荀文娟, 周漢林, 侯冠彧, 曹 婷, 施力光

(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院 熱帶作物品種資源研究所，儋州 571737)

動物在正常生理狀態(tài)下，機體內(nèi)自由基產(chǎn)生和清除體系處于一種動態(tài)平衡狀態(tài)，對維持生命活動具有重要的意義[1]。然而當機體受到應激刺激作用時，自由基動態(tài)平衡遭破壞，造成自由基代謝異常，從而導致了諸多疾病的發(fā)生和發(fā)展。在現(xiàn)代畜牧生產(chǎn)中，氧化應激可能是動物疾病發(fā)生、發(fā)展的主要誘因，已經(jīng)成為近年來動物營養(yǎng)領域研究的熱點之一。

隨著養(yǎng)豬生產(chǎn)向集約化方向發(fā)展，為了提高母豬的繁殖率、分娩欄舍利用率，減少疾病傳播和降低仔豬的生產(chǎn)成本等，仔豬早期斷奶成為普遍采用的技術之一。然而，早期斷奶同時也給仔豬生產(chǎn)帶來諸多問題，導致仔豬易出現(xiàn)采食量下降、生長阻滯和腹瀉、免疫功能降低等所謂的“斷奶仔豬應激綜合癥”[2]。已有研究表明，仔豬抗氧化功能與其抗應激能力、生產(chǎn)性能和免疫功能等都密切相關[3]。袁施彬等研究發(fā)現(xiàn)仔豬遭受氧化應激可引起抗氧化酶活性下降，從而導致仔豬抗應激功能降低[4]。李留安等[5]研究發(fā)現(xiàn)斷奶日齡影響仔豬脾臟、胸腺和胰腺抗氧化功能，且斷奶日齡越早，組織抗氧化功能下降的程度越大。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，斷奶可導致仔豬遭受嚴重的氧化應激，引起腸粘膜屏障功能受損，是誘發(fā)斷奶應激綜合征的重要原因[6]。五指山豬是中國著名的小型豬種之一。然而，長期以來，由于養(yǎng)殖方式落后，技術水平低等諸多制約因素，關于不同斷奶日齡對五指山仔豬影響的研究甚少。本研究通過檢測不同斷奶日齡五指山仔豬抗氧化酶變化規(guī)律，分析斷奶日齡對仔豬抗氧化功能的影響，旨在為建立緩解仔豬早期斷奶綜合癥的飼養(yǎng)管理策略提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組

選擇出生日齡相近，初生重相近(0.56±0.07)kg的五指山仔豬96頭，隨機分成4組，每組設4個重復，每個重復6頭豬，公母各半，分別為21日齡斷奶組(21 W)，28日齡斷奶組(28 W)，35日齡斷奶組(35 W)和42日齡斷奶組(42 W)。試驗仔豬從8日齡開始誘食，按常規(guī)程序進行免疫。斷奶時間為各處理組斷奶日齡當晚8:00～9:00，斷奶時趕走母豬, 仔豬仍留在原處，試驗期間仔豬舍溫濕度、通風量及光照等均滿足仔豬要求，環(huán)境衛(wèi)生條件良好，五指山仔豬基礎日糧的配制參照《五指山豬養(yǎng)殖技術規(guī)程》(2007)。

1.2 樣品采集及測定

各處理組分別于28、35、42、49、56日齡晨飼前，每個重復隨機抽取2頭仔豬，公母各一, 每個處理組采血樣8頭份，每頭豬從前腔靜脈采血10 mL，靜置30 min后，3 000 r /min 離心10 min，分裝于1.5 mL離心管，-20 ℃保存。用于血清抗氧化指標測定。

測定指標及方法：采用化學比色法測定血清中谷胱甘肽過氧化物酶( GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、總抗氧化能力(T-AOC)和過氧化氫酶(CAT)含量，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件中的ANOVA 程序進行單因素方差分析，采用Duncan's多重比較進行差異顯著性檢驗，以P<0.05作為差異顯著性標準，結果用平均值±標準差(Means±SD)表示。

2 結果與分析

2.1 斷奶日齡對仔豬GSH-Px活性的影響

由表1可知，從各組別看，21日齡、28日齡、35日齡斷奶組GSH-Px活性均存在顯著變化，21日齡斷奶組變化幅度最大，56日齡時GSH-Px活性顯著高于28～42日齡(P<0.05)，35日齡斷奶組僅在斷奶后1周GSH-Px活性顯著降低(P<0.05)，49日齡后，GSH-Px活性已恢復至斷奶前水平(P>0.05)，42日齡斷奶組GSH-Px活性在各個時間點都無顯著差異(P>0.05)；從相同日齡看，35日齡和42日齡斷奶組在28～35日齡時顯著高于21日齡斷奶組(P<0.05)，49日齡后，各處理組GSH-Px活性已無顯著差異(P>0.05)。

2.2 斷奶日齡對仔豬血清CAT活性的影響

由表1可知，21日齡、28日齡斷奶組存在顯著變化，21日齡斷奶組42～56日齡時CAT活性顯著高于28～35日齡(P<0.05)，28日齡斷奶組僅在35日齡時CAT活性顯著下降(P<0.05)，42日齡以后已恢復至斷奶前水平(P>0.05)，35日齡和42日齡斷奶組CAT活性在整個試驗期差異不顯著(P>0.05)；從相同日齡來看，35日齡和42日齡斷奶組CAT活性在28～35日齡時顯著高于21日齡斷奶組(P<0.05)，49日齡后，各處理組CAT活性已無顯著差異(P>0.05)。

表1 斷奶日齡對仔豬抗氧化性能的影響Table 1 Effects of weaning age on antioxidant activities in serum of Wuzhishan piglets U/mL

注：同列數(shù)據(jù)肩標不同大寫字母表示差異顯著(P<0.05)，同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。

Note: In the same line, values with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.05). In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), the same or no letter superscripts mean insignificant difference(P>0.05).

2.3 斷奶日齡對仔豬血清超SOD活性的影響

由表1可知，各處理組SOD活性在整個試驗期差異均不顯著(P>0.05)，可見SOD活性不受斷奶日齡的影響。

2.4 斷奶日齡對仔豬血清MDA含量的影響

由表1可知，從各組別看， 21日齡、28日齡斷奶組MDA含量存在顯著變化，21日齡斷奶組在56日齡時MDA含量顯著低于28～42日齡(P<0.05)，28日齡斷奶組在56日齡時MDA含量顯著低于35～42日齡(P<0.05)，35日齡和42日齡斷奶組MDA含量在整個試驗期差異不顯著(P>0.05)；從相同日齡看，35日齡和42日齡斷奶組MDA含量在28～35日齡時顯著低于21日齡斷奶組(P<0.05)，在42～49日齡時，42日齡斷奶組MDA含量顯著低于21日齡和28日齡斷奶組(P<0.05)，56日齡后，各處理組MDA含量已無顯著差異(P>0.05)。

3 討 論

動物在正常生理狀態(tài)下，機體產(chǎn)生少量的超氧陰離子、過氧化物、氫離子等自由基，這些自由基的產(chǎn)生與清除處于一種動態(tài)平衡的狀態(tài)。但當機體受到刺激后，產(chǎn)生大量的氧自由基通過攻擊生物膜多不飽和脂肪酸、DNA、蛋白質(zhì)和其他生物大分子，對細胞產(chǎn)生很強的毒性，使生物膜的結構發(fā)生改變，導致機體老化和細胞死亡[7-8]?？寡趸?SOD、GSH-Px和 CAT)構成的機體抗氧化防御體系是保護機體免受氧化損傷的一道屏障，對維持機體的自由基代謝平衡發(fā)揮著重要作用[9]。其中，SOD和GSH-Px是機體的天然自由基清除劑，可保護細胞膜和其他生物組織免受氧化損傷[10-11]。CAT主要作用為參與活性氧的代謝過程，可防止生物膜的脂過氧化[12]。MDA作為脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之一，其含量的多少可反映氧自由基介導的脂質(zhì)過氧化程度[13-14]。

Yin等[15]通過檢測14 日齡斷奶仔豬血漿抗氧化能力和空腸抗氧化酶基因表達發(fā)現(xiàn)，斷奶應激破壞了機體的抗氧化平衡，造成仔豬的氧化損傷。孫景童等研究發(fā)現(xiàn)25日齡斷奶仔豬在斷奶 10、25和35 d后血漿SOD、GSH-Px活性比19日齡斷奶仔豬顯著提高，MDA含量顯著降低，表明25日齡斷奶仔豬的抗氧化能力比19日齡斷奶仔豬強[16]。楊晶晶[17]研究發(fā)現(xiàn)，28日齡和35日齡斷奶仔豬的血漿T-SOD、GSH-Px活性顯著高于14日齡斷奶組，MDA含量顯著低于14日齡斷奶組，表明仔豬斷奶日齡越早，仔豬抗氧化能力越低。本試驗結果發(fā)現(xiàn)，21日齡斷奶組GSH-Px、CAT、MDA變化幅度較大，恢復時間較長。與21日齡斷奶組相比，35日齡和42日齡斷奶組GSH-Px、CAT活性在28～35日齡時顯著提高，MDA含量顯著降低，42日齡時，42日齡斷奶組GSH-Px、CAT活性顯著高于其它三個組，與前人結果相似，說明斷奶可顯著影響仔豬抗氧化系統(tǒng)，且斷奶日齡越早，對仔豬抗氧化性能影響越大。仔豬可通過自身反饋調(diào)節(jié)機制恢復其抗氧化系統(tǒng)[15]。本試驗也發(fā)現(xiàn)，49日齡后，各處理組GSH-Px、CAT活性已無顯著差異，56日齡后，各處理組MDA含量無顯著差異，說明仔豬抗氧化系統(tǒng)已恢復。本實驗中不同斷奶日齡對血清SOD活性無顯著差異，其具體機制還有待進一步研究。

4 結 論

斷奶顯著影響仔豬抗氧化酶活性，斷奶日齡越早，對仔豬抗氧化性能影響越大，21日齡斷奶組GSH-Px、CAT、MDA變化幅度較大，恢復時間較長。56日齡后，各處理組抗氧化酶活性和MDA含量已無顯著差異，說明仔豬可通過自身反饋調(diào)節(jié)機制恢復其抗氧化系統(tǒng)。

[1] RICHTER C. Biophysical Consequences of lipid peroxidation in membranes[J]. Chemistry and Physics of Lipids, 1987, 44(2/4): 175-189.

[2] BAGCHI M, MILNES M, WILLIAMS C, et al. Acute and chronic stress-induced oxidative gastrointestinal injury in rats,and the protective ability of a novel grape seed proanthocyanidin extract[J]. Nutrition Research, 2000, 19(8):1 189-1 199.

[3] 余冰，張克英，袁施彬，等．仔豬氧化應激及硒的抗氧化效應與機制[J]．飼料與畜牧，2008(6)：8-13．

[4] 袁施彬，陳代文．氧化應激對斷奶仔豬組織抗氧化酶活性和病理學變化的影響[J]．中國獸醫(yī)學報，2009，29(1)：74-78．

[5] 李留安，王鳳云，楊晶晶，等．斷奶日齡對仔豬脾臟、胸腺和胰腺抗氧化功能的影響[J]．動物營養(yǎng)學報，2014，26(1)：74-80．

[6] 徐健雄．不同斷奶日齡仔豬的氧化應激損傷及其機理研究[D]．南京：南京農(nóng)業(yè)大學，2014：23-40．

[7] YANG X-j, CHEN J, ZHANG C-x, et al. Evaluation of antioxidant activity of fermented soybean meal extract[J]. African Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2012, 6(24): 1 774-1 781.

[8] 肖定福，唐志如，印遇龍，等．殼聚糖對大腸桿菌攻毒仔豬生長性能和抗氧化狀況的影響[J]．激光生物學報，2011，20(6)：741-746．

[9] 宋志學，杜天璽，孫紅國，等．紅芪粗多糖對免疫應激斷奶仔豬生長性能、血清生化指標和抗氧化能力的影響[J]．動物營養(yǎng)學報，2013，25(5)：1 062-1 068．

[10] 王全溪，林滉，賈洪強，等．乳酸菌素對肉雞血清生化指標和抗氧化功能的影響[J]．動物營養(yǎng)學報，2012，24(1)：131-136．

[11] 李瑞，侯改鳳，黃其永，等．德氏乳桿菌對哺乳仔豬生長性能、血清生化指標、免疫和抗氧化功能的影響[J]．動物營養(yǎng)學報，2013，25(12)：2 943-2 950．

[12] 劉靈芝，鐘廣蓉，熊蓮，等．過氧化氫酶的研究與應用新進展[J]．化學與生物工程，2009，26(3)：15-18．

[13] BARTSCH H, NAIR J. Ultrasensitive and specific detection methods for exocylic DNA adducts: markers for lipid peroxidation and oxidative stress[J]. Toxicology, 2000, 153(1/3): 105-114.

[14] SARGIS R M, SUBBAIAH P V. Protection of membrane cholesterol by sphingomyelin against free radical-mediated oxidation[J]. Free Radical Biology & Medicine, 2006, 40(12): 2 092-2 102.

[15] YIN J, WU M-m, XIAO H, et al. Development of an antioxidant system after early weaning in piglets[J]. Journal of Animal Science, 2014, 92(2): 612-619.

[16] 孫景童, 李命九,史喚,等. 斷奶日齡對仔豬血液生化指標和抗氧化指標的影響[J]. 飼料研究, 2015, 21: 1-5.

[17] 楊晶晶．斷奶日齡對仔豬抗氧化功能,生長相關激素及功能基因表達影響的研究[D]．天津：天津農(nóng)學院，2016：10-18．