王樹巍，任君剛 ,趙 賀

(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心，哈爾濱 150076; 2.哈爾濱商業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150076)

丹參又名赤參，唇形科植物，產(chǎn)地廣闊，丹參是我國應(yīng)用最廣泛的藥用植物之一，丹參顆粒劑具有活血化瘀，理氣止痛的作用，主要用于冠心病、心絞痛、高血脂及心腦血管循環(huán)功能障礙引起的頭痛、心肌缺血、記憶力減退等癥.顆粒劑是指與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀的制劑[1-5].顆粒劑與其他劑型相比，顆粒劑有許多特點，顆粒劑可分散在水和其他適宜的液體中服用，也可直接吞服[6].顆粒劑有不同的分類，有泡騰式顆粒劑、可溶性顆粒劑、混懸性顆粒劑，各類型各有優(yōu)點[7-9].顆粒劑與散劑相比，顆粒劑有許多特點：飛散性、附著性、聚集性、吸濕性、等[10-11]；但顆粒劑由于粒子大小不一，在用容量法分劑量時不易準(zhǔn)確，且?guī)追N密度不同及數(shù)量不同的顆粒相混合是容易發(fā)生分層現(xiàn)象[12-14].丹參顆粒劑對多種疾病有治療作用，例如：其對實驗性缺血心肌有保護作用，并且對凝血系統(tǒng)也有保護作用，丹參顆粒劑可以定向的作用于某一部位，增強藥物的作用[15].丹參顆粒劑有利于丹參的有效成分在人體機體內(nèi)的吸收分布及代謝排除，丹參的質(zhì)量檢查對其也有重要意義，丹參顆粒劑要嚴(yán)格按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行質(zhì)量比測定，質(zhì)量檢查對其顆粒劑的制備是否合格具有重要意義[16].中藥制劑是中藥中非常重要的組成部分，隨著古今劑型的演變、形成和發(fā)展，以及社會的進步，科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，中藥顆粒劑已發(fā)揮了它無可替代的作用.

1 材料

1.1 主要試劑及樣品

丹參粉(Z20013179)(上海綠谷制藥有限公司), 淀粉(GB/T 8885)(華潤賽力事玉米有限公司), 甲醇(上海振興化一工廠), 乳糖(山東豐泰生物科技有限公司), 異丙醇(天津市福晨化學(xué)試劑廠), 無水乙醇(上海振興化工一廠), 正丁醇(上海振興化工一廠), 醋酸(鄭州化學(xué)試劑三廠), 氨水(武漢市聯(lián)堿廠), 已腈(上海振興化工一廠), 微粉硅膠(湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司), 微晶纖維素(湖州展望化學(xué)藥業(yè)有限公司), 丹參酮IIA對照品(110766-200619)(中國藥品生物制品檢定所), 乙酸乙酯(天津市耀華化學(xué)試劑廠), 苯(天津市耀華化學(xué)試劑廠), 三氯甲烷(天津市耀華化學(xué)試劑廠).

1.2 主要儀器

LC-20A高效液相色譜儀(上海伍豐科學(xué)儀器有限公司), AG285電子天平(上海精密儀器儀表有限公司), SHZ-95B循環(huán)水式多用真空泵(鞏義市科瑞儀器有限公司), DHG-9140A型鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠), KQ2200型超聲波過濾器(昆山市超聲波儀器有限公司), 標(biāo)準(zhǔn)檢驗篩(上海豐行篩網(wǎng)制造有限公司), 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿(mào)有限公司), HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇榮華儀器制造有限公司), 薄層層析缸(上海信誼), 98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司).

2 實驗方法

2.1 顆粒劑制備方法的建立

準(zhǔn)確量取適量的丹參粉末，提取2次，每次1 h，將2次提取所得溶液混合，濃縮制成稠浸膏，減壓處理使稠浸膏的相對密度為1.10-～1.14(80 ℃熱測).加入輔料，混勻，60 ℃干燥處理，繼續(xù)加入適量輔料，混勻，90%乙醇潤濕，制備軟材，均勻噴入物料，過16目篩，在50～60 ℃的環(huán)境下進行干燥，在相對濕度73%以下的環(huán)境中整粒，以5g/袋的標(biāo)準(zhǔn)分裝即得.

2.2 測定方法學(xué)的建立

2.2.1 丹參顆粒劑的定性分析

本實驗采用薄層色譜法對丹參顆粒劑進行定性分析.

1)供試品溶液的制備

①準(zhǔn)確量取丹參粉5.00 g置于錐形瓶中，加入一定量的正己烷，超聲提取1 h，過濾，回收溶液，得樣品溶液A.②準(zhǔn)確量取丹參粉5.00 g置于錐形瓶中，加入適量的石油醚，超聲提取1 h，過濾，回收溶液，得樣品溶液B.③取丹參酮IIA樣品溶液，作為樣品溶液C.

2)丹參酮IIA對照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱取丹參酮IIA對照品0.500 g，加入甲醇溶液進行超聲溶解，將溶液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，甲醇定容至刻度，搖勻，得丹參酮IIA對照品溶液.

3)丹參酮IIA的薄層鑒定

取實驗中所配置的對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，分別點樣于薄層色譜板上，以展開劑苯-氯仿-乙醇(49∶49∶2)展開.

2.2.2 丹參顆粒劑的定量分析

本實驗采用高效液相色譜法對丹參顆粒劑進行定量分析.

1)色譜柱的選擇

本實驗色譜柱為Optimusil C18(250 mm×4.6 mm，5 μL)，檢測波長270 nm，流動相為已腈-0.2%乙酸，實驗溫度為25 ℃，流速為0.6 mL/min.

2)樣品溶液的制備

精準(zhǔn)的量取丹參粉末一定量，加入正己烷，在KQ2200型超聲波過濾器中進行過濾處理，回收濾液，將所剩殘渣按上述步驟重新處理，回收濾液，將倆次所得濾液混合置于容量瓶中，用正己烷定容至刻度線，即得樣品溶液.

3)對照品溶液的制備

準(zhǔn)確的稱取丹參酮IIA對照品一定量置于燒杯中，加入適量的甲醇溶液進行超聲溶解，將所得溶液置于容量瓶中，甲醇定容置刻度，搖勻，即得對照品溶液.

4)供試品制備

吸取一定量的樣品溶液，蒸干得固體，加入甲醇進行超聲溶解，將所得藥品置于容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液.

5)樣品測定

樣品溶液和供試品溶液進樣量各5 μL，在色譜柱為Optimusil C18(250 mm×4.6 mm，5 μL)，已腈-0.2%乙酸為流動相，流動速度大約為0.6 mL/min，檢測波長為270 nm的條件下進行測定.

3 實驗結(jié)果

3.1 丹參酮IIA的薄層鑒定

結(jié)果如圖1所示.

圖1 丹參薄層色譜圖

3.2 丹參酮IIA的質(zhì)量比測定結(jié)果

3.2.1 丹參酮IIA質(zhì)量比的測定

分別精確量取樣品溶液和供試品溶液各5μL，按上述色譜條件進行測定，樣品色譜峰如圖2所示，對照品色譜峰如圖3所示.

圖2 樣品色譜峰I

3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取對照標(biāo)準(zhǔn)品溶液5、10、15、20、25 μL點在同一薄層板上,以石油醚一乙酸乙酯為展開劑,上行展開,在波長520 nm下掃描,測量峰面積積分值,結(jié)果列于表1，以對照標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X),相應(yīng)的峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，進行線性回歸.結(jié)果在0.1 ～0.5 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積關(guān)系良好，回歸方程為y=106 599x+31 130，R2=0.999 6.標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖4所示.

圖3 丹參色譜峰及陰性色譜峰

對照標(biāo)準(zhǔn)品體積/μL對照標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)峰面積50.141487100.252489150.363565200.473954250.584054

圖4 丹參酮IIA質(zhì)量濃度測定標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2.3 丹參酮IIA質(zhì)量比測定結(jié)果(n=3)

對不同批次的丹參顆粒劑處理3個樣品，進行測定，求平均值，丹參酮IIA質(zhì)量比如圖如表2所示.

表2測定結(jié)果

批號丹參酮IIA質(zhì)量比/(mg·g-1)丹參酮IIA質(zhì)量比平均值/(mg·g-1)201604208.231201604218.3928.305201604228.293

3.2.4 精密度實驗結(jié)果

準(zhǔn)確量取對照品溶液和供試品溶液，重復(fù)進樣5次，丹參重現(xiàn)性RSD<2%,見表3.

表3精密度實驗結(jié)果

藥物質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)峰面積RSD/%1.5485578231.5485619450.581.5485619531.5485619181.548561723

試驗證明，精密度良好.

3.2.5 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

取樣品供試品溶液，在同一工作日不同時間段進行測量.測得樣品峰面積<2%，結(jié)果見表4.

表4穩(wěn)定性實驗結(jié)果

t/h質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)進樣/μL峰面積RSD/%01.5482028753331.5482028547061.5482028817291.548202915100.76121.54820288605

實驗證明，穩(wěn)定性良好.

3.2.6 重現(xiàn)性實驗結(jié)果

取本品6份放在容量瓶中配成溶液，過濾作為供試品，如表5.

表5重現(xiàn)性實驗結(jié)果

序號質(zhì)量濃度/(mg·mL-1)進樣/μL峰面積質(zhì)量比10.51620831165.1621.0322015464110.3231.5482028655315.4842.0642055663220.6452.5802065652225.8063.09620128446530.96

實驗結(jié)果表明，重復(fù)性較好.

3.2.7 回收率測定結(jié)果

每組測3次，共測3組，如表6.

表6回收率結(jié)果

序號加入量實測量回收率/%平均值/%RSD/%110.3410.34100210.3410.2899.4199.70310.3410.3199.70420.6420.6198.89520.6420.5899.7099.460.665620.6420.6099.80730.9630.97100.03830.9630.8599.6499.85930.9630.9399.90

實驗結(jié)果表明，回收率良好.

4 結(jié) 語

在顆粒劑制備過程中，輔料的選擇對制劑成型是否成功至關(guān)重要，要按照嚴(yán)格的配比要求來進行配比，如果配比有所偏差，會嚴(yán)重影響顆粒劑的流動，制劑成型率和顆粒劑的效果的考察，同時輔料的選擇也非常重要，每種所加的輔料的性質(zhì)不同所起到的效果也有所差異.相比于干法制粒，濕法制粒是醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)中最為廣泛的方法，經(jīng)過表面潤濕后顆粒劑具有外形美觀、耐磨性強、壓縮成型性好、顆粒質(zhì)量好等優(yōu)點，本實驗選擇高效液相法作為質(zhì)量比測定方法是因為高效液相法是中藥化學(xué)最為常用的一種測定中藥中有效化學(xué)成分的方法，實驗中采用高效液相色譜法分析一個樣品一般需要20 min左右，相比與其他方法，高效液相色譜法更高效，高效液相色譜法的靈敏度高，在實驗室中可測得微升數(shù)量級的進樣量，此外HPLC的色譜柱可多次使用，不易破壞樣品及易回收等優(yōu)點，此方法為本實驗帶來了諸多便利，節(jié)約了大量時間及成本，實驗所測得的主要數(shù)據(jù)如下：丹參酮IIA在0.1～0.5 mg/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，(R=0.999 6)，丹參酮IIA的平均回收率為99.67%，RSD值為0.665%，3個批號的丹參顆粒劑中丹參酮IIA的平均質(zhì)量比為8.305mg/g，所得結(jié)果均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之內(nèi)，實驗較為成功，顆粒劑具有方便、易于患者攜帶、口感好、吸收快等特點，深受廣大患者的青睞，極具市場潛力，顆粒劑更深層次的研發(fā)也將是未來科研工作者的努力方向.

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