，但價(jià)格較高，推廣難度大；早期癌癥的篩查難度大，技術(shù)不成熟。此外，腫瘤異質(zhì)性大，部分PCa患者很難檢測到ctDNA或CTC。未來的發(fā)展趨勢是發(fā)展強(qiáng)大的靶向富集方法，將富集的DNA進(jìn)行超高深度的測序，在提高檢測靈敏度和早期癌癥的檢出率的同時(shí)，大幅降低檢測的成本。并且隨著檢測靈敏度和準(zhǔn)確度的提高，部分活檢標(biāo)的含量很低的PCa也可能被檢出。此外，對于ctDNA和CTC含量極低的PCa患者，數(shù)量更多、包含信息更豐富的外泌體可能是未來的研究熱點(diǎn)和突破口。

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