□ 羅長(zhǎng)琴 重慶市萬(wàn)州食品藥品檢驗(yàn)所

1 材料選擇與方法

1.1 儀器選擇與試劑

本次實(shí)驗(yàn)中選擇的儀器是高效譜相色譜儀。合成著色劑的標(biāo)液為日落黃、亮藍(lán)、檸檬黃、莧菜紅以及胭脂紅，為0.5 mg/mL。80%的誘惑紅為SIGMA-ALDRICH。甲醛是液相色譜淋洗液，60 mL的甲醛與40 mL的甲酸進(jìn)行混合，蒸餾水與20%的檸檬溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)，將pH值調(diào)為6。其他選擇的試劑是分析純。

1.2 溶液配制方法

進(jìn)行不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液的配制工作，喹啉黃為0.97 mg/mL，亮藍(lán)為0.25 mg/mL，日落黃、檸檬黃、靛藍(lán)、胭脂紅、胭脂紅與莧菜紅為0.5 mL，新紅為0.75 mg/mL，誘惑紅為0.8 mg/mL，選取2 mL的儲(chǔ)備液放置到50 mL的量瓶之中，加水混合均勻以后將其配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液?；诖死L制相應(yīng)的峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 樣品處理方法

在樣品處理方法上，首先配制樣品的溶液，根據(jù)聚酰胺吸附法進(jìn)行色素的提取工作，樣品濃縮之后加水進(jìn)行溶解定容，在包括赤蘚紅的樣品中運(yùn)用50%的甲醇進(jìn)行溶解定容，之后進(jìn)行HPLC分析。

1.4 液相色譜分析條件

本次實(shí)驗(yàn)中的色譜柱為Agilent-ZORBAXSB-C 5μm，4.6 mm×250 mm，有機(jī)相為甲醇：乙腈（3∶1），進(jìn)行梯度洗脫工作，通過(guò)多通道檢測(cè)，最終達(dá)到的波長(zhǎng)：亮藍(lán)為625 nm，靛藍(lán)為290 nm，新紅、赤蘚紅與莧菜紅為529 nm，檸檬黃與喹啉黃為428 nm，胭脂紅與誘惑紅為507 nm，日落黃為483 nm。

2 結(jié)果

2.1 最低檢測(cè)限

選取5 g的空白樣品加上標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水之后定容到25 mL，之后進(jìn)行色素的提取，運(yùn)用HPLC法進(jìn)行測(cè)定，最終的最低檢出限分別為喹啉黃是0.1 mg/kg，亮藍(lán)是0.03 mg/kg，新紅是0.9 mg/kg，日落黃、檸檬黃、胭脂紅、靛藍(lán)與莧菜紅是0.06 mg/kg，赤蘚紅是0.08 mg/kg，誘惑紅是0.10 mg/kg。

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

選取碳酸飲料樣品加上一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液將其制成模擬樣品，通過(guò)8次測(cè)定，得出相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差，可以得到赤蘚紅的標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%，檸檬黃為2.2%，喹啉黃為3.5%，新紅為2.2%，亮藍(lán)為1.8%，靛藍(lán)為3.9%，誘惑紅為1.9%，日落黃為1.3%，莧菜紅為1.6%，胭脂紅為1.4%。

3 討論

3.1 流動(dòng)相

本次實(shí)驗(yàn)中采用了梯度洗脫的方式分離十種合成著色劑，流動(dòng)相的選擇中使用甲醛+0.02 mol/L乙酸銨的情況下，能夠很好地分離前七種著色劑，但是在后三種著色劑中難以實(shí)現(xiàn)有效地分離。如果將流動(dòng)相設(shè)置為甲醛：乙晴（3∶1）為+0.02 mol/L乙酸銨的情況下能夠充分地分離全部的10種著色劑[1]。

3.2 波長(zhǎng)的測(cè)定

如果運(yùn)用254 nm方法測(cè)定不同種類的著色劑，難以達(dá)到比較高的靈敏性與特異性，同時(shí)食品中具有的雜質(zhì)成分也影響了著色劑的測(cè)定。為此可以首先測(cè)定最佳梯度，有效優(yōu)化波長(zhǎng)情況。在不同染色劑的波長(zhǎng)中可以運(yùn)用二級(jí)管陣列檢測(cè)器多通道進(jìn)行有效檢測(cè)，這能夠提升亮藍(lán)等各種著色劑的特異性與靈敏性，并且減少梯度洗脫過(guò)程中基線漂移現(xiàn)象的發(fā)生。

3.3 測(cè)定喹啉黃

喹啉黃一般是在配制酒中進(jìn)行使用，最多使用量應(yīng)當(dāng)控制在0.1 g/L，在巧克力等食品中禁止使用。目前，在對(duì)其的檢測(cè)中沒(méi)有固定的方法，因此應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)喹啉黃檢測(cè)的研究。喹啉黃分子比較難以溶于水，在食品添加劑中使用的是喹啉黃磺酸鈉鹽，能夠?qū)崿F(xiàn)不同磺酸鹽的有效混合。在本色譜條件下具有兩個(gè)色譜峰，根據(jù)HPLC-MS，具有2個(gè)色譜峰與質(zhì)譜圖比較相似，在352 m/z條件下能夠達(dá)到最高的離子流量強(qiáng)。在定量指標(biāo)中可以設(shè)置為2個(gè)峰的面積，同樣能夠展現(xiàn)比較良好的線性關(guān)系[2]。

3.4 測(cè)定赤蘚紅

在色素洗脫完成之后進(jìn)行濃縮與水定容，運(yùn)用0.45 μm濾膜進(jìn)行過(guò)濾，運(yùn)用HPLC進(jìn)行測(cè)定。在進(jìn)行精密度與回收率實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，在水定容之后的樣品溶液中存在紅色沉淀現(xiàn)象。通過(guò)分離沉淀步驟，能夠使用甲醛進(jìn)行溶解，最終檢測(cè)出赤蘚紅，它是一種四碘熒光素鈉鹽，比較容易溶于水，溶解性比較容易受到溶液pH值的影響。在樣品中放入一定量的赤蘚紅，可以使用50%的甲醛進(jìn)行定容。在濾膜過(guò)濾過(guò)程中能夠吸附色素，在過(guò)濾過(guò)程中色素容易發(fā)生改變，因此應(yīng)當(dāng)選擇吸附作用比較小的濾膜。

4 結(jié)語(yǔ)

本文在對(duì)食品中10種合成著色劑的檢驗(yàn)中采用了多波長(zhǎng)與梯度脫洗的方式，具有比較高的靈敏度與精確度，實(shí)驗(yàn)中受雜質(zhì)峰的干擾比較小，能夠比較充分地分離樣品峰，從而有效分析食品中的合成著色劑。

[1]高云.高效液相色譜法測(cè)定食品中10種合成著色劑的含量[J].食品安全導(dǎo)刊, 2016(15):95-96.

[2]李 婷 ,王 強(qiáng) ,陳 然 ,等 .固 相萃取-高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定糖果中9種人工合成著色劑[J].廣東化工,2016(14):225-226.