玉山江·麥麥提，楊 渡，韓 盛，阿米乃姆·麥麥提，古勤生

(1.農(nóng)業(yè)部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗室/新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，烏魯木齊 830091；2.烏什縣依麻木農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站，新疆烏什 83406；3.河南省果樹瓜類生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗室/中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所，鄭州 450009)

0 引 言

【研究意義】甜瓜(Cucumis melo L),又稱哈密瓜，新疆天山南北多數(shù)綠洲都適合種植哈密瓜，新疆哈密瓜在國內(nèi)外享有盛譽(yù)，使新疆成為國內(nèi)重要的哈密瓜生產(chǎn)和出口基地，哈密瓜生產(chǎn)已成為促進(jìn)農(nóng)民增收的一大支柱產(chǎn)業(yè)[1-3]。病毒病是哈密瓜的重要病害之一，感病植株的果實(shí)畸形，果色發(fā)生變化，葉片出現(xiàn)花葉、黃化等多種癥狀，導(dǎo)致品質(zhì)嚴(yán)重下降、產(chǎn)量大大降低，而無法進(jìn)入市場，成為影響出口的限制因素[4]。從1980年開始國內(nèi)許多學(xué)者對新疆哈密瓜病毒病開展了研究，并已報道的哈密瓜病毒有WMV、CMV、SqMV、TNV、甜瓜葉脈壞死病毒(Melon Vein Necrosis Virus，MVNV)。在病毒病大流行時WMV、CMV、SqMV可以混合侵染同一植株[5-9]。目前新疆引起哈密瓜病毒病的病毒種類主要是西瓜花葉病毒(WMV)、黃瓜花葉病毒(CMV)、小西葫蘆黃花葉病毒(ZYMV)、南瓜蚜傳黃化病毒病(CABYV)以及甜瓜葉脈壞死病毒(Melon Vein Necrosis Virus，MVNV)[10-12]。甜瓜葉脈壞死病毒即香甜瓜葉脈壞死病毒，也稱為哈密瓜葉脈壞死病毒病(HmVNV)。MVNV的寄主范圍局限于葫蘆科的黃瓜屬，不侵染南瓜屬的西葫蘆，在甜瓜不同品種上引起明顯的葉脈壞死。該病毒除了侵染香石竹科外,還侵染一些豆科植物, 在寄主上一般體現(xiàn)隱形癥狀?？捎裳料x以非持久性傳播, 侵染豆科植物的病毒也可由粉虱或者經(jīng)由種子傳播[13-14]。2014年以來甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆主要瓜產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生，發(fā)病率達(dá)到10%～50%，發(fā)病率在逐年上升，嚴(yán)重影響到部分地區(qū)瓜產(chǎn)量與品質(zhì)。確定該病毒病的生物學(xué)特性、分布與發(fā)生規(guī)律，對深入研究該病的發(fā)生機(jī)制有重要現(xiàn)實(shí)意義。【前人研究進(jìn)展】1952年甜瓜葉脈壞死病毒病(Melon Vein Necrosis Virus，MVNV)在美國加州甜瓜上發(fā)現(xiàn)。1986年，病害在新疆安寧渠首次發(fā)現(xiàn)，并對其癥狀、病毒類型、寄主范圍以及傳毒介體進(jìn)行了初步的研究，報道該病毒病發(fā)病率比較低，對哈密瓜生產(chǎn)的影響不太大，不是新疆的優(yōu)勢毒源，一直不太重視[15-16]。【本研究切入點(diǎn)】1986年，李國玄等對新疆主要產(chǎn)瓜區(qū)病毒病發(fā)生情況進(jìn)行調(diào)查，在新疆首次報道甜瓜葉脈壞死病毒病，當(dāng)時對甜瓜生產(chǎn)未造成嚴(yán)重危害。將近30年以來，對新疆葉脈壞死病毒病的發(fā)生與分布，未見新的文獻(xiàn)報道，該病近幾年來對新疆瓜生產(chǎn)造成嚴(yán)重危害。對甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆發(fā)生與分布狀況進(jìn)行初步研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】對新疆甜瓜主栽區(qū)甜瓜葉脈壞死病毒病的發(fā)生與分布進(jìn)行調(diào)查與鏡檢，確定該病毒病的生物學(xué)特性、分布與發(fā)生規(guī)律，為該病的鑒別與防治提供方法與依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

2014～2016年采自新疆昌吉、阜康、吉木薩、喀什地區(qū)、和田民豐、巴州且末等地區(qū)，采集疑似甜瓜葉脈壞死病毒病癥狀的樣品；實(shí)驗室栽培的3～4葉期健康的薄皮甜瓜幼苗；研缽與研棒、紗布、三角瓶、金剛砂、0.05 mol/L pH7.2的磷酸緩沖液(PBS)。

1.2 方 法

1.2.1 病毒病的人工接菌

剪取小塊感病毒病的葉片放在研缽中并加入適量的磷酸緩沖液，研磨成糊狀。用紗布過濾、取少量病毒病樣汁液，并已灑少許金剛砂對甜瓜幼嫩的葉面上輕抹2～3次后，用滅菌水清洗葉面，每處理接10株,接種一周后，開始觀察病狀發(fā)展，觀察時間為30 d。

1.2.2 病毒電鏡樣品制備

將感染MVNV的甜瓜葉片剪成小塊，放到研缽中并滴入1～2滴磷酸緩沖液后，用研磨棒進(jìn)行研磨。取出汁液，用帶膜樣品載網(wǎng)膜面向下放在汁液上吸收1～3 min，然后用鑷子將移到染色液磷鎢酸(2%，pH 6.7)中，染色1～2 min，取出后用濾紙吸干染液，放入墊有濾紙的培養(yǎng)皿中，使用JEM-1200 EX 投射電鏡對已備好的樣品進(jìn)行觀察。將其與同樣方法處理的健康的甜瓜葉組織浸出液作對照試驗觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 甜瓜葉脈壞死病毒病危害癥狀

研究表明，此病在哈密瓜全生育期都可發(fā)生可危害葉片、葉柄、莖蔓及果實(shí)，幼苗染病，新葉葉脈及邊緣出現(xiàn)不規(guī)則銹褐色壞死斑，隨病害發(fā)展瓜苗逐漸變褐枯萎而死亡。成株染病，首先在葉片上出現(xiàn)癥狀，葉片主脈與細(xì)脈褪綠變褐，呈網(wǎng)狀壞死，逐漸形成銹褐色壞死大斑，致病葉局部枯死，最后整葉壞死。于此同時，葉柄與莖蔓上出現(xiàn)銹褐色凹陷條紋，后期變成較大的壞死條紋，終使植株由下向上焦枯死亡。果實(shí)網(wǎng)紋褪綠變褐，逐步形成銹褐色，使果肉變酸味。圖1(封二)

2.2 甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆發(fā)生及分布

該病近幾年內(nèi)在新疆普遍發(fā)生，危害程度在不同地區(qū)或者同一地區(qū)不同區(qū)域都有很大的差異。在北疆昌吉、阜康等地區(qū)該病危害比較嚴(yán)重。2014年3月該病在昌吉示范區(qū)溫室種植的哈密瓜上發(fā)生并導(dǎo)致大面積死亡，并當(dāng)年6月15日該區(qū)附近露地哈密瓜發(fā)生，造成絕收。該病在南疆喀什伽師縣、和田民豐縣、巴州且末縣均有發(fā)生并造成不同程度的危害。該病在北疆瓜區(qū)的發(fā)生時間比南疆早一些，危害程度比南疆嚴(yán)重。表1

2.3 人工接菌試驗

MVNV經(jīng)汁液人工摩檫接種到薄皮甜瓜上，在室內(nèi)條件下，觀察15 d后，發(fā)現(xiàn)甜瓜葉片局部葉脈開始變?nèi)鹾稚?。接?5 d后甜瓜葉片葉脈變深褐色并逐步擴(kuò)展到葉柄。人工接菌發(fā)病癥狀與田間發(fā)生的癥狀完全一致。

2.4 病毒粒體形態(tài)

電鏡載網(wǎng)上的感染MVNV的甜瓜葉片組織浸出液經(jīng)過處理后，在電子顯微鏡下可觀察到線狀病毒粒體，在測量過的30個病毒粒中，病毒粒子的大小約為660 nm×13 nm，與已報道的甜瓜葉脈壞死病毒病病毒顆粒大小一致[15]。健康甜瓜葉組織浸出液經(jīng)同樣處理后，未觀察到病毒粒子。 圖2(封二)

表1 甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆發(fā)病情況與危害程度
Table 1 and severity of disease in Xinjiang

地點(diǎn)location調(diào)查時間Observeddate調(diào)查面積Observedarea(hm2)發(fā)病率Incidencerate危害程度Severityofdisease昌吉市西域種業(yè)育種基地2013年6月21日26．67(400畝)90%以上減產(chǎn)60%～100%阜康市西地鎮(zhèn)南灣村2014年6月21日133．33(2000畝)50%～100%80%地塊減產(chǎn)90%以上甚至絕收阜康市上戶溝鄉(xiāng)小泉村2014年6月21日40(600畝)100%減產(chǎn)70%109團(tuán)2014年6月22日133．33(3000畝)2%～80%部分地塊減產(chǎn)達(dá)60%吉木薩爾縣東家灣村2015年6月25日133．33(2000畝)40%～100%減產(chǎn)30%～100%巴州且末縣2015年7月20日6．67(100畝)30%～40%減產(chǎn)30%和田民豐縣2015年7月22日13．33(200畝)10%～20%減產(chǎn)10%喀什伽師縣2016年8月10日33．33(500畝)10%～20%減產(chǎn)10%克拉瑪依市2016年8月1日33．33(500畝)90%以上減產(chǎn)90%以上

3 討 論

1985年新疆烏魯木齊市近郊安寧渠早熟甜瓜上首次發(fā)現(xiàn)甜瓜葉脈壞死病毒[15]，當(dāng)時對甜瓜生產(chǎn)未造成嚴(yán)重危害，將近30年以來，對新疆甜瓜葉脈壞死病毒病的發(fā)生與危害，均未見發(fā)生相關(guān)報道，可能是對甜瓜生產(chǎn)沒有造成太大危害，而沒有引起相關(guān)專家們注意。該病由葉片葉脈開始發(fā)病到葉柄，莖蔓，影響到果實(shí)并造成不同程度的危害，成株染病，葉片細(xì)脈褪綠變褐，呈網(wǎng)狀壞死，逐步形成銹褐色壞死大斑，最后整個葉片壞死，最終使植株由下向上焦枯死亡，嚴(yán)重影響甜瓜產(chǎn)量與質(zhì)量。該病主要通過汁液和桃蚜非持久性傳毒，自然界中的豆科作物可能是MVNV的毒源植物[8]。近年來，甜瓜葉脈壞死病毒病在我區(qū)甜瓜生產(chǎn)普遍發(fā)生，北疆瓜區(qū)比南疆瓜區(qū)發(fā)生面積大，發(fā)生時間早，造成危害嚴(yán)重，可能與氣候、種植規(guī)模有關(guān)系。該病在不同地區(qū)或者同一地區(qū)不同年度發(fā)病狀況與危害程度都一樣，該病的發(fā)生成災(zāi)規(guī)律待進(jìn)一步研究。

甜瓜葉脈壞死病毒病可種傳，致死溫度55～60度，體外存活期3～5 d。種子帶菌率高，管理粗放，蚜蟲數(shù)量多情況下發(fā)病嚴(yán)重，當(dāng)氣候條件適宜時，該病發(fā)展迅速，易造成大量減產(chǎn)，因此采取適當(dāng)早播方式的同時，注重種子高溫處理與加強(qiáng)田間管理。

4 結(jié) 論

2014年至2016年在昌吉州、克拉瑪依市、喀什伽師縣、和田民豐縣與巴州且末縣的主要瓜區(qū)中都發(fā)現(xiàn)甜瓜葉脈壞死病毒病并已造成不同程度危害，該病在新疆的發(fā)生時間與危害程度上有較大的差異。田間采取的MVNV樣品沒有及時接菌會影響到其發(fā)病率，在3 d之內(nèi)接菌效率比較好。目前對MVNV發(fā)生規(guī)律與基因組序列方面未見報道，需要進(jìn)一步研究。

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