姚曉慧，隆茂俊，庫爾班乃木·卡地爾，王 凱，夏利寧

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.新疆焉耆縣畜牧獸醫(yī)站，新疆焉耆 841100)

0 引 言

【研究意義】大腸埃希氏菌又稱大腸桿菌，是一種典型的革蘭氏陰性無芽孢直桿菌，是人畜臨床常見的腸道共棲菌，在特定條件下可致大腸桿菌病，并能隨著糞便排出而污染環(huán)境[1]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】大腸桿菌病發(fā)生后一般多采用抗菌藥物進(jìn)行治療，使其得到一定的控制，但是由于防控過程中抗菌藥物廣泛及不合理使用，使細(xì)菌耐藥嚴(yán)重，并且多重耐藥問題更加突出。隨著出現(xiàn)多重耐藥菌株的出現(xiàn)，嚴(yán)重影響臨床治療效果，且增加治療成本[2]。耐藥大腸桿菌不僅直接威脅家畜，也可以通過環(huán)境污染間接影響家畜，從而對類的健康構(gòu)成威脅?！颈狙芯壳腥朦c】對新疆焉耆縣主要規(guī)?；B(yǎng)殖場不同動物糞源大腸桿菌進(jìn)行臨床常用抗菌藥物的耐藥性調(diào)查，了解不同動物攜帶大腸桿菌的耐藥情況?！緮M解決的關(guān)鍵問題】為補(bǔ)充新疆地區(qū)大腸桿菌耐藥數(shù)據(jù)庫的建設(shè)提供有效依據(jù)，耐藥結(jié)果可為當(dāng)?shù)嘏R床合理用藥提供參考意義。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 菌株

2016年10月在新疆焉耆縣主要的規(guī)?；B(yǎng)殖場進(jìn)行樣品采集。豬源：采集對象為健康仔豬(40日齡：100份糞樣；60日齡：110份糞樣)和妊娠母豬(100份糞樣)；羊源：采集對象為健康2～3歲羊(218份糞樣)；牛源：采集對象為2～8歲健康牛(85份糞樣)。通過肛拭子在直腸采集新鮮糞樣共613份。大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌為ATCC25922，購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.1.2 培養(yǎng)基

麥康凱培養(yǎng)基、普通肉湯和Mueller-Hinton(MH)培養(yǎng)基均購自北京奧博星生物技術(shù)有限公司。

1.1.3 藥品

喹諾酮類：環(huán)丙沙星(含量93.9%)、諾氟沙星(含量99.9%)和恩諾沙星(含量100%)；β-內(nèi)酰胺類：頭孢噻呋(含量89.6%)、氨芐西林(含量99.4%)和阿莫西林(含量95%)/克拉維酸(含量100%)；氨基糖苷類：安普霉素(含量100%)、慶大霉素(含量63.3%)和阿米卡星(含量99.06%)；酰胺醇類：氟苯尼考(含量98%)。上述藥品均為標(biāo)準(zhǔn)品，購自中國獸藥監(jiān)察所。

1.2 方 法

參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)推薦的操作程序，采用瓊脂稀釋法檢測大腸桿菌對上述10種抗菌藥物的最小抑菌濃度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC)值測定，以大腸桿菌ATCC25922作為質(zhì)控菌株，根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的分離鑒定

不同動物糞源大腸桿菌總體分離率為87.1%。列出采集的糞樣及大腸桿菌分離情況。表1

2.2 不同動物糞源大腸桿菌耐藥

不同動物糞源大腸桿菌對10種臨床常用抗菌藥物的耐藥結(jié)果為，40日齡仔豬糞源大腸桿菌對阿莫西林、氨芐西林、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、頭孢噻呋、慶大霉素、安普霉素、阿米卡星10種抗菌藥物的耐藥率依次為97.6%、97.6%、97.6%、96.4%、91.6%、96.4%、12.0%、73.5%、45.8%、8.4%；60日齡仔豬糞源大腸桿菌對阿莫西林、氨芐西林、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、頭孢噻呋、慶大霉素、安普霉素9種抗菌藥物的耐藥率依次為77.0%、68.0%、83.0%、63.0%、66.0%、73.0%、18.0%、40.0%、24.0%；妊娠母豬糞源大腸桿菌對阿莫西林、氨芐西林、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、慶大霉素、安普霉素8種抗菌藥物的耐藥率依次為58.2%、66.3%、28.6%、18.4%、43.9%、26.5%、39.8%、6.1%。

牛糞源大腸桿菌對阿莫西林、氨芐西林、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、頭孢噻呋、慶大霉素、安普霉素9種抗菌藥物的耐藥率依次為100%、50.6%、25.9%、14.8%、12.3%、14.8%、7.4%、16.0%、18.5%。

羊糞源大腸桿菌對阿莫西林、氨芐西林、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、頭孢噻呋、慶大霉素、阿米卡星9種抗菌藥物的耐藥率依次為50.6%、22.1%、60.5%、7.0%、2.9%、7.0%、5.2%、9.9%、4.7%。圖1

2.3 不同動物糞源大腸桿菌多藥耐藥

不同動物糞源大腸桿菌的多藥耐藥率顯示，40日齡仔豬糞源大腸桿菌以6耐(19.3%)、7耐(27.7%)和8耐(42.2%)為主，占89.2%；60日齡仔豬糞源大腸桿菌以4耐(18.0%)、6耐(17.0%)、7耐(18.0%)和8耐(14.0%)為主，占67.0%；妊娠母豬糞源大腸桿菌以2耐(20.4%)、3耐(22.4%)和4耐(20.4%)為主，占63.2%；牛糞源大腸桿菌主要以1耐(32.1%)、2耐(25.9%)和3耐(13.6%)為主，占71.6%；羊糞源大腸桿菌主要以0耐(17.2%)、1耐(37.2%)和2耐(26.7%)為主，占81.1%。其中40日齡仔豬糞源大腸桿菌有1株菌對被檢10種抗菌藥物均耐藥。圖2

表1 不同動物糞源的大腸桿菌分離
Table 1 The rate of Escherichia coli isolated from feces of different animals

來源Source采樣數(shù)Numberofsamples分離數(shù)Numberofisolates分離率Separationrate(%)豬源(40日齡仔豬) Strainsfrom40-day-oldpiglets1008383豬源(60日齡仔豬) Strainsfrom60-day-oldpiglets110100909豬源(妊娠) Strainsfrompregnantsows1009898牛源 Strainsfromcattle8581953羊源 Strainsfromsheep218172789總計 Total613534871

圖1 不同動物糞源大腸桿菌的耐藥率
Fig.1 Resistance rate of Escherichia coli isolated from feces of different animals

圖2 不同動物糞源大腸桿菌的多藥耐藥率比較
Fig.2 Comparison of multidrug resistance rates of Escherichia coli isolated from feces of different animals

3 討 論

3.1 不同生長期的豬糞源大腸桿菌耐藥比較

40日齡仔豬糞源大腸桿菌對青霉素類、酰胺醇類及喹諾酮類抗菌藥物的耐藥程度明顯高于60日齡仔豬糞源大腸桿菌和妊娠母豬糞源大腸桿菌的耐藥率；60日齡仔豬糞源大腸桿菌和妊娠母豬糞源大腸桿菌耐藥結(jié)果相比較，兩者均對阿米卡星耐藥率為0%，60日齡仔豬糞源大腸桿菌對慶大霉素和氨芐西林的耐藥率與妊娠母豬糞源大腸桿菌對這兩種抗菌藥物相近，60日齡仔豬糞源大腸桿菌對其余7種抗菌藥物均是高于妊娠母豬糞源大腸桿菌?？偟目磥恚煌L期豬糞源大腸桿菌都對β-內(nèi)酰胺類及酰胺醇類抗菌藥物耐藥，對阿米卡星都非常敏感，呈現(xiàn)一定的相似性，但它們對被檢抗菌藥物的耐藥有各自的特點，可能與不同生長階段發(fā)病頻率和用藥不同有關(guān)。

研究表明，仔豬糞源大腸桿菌對被檢10種抗菌藥物耐藥情況比妊娠母豬糞源樣大腸桿菌耐藥情況嚴(yán)重，這可能由于哺乳仔豬的抵抗力較差，相應(yīng)使用抗菌藥物也較多，而妊娠母豬由于懷孕，盡量避免使用抗菌藥物，但也存在不同程度的耐藥現(xiàn)象[3]。該縣主要的規(guī)模化養(yǎng)殖場豬源多藥耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重，建議以后治療大腸桿菌病時應(yīng)避免使用青霉素類、酰胺醇類及喹諾酮類抗菌藥物，以便提高治療效果。

3.2 不同動物源糞源大腸桿菌耐藥性

研究表明，豬糞源大腸桿菌對10種抗菌藥物的耐藥情況整體比牛糞源大腸桿菌和羊糞源大腸桿菌復(fù)雜多樣，0～10耐均有分布，以8耐為主，分析其原因是在豬的養(yǎng)殖過程中，使用的抗菌藥物數(shù)量多且種類全。牛糞源大腸桿菌對阿莫西林的耐藥率高達(dá)100%。分析其原因是阿莫西林作為治療乳房炎的首選藥，養(yǎng)殖場長期使用。牛糞源與羊糞源大腸桿菌均以1和2耐為主，造成這一現(xiàn)象的主要原因可能是長期使用一類抗菌藥物，在治療過程中不進(jìn)行藥敏試驗，不合理使用抗菌藥物。該縣主要的規(guī)?；B(yǎng)殖場在治療牛源與羊源大腸桿菌病時應(yīng)該采用敏感藥物，方可提高治療效果。

3.3 與其他地區(qū)耐藥

李鵬[4]對西藏豬源大腸桿菌耐藥進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示對頭孢噻呋、氨芐西林、環(huán)丙沙星、慶大霉素和氟苯尼考的耐藥率分別為89.1%、72.1%、7.8%、7.0%和27.9%，除了頭孢噻呋和氨芐西林的耐藥率高于試驗的耐藥結(jié)果，其余三個均低于試驗結(jié)果，這可能與地區(qū)差異、抗菌藥物使用數(shù)量及種類不同有關(guān)系，也有可能與養(yǎng)殖場常發(fā)病及其用藥方案不同有關(guān)系。趙睿[5]對四川地區(qū)豬源大腸桿菌耐藥性檢測中發(fā)現(xiàn)對恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氟苯尼考和阿米卡星耐藥率分別為88.2%、82.7%、78.2%、92.0%、24.0%；王磊杰[6]對哈爾濱地區(qū)致病性豬源大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測，發(fā)現(xiàn)其對氟苯尼考的耐藥率超過85%，對恩諾沙星、慶大霉素的耐藥率均超過50%，兩人的耐藥結(jié)果均高于試驗?zāi)退帣z測，造成耐藥差異可能與動物的生理與病理狀態(tài)有關(guān)。多藥耐藥結(jié)果顯示，仔豬糞源大腸桿菌以6～7耐為主，多藥耐藥水平與夏利寧等[7]報道相近，妊娠母豬的耐藥程度較低于其的報道。

張偉等[8]對北方不同地區(qū)犢牛腹瀉大腸桿菌耐藥性進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示其對慶大霉素、恩諾沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氟苯尼考的耐藥率分別為38.9%、23.5%、34.3%、20.6%、50.0%，耐藥結(jié)果均高于試驗?zāi)退帣z測，造成耐藥差異可能是因為在獸醫(yī)臨床上，氯霉素類的氟苯尼考、氨基糖苷類的慶大霉素等都是治療大腸桿菌病的常用藥物。張金寶[9]對寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌耐藥性分析，發(fā)現(xiàn)其對氨芐西林、慶大霉素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、諾氟沙星和恩諾沙星的耐藥率分別為54.7%、27.4%、13.7%、13.2%、11.2%和18.3%，其中氨芐西林、環(huán)丙沙星、諾氟沙星和恩諾沙星耐藥結(jié)果與其的耐藥結(jié)果相符合。軒慧勇等[10]對新疆奎屯地區(qū)不同團(tuán)場的牛源大腸桿菌進(jìn)行耐藥性調(diào)查，奎屯地區(qū)牛源大腸桿菌對氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、安普霉素、氟苯尼考、慶大霉素、恩諾沙星和諾氟沙星的耐藥率分別為2.2%、20.0%、13.3%、6.7%、3.3%、5.5% 和1.1%。試驗牛糞源大腸桿菌對安普霉素的耐藥結(jié)果與軒慧勇等報道的耐藥結(jié)果接近，其余6種抗菌藥物耐藥率均高于其耐藥結(jié)果。奎屯地區(qū)牛源大腸桿菌多重耐藥最多達(dá)到5耐，其中以1～2耐為主，耐藥率分別為20.0%和6.7%。試驗中牛源大腸桿菌多藥耐藥可達(dá)到9耐，也以1～2耐為主，耐藥率高于奎屯地區(qū)。兩者相比較表明大腸桿菌的耐藥性在呈上升趨勢，逐年增加，其可能的原因與細(xì)菌耐藥機(jī)制的進(jìn)化速度相關(guān)。Sato等[11]發(fā)現(xiàn)用添加抗生素的飼料喂養(yǎng)的奶牛糞源中大腸埃希菌對氨芐西林、慶大霉素的耐藥率明顯高于不添加抗生素飼養(yǎng)的奶牛。說明抗生素在養(yǎng)殖業(yè)中作為飼料添加劑或保健藥物，長期、大量使用加速了細(xì)菌選擇過程，導(dǎo)致耐藥菌株逐漸增多。牛源大腸桿菌耐藥率比其他兩種動物源菌的耐藥率低，可能是因為最近幾年相關(guān)部門對奶制品的質(zhì)量監(jiān)督更加嚴(yán)格，使牛在飼養(yǎng)過程中降低對抗菌藥物的使用，導(dǎo)致牛源大腸桿菌對抗菌藥物的耐藥率較低[12]。

底麗娜等[13]對新疆地區(qū)羊源大腸桿菌進(jìn)行耐藥性檢測，發(fā)現(xiàn)其對安普霉素、阿莫西林/克拉維酸、阿米卡星、氨芐西林、頭孢噻呋的耐藥率依次為33.9%、21.2%、15.5%、14.1%、8.8%；以1～3耐為主，占62.5%。試驗中羊糞源大腸桿菌對氨芐西林和頭孢噻呋耐藥結(jié)果與其相近，安普霉素和阿米卡星的耐藥與其相比較低，而對阿莫西林的耐藥率則高。多藥耐藥結(jié)果來看，試驗以0～2耐為主，多以青霉素類抗菌藥物為主，占81.1%。

4 結(jié) 論

新疆焉耆縣主要的規(guī)?；B(yǎng)殖場不同動物糞源大腸桿菌總體耐藥情況從高到低依次為40日齡仔豬、60日齡仔豬、妊娠母豬、牛、羊。該縣主要的規(guī)模化養(yǎng)殖場在治療細(xì)菌性疾病時，需慎用青霉素類、酰胺醇類及喹諾酮類藥物，合理交替輪換使用抗生素能有效減少耐藥菌產(chǎn)生。

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