張興會(huì)，宋先忱，王家明，全治國(guó)，丁世偉，陳 瑤，關(guān)乃鵬

（1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼陽 111000；2.遼寧省遼寧絨山羊原種場(chǎng)有限公司，蓋州 115214；3.遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，沈陽 110164）

羊的副結(jié)核病是由副結(jié)核分支桿菌引發(fā)的一種慢性疾病，從近兩年掌握的情況看，在遼寧省內(nèi)各羊場(chǎng)的存欄羊只中的平均感染率已達(dá)到15%以上，感染途徑主要為受病羊污染過的飼草、料及排泄物等，羊只起初為隱性感染，即病原攜帶者，過一段時(shí)期，部分羊體內(nèi)產(chǎn)生抗體，其中有半數(shù)以上的羊在兩年內(nèi)因持續(xù)腹瀉而死亡，由于尚無有效的治療方法，給養(yǎng)羊業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失［1］。本調(diào)查主要采用ELASA檢測(cè)方法，通過跟蹤檢測(cè)各年齡段感染羊只血清中的副結(jié)核分枝桿菌抗體變化水平，分析結(jié)果相關(guān)性，為今后更有效地檢測(cè)及防控副結(jié)核病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與分組

1.1.1 ELISA抗體檢測(cè)材料 負(fù)壓采血管，離心管，副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)試劑盒（IDEXX），MAP抗原包被板，陽性對(duì)照液，陰性對(duì)照液；未包被微量板，離心機(jī)，單道微量移液器，一次性移液吸頭，微量反應(yīng)震蕩器，96孔酶標(biāo)儀。

1.1.2 血清樣本 選自遼寧絨山羊聯(lián)合育種場(chǎng)的羔羊，育成羊與后備羊，成年母羊。

1.1.3 時(shí)間及地點(diǎn) 時(shí)間：2015年4月至2017年10月；地點(diǎn)：遼陽市遼陽縣吉洞鄉(xiāng)。

1.1.4 分組 副結(jié)核陽性母羊所產(chǎn)羔羊?yàn)棰窠M（17只）、副結(jié)核陰性母羊所產(chǎn)羔羊?yàn)棰蚪M（125只），育成羊與后備羊121只，成年羊351只。

1.2 檢測(cè)方法

按照副結(jié)核分枝桿菌ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書的操作方法進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)如下：S/P%小于或等于45%，判定為抗體陰性（“-”）。S/P%大于45%且小于55%，判定為抗體可疑（“±”），應(yīng)重新檢測(cè)；S/P%大于或等于 55%，判定為抗體陽性（“+”）［1］。

2 調(diào)查結(jié)果

2.1 羔羊副結(jié)核抗體跟蹤檢測(cè)

表1中副結(jié)核陽性母羊所產(chǎn)羔羊，在2～4月齡時(shí)有28%（5/17）的羊只可在血清中檢出副結(jié)核抗體，而這樣抗體滴度可持續(xù)到斷乳結(jié)束前。而副結(jié)核抗體呈陰性母羊所產(chǎn)的125只羔羊，在哺乳期只有2只的“一過性”的感染。

表1 不同月齡羔羊ELISA方法檢測(cè)副結(jié)核抗體結(jié)果

2.2 育成羊副結(jié)核抗體跟蹤檢測(cè)

由表2可知，對(duì)121只育成羊與后備羊進(jìn)行副結(jié)核抗體跟蹤檢測(cè)，從10月齡檢測(cè)結(jié)果看出，其中2只疑似羊、16只陽性羊，查對(duì)產(chǎn)羔記錄，在陽性與疑似羊的母親中有3只為副結(jié)核陽性羊，占16.6%（3/18）,表明副結(jié)核陽性的育成羊不是主要來自副結(jié)核母羊的后代。間隔3個(gè)月檢測(cè)，16只陽性羊中14只轉(zhuǎn)陰、2只疑似轉(zhuǎn)陽，而后兩次跟測(cè)中，陽性羊中有1只未轉(zhuǎn)陰，說明在育成羊階段副結(jié)核的感染也只是一種繼往感染，抗原在血清內(nèi)形成抗體為“一過性”的反應(yīng)。從16～21月齡檢測(cè)結(jié)果看，此階段受副結(jié)核感染的羊只有陸續(xù)出現(xiàn)的趨勢(shì)，且體內(nèi)抗體陽性的持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。

表2 育成羊與后備羊ELISA方法檢測(cè)副結(jié)核抗體結(jié)果

2.3 成年羊副結(jié)核抗體跟蹤檢測(cè)

從表3可看出，對(duì)351只成年母羊持續(xù)半年監(jiān)測(cè)副結(jié)核抗體，首檢陽性羊48只，感染率13.7%（48/351），在2個(gè)月后的二檢中，有5只轉(zhuǎn)為陰性，在5～6個(gè)月后檢測(cè)結(jié)果3只為陰性，2只為陽性，說明個(gè)別感染者其血清中抗體會(huì)呈現(xiàn)一種波動(dòng)狀態(tài)；二檢為陽性的43只，在后續(xù)的檢測(cè)中始終為陽性，為真正感染者，并開始陸續(xù)發(fā)病，有2只死亡。首檢中10只羊?yàn)榭贵w疑似，最終有6只發(fā)展為陽性、4只轉(zhuǎn)陰。首檢的293只陰性羊，在2個(gè)月后出現(xiàn)陽性23只，5個(gè)月后累計(jì)陽性達(dá)33只、疑似4只、陽轉(zhuǎn)陰性4只；之后的檢測(cè)中，陰性羊中首次查出的陽性羊有少量在下次檢測(cè)中轉(zhuǎn)陰，疑似羊則大部分在后一次檢測(cè)中轉(zhuǎn)陽，而陰性羊以后的檢測(cè)中會(huì)陸續(xù)出現(xiàn)少量陽性羊。

表3 351只成年母羊ELISA方法檢測(cè)副結(jié)核抗體結(jié)果

3 討論與分析

（1）本調(diào)查結(jié)果表明，羊副結(jié)核的感染不是在羔羊期，副結(jié)核母羊所產(chǎn)羔羊，即使在哺乳期可查出陽性者，但斷乳后都會(huì)恢復(fù)陰性。哺乳期只有極少部分羔羊出現(xiàn)“一過性”的感染，這應(yīng)與其母源抗體的水平及所處環(huán)境有關(guān)。副結(jié)核抗體可在血清中測(cè)出，母乳中也會(huì)有抗體存在，即使羔羊期受到抗原感染，因免疫應(yīng)答不完善，大部分羔羊血清檢測(cè)不出副結(jié)核抗體。只有血清中出現(xiàn)抗體之后，感染羊只才能有發(fā)病的臨床表現(xiàn)。從斷奶后至13月齡（育成羊）檢測(cè)結(jié)果看，也會(huì)呈現(xiàn)出與哺乳期類似的結(jié)果，因此，某個(gè)羊場(chǎng)若需對(duì)副結(jié)核羊進(jìn)行凈化，盲目地篩查12月齡前的羊只是沒有意義的。

（2）育成羊之后階段，羊只的免疫應(yīng)答系統(tǒng)逐漸完善，即從1周歲開始，攜帶副結(jié)核抗原的個(gè)體會(huì)開始陸續(xù)產(chǎn)生抗體，如縮短檢測(cè)間隔期，會(huì)出現(xiàn)抗體從陰性到疑似及至陽性的結(jié)果?，F(xiàn)今的絨山羊種羊場(chǎng)，有必要對(duì)成年羊進(jìn)行副結(jié)核抗體檢測(cè)，對(duì)首檢的呈陽性羊和疑似羊應(yīng)隔離或淘汰處理。因抗體為陰性的羊只，有可能也已攜帶抗原，未進(jìn)行到形成抗體階段，結(jié)合本次調(diào)查的經(jīng)驗(yàn)，可采取首檢后3個(gè)月進(jìn)行二檢，二檢后1個(gè)月進(jìn)行三檢，以達(dá)到逐步凈化副結(jié)核羊的目的。

（3）目前，采用ELISA法檢測(cè)副結(jié)核抗體的準(zhǔn)確率在95%左右［2］，對(duì)有較高種用價(jià)值的個(gè)體，有必要進(jìn)行跟蹤檢測(cè)，二檢若為陰性，在其后的檢測(cè)中再次檢出陽性亦可按陽性羊處理。

（4）副結(jié)核抗體為陽性的羊只中，有30%～40%可終身不發(fā)病。但在營(yíng)養(yǎng)狀況不佳的環(huán)境下，感染羊1年內(nèi)死亡率即可超過50%，給羊場(chǎng)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)于有種用價(jià)值的副結(jié)核羊，在不影響健康羊群的情況下，可采取隔離處理后，提供充足的營(yíng)養(yǎng)及配套管理，還可繼續(xù)利用及繁衍后代。

就母羊而言，其發(fā)病的集中階段是在妊娠后期及哺乳期，此時(shí)期其營(yíng)養(yǎng)代謝繁重，極易誘發(fā)陽性羊出現(xiàn)消瘦、持續(xù)腹瀉等癥狀，發(fā)病羊會(huì)在幾天內(nèi)死亡。因此，加強(qiáng)妊娠期及哺乳期副結(jié)核羊的飼養(yǎng)管理也尤為重要。

［1］申貫?zāi)?，曹東，趙曉彤，等.遼寧地區(qū)羊副結(jié)核病血清學(xué)調(diào)查［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2017（4下）：135-137.

［2］張興會(huì)，宋先忱，王世泉，等.兩種方法檢測(cè)絨山羊副結(jié)核的效果分析［J］.中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué)，2017，37（1）：38-40.