[摘 要]目的：建立測(cè)定側(cè)柏葉中楊梅苷含量的HPLC方法。方法：采用Inertsil-ODS-3（4.6mm*250mm，5m）色譜柱，流動(dòng)相為：甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸（37：63：1.5），流速：1.0 mL/min；柱溫：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。結(jié)果：楊梅苷的線(xiàn)性范圍為0.023 mg/mL-0.414 mg/mL，線(xiàn)性良好，r=0.9999（n=5）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便快捷、精密度高、結(jié)果準(zhǔn)確。

[關(guān)鍵詞]HPLC法；楊梅苷；含量測(cè)定。

中圖分類(lèi)號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2018）01-0115-01

側(cè)柏葉為柏科植物側(cè)柏Platycladus orientalis（L.）Franco的干燥枝梢及葉，性味苦澀、性寒，具有涼血止血的功效，臨床上常用于各種內(nèi)臟出血癥。側(cè)柏葉含有鞣質(zhì)、黃酮及揮發(fā)油等化學(xué)成分。其中黃酮化合物為其主要成分，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中常以槲皮素和槲皮苷作為品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)成分。我們?cè)趯?duì)側(cè)柏化學(xué)成分研究中首次從側(cè)柏中鑒定出楊梅苷成分，且含量較高。有關(guān)側(cè)柏中楊梅苷成分的含量測(cè)定尚未見(jiàn)報(bào)道，為此我們首次建立了側(cè)柏中楊梅苷成分的HPLC含量測(cè)定方法，為豐富和完善側(cè)柏藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下：

1 儀器、試劑、供試品和對(duì)照品

儀器：Agilent1260型HPLC儀（G1314F型紫外檢測(cè)器，Agilent ChemStation工作站），安捷倫科技有限公司；Agilent1260型HPLC儀（G1365D型紫外檢測(cè)器，Agilent ChemStation 工作站），安捷倫科技有限公司；AG285型電子天平，梅特勒公司；超振蕩清洗儀（浙江昆山）。

試劑：甲醇為色譜純（美國(guó)天地）；冰醋酸、磷酸二氫鉀（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為超純水。

對(duì)照品：楊梅苷購(gòu)于上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：090106供含量測(cè)定用。

供試品：分別采于陜西省咸陽(yáng)市、新疆新疆大學(xué)校園、浙江省蘭溪市、遼寧省沈陽(yáng)市、重慶市，去凈泥沙，塵土和枝條，50℃烘干備用。以上樣品經(jīng)北大醫(yī)學(xué)部王弘副教授鑒定為柏科植物側(cè)柏Platycladus orientalis（L.）Franco的干燥枝梢及葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil-ODS-3（4.6mm*250 mm，5 m）色譜柱，流動(dòng)相為：甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸（37：63：1.5），流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。在上述條件下：楊梅苷色譜峰與相鄰色譜峰分離良好，理論塔板數(shù)大于4500，峰形對(duì)稱(chēng)，滿(mǎn)足含量測(cè)定的要求。

2.2 供試品溶液制備方法

取側(cè)柏葉粉末（過(guò)二號(hào)篩）約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）40min，放冷后稱(chēng)定重量，加50%乙醇補(bǔ)足減失的重量。濾過(guò)，經(jīng)0.45μm濾膜濾過(guò)，即得。

2.3 對(duì)照品溶液制備方法

精密稱(chēng)取楊梅苷0.3mg置10mL容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，經(jīng)0.45μ m濾膜濾過(guò)，備用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備和線(xiàn)性范圍考察

對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)取0.3mg楊梅苷對(duì)照品，以70%乙醇定容于10mL容量瓶中，得對(duì)照品溶液。取照品溶液1μl、2μl，6μl，10μl，14μl，18μl注入液相色譜儀中，按規(guī)定色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量（Y，mg）為縱坐標(biāo)，峰面積X為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得楊梅苷的線(xiàn)性方程：r=0.9999（n=5），線(xiàn)性范圍為0.023mg/mL-0.414mg/mL。

2.5 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液10μl，注人液相色譜儀中，連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果表明，楊梅苷RSD值為0.91%。說(shuō)明儀器精密度良好。

精密吸取供試品溶液10μl，分別于0、1、2、3、4、5、6、7、8小時(shí)注入液相色譜儀中，記錄峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果表明，楊梅苷RSD值為0.17%，說(shuō)明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同一樣品共6份，按照供試品溶液制備方法制得供試品溶液，精密吸取

供試品溶液10μl，注入液相色譜儀中，每份樣品測(cè)定1次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值，考察樣品重復(fù)性。

結(jié)果表明：6份樣品重復(fù)性試驗(yàn)中楊梅苷RSD值為0.83%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的側(cè)柏葉樣品粉末5份，分別精密加一定量的楊梅苷對(duì)照品，按照供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，并按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算楊梅苷加樣回收率。結(jié)果，楊梅苷的平均回收率為98.53% （n=5），結(jié)果見(jiàn)表1。

以上HPLC含量測(cè)定的方法學(xué)考察證明：本研究建立的HPLC含量測(cè)定方法準(zhǔn)確、可行，適用于側(cè)柏中楊梅苷的含量測(cè)定。

2.8 樣品測(cè)定

按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，取供試品溶液按色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以

外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 側(cè)柏葉中楊梅苷成分具有收縮血管、降血糖、抗氧化、保肝、利膽、抗炎、抗突變、抗腫瘤和鎮(zhèn)痛作用，是側(cè)柏中有效成分之一，有關(guān)側(cè)柏葉中楊梅苷的含量測(cè)定未見(jiàn)報(bào)道，本文首次對(duì)楊梅苷進(jìn)行了含量測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法，重復(fù)性好，精高，簡(jiǎn)便快速，本研究為完善和豐富側(cè)柏藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。

3.2 本實(shí)驗(yàn)分別考察了甲醇-0.3%甲酸，甲醇-0.5%磷酸，與甲醇0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸，三種流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果表明在甲醇-磷酸溶液-冰醋酸系統(tǒng)中拖尾因子最小，峰形最好。

3.3 由樣品測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)不同產(chǎn)地側(cè)柏葉中楊梅苷含量差異較大，其中陜西省咸陽(yáng)市樣品與重慶市樣品含量相差近3倍，其含量變化可能與氣候、地理位置以及采集時(shí)間等因素有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

作者簡(jiǎn)介

高莉（1992年），女（漢族），本科學(xué)歷。endprint