田少華 張樹(shù)龍

離子通道病多數(shù)由編碼心臟離子通道的基因異常所引起，如長(zhǎng)QT綜合征(LQTS)、 Brugada綜合征(BrS)、兒茶酚胺敏感性室性心動(dòng)過(guò)速( CPVT)、J波綜合征(JWSs)等。離子通道病的基因檢測(cè)在診斷、預(yù)防及治療上扮演著重要角色，越來(lái)越受到學(xué)者的關(guān)注。隨著新一代測(cè)序技術(shù)(NGS)的展開(kāi)，使得基因檢測(cè)變得越來(lái)越容易，越來(lái)越多的致病基因和變異被篩選出來(lái)。離子通道病基因檢測(cè)的潘多拉盒子似乎要打開(kāi)了，但事實(shí)真的如此嗎？筆者將對(duì)離子通道病基因檢測(cè)的最新進(jìn)展和相關(guān)離子通道疾病基因檢測(cè)的應(yīng)用評(píng)論作一綜述。

1 離子通道病基因檢測(cè)的新進(jìn)展

近些年，隨著離子通道病共識(shí)的推出，離子通道病的基因檢測(cè)在診斷、預(yù)防及治療上扮演著重要角色，越來(lái)越受到學(xué)者的關(guān)注。近兩年，離子通道病的基因檢測(cè)又有了一些新的進(jìn)展。

1.1LQTS的基因檢測(cè) 根據(jù)孟德?tīng)栠z傳定律，LQTS分為兩種類(lèi)型：多數(shù)為常染色體顯性遺傳的RW綜合征(Romano-Wardsyndrome syndrome)，少數(shù)為常染色隱形遺傳的JLN綜合征(Jervell Lange-Nielsen syndrome )。以往研究認(rèn)為RWS相關(guān)突變基因有13個(gè)，但Marsman等[1]通過(guò)更先進(jìn)的NGS技術(shù)篩選基因組范圍內(nèi)的罕見(jiàn)致病基因，發(fā)現(xiàn)表達(dá)鈣調(diào)蛋白的CALM1、CALM2基因變異與LQT有關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)使RWS的候選基因庫(kù)增加到15個(gè)。但這一發(fā)現(xiàn)未能明確基因表型和臨床表型之間的關(guān)聯(lián)，目前還不適于用于臨床基因檢測(cè)[2]。但NGS通過(guò)對(duì)人基因庫(kù)篩選發(fā)現(xiàn)致病基因，對(duì)推動(dòng)離子通道病的基因檢測(cè)與臨床應(yīng)用有重要意義，會(huì)成為一種常規(guī)基因檢測(cè)手段。

另外，對(duì)LQT2的基因檢測(cè)又有新發(fā)現(xiàn)，Kondo等[3]對(duì)1例LQT2研究發(fā)現(xiàn)了新的HERG突變A78T，同時(shí)對(duì)該變異進(jìn)行熱休克(heat shock)干預(yù)來(lái)檢驗(yàn)其穩(wěn)定性。結(jié)果表明A78T-HERG蛋白表達(dá)并不穩(wěn)定，而且使快速延遲整流K通道表達(dá)下降。但運(yùn)用熱休克因子-1(heat shock factor-1，HSF-1)干預(yù)后A78T-HERG的變異得以恢復(fù)。這提示，對(duì)A78T-HERG的LQT2病人通過(guò)HSF-1靶點(diǎn)干預(yù)將會(huì)是新的治療手段。

1.2CPVT的基因檢測(cè) 截止目前，CPVT共發(fā)現(xiàn)3種致病基因，1-2型CPVT分別為RYR2、CASQ2，它們引起肌漿網(wǎng)離子通道鈣離子通道蛋白及跨膜蛋白的結(jié)構(gòu)及功能改變[4]，CPVT3型基因位于7p22-p14，但犯罪基因至今仍未明確[5]。RYR2、CASQ2分別為常染色體顯性、隱性遺傳，以往對(duì)它們的研究發(fā)現(xiàn)較多。通過(guò)NGS技術(shù)研究RYR2，發(fā)現(xiàn)了諸多變異。近期，Roston等[6]又通過(guò)對(duì)一個(gè)CPVT合并左室致密化不全(LVNC)的多代遺傳的家系進(jìn)行了研究，通過(guò)基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)了新的RYR2變異位點(diǎn)(I4855M)，該變異在該家系的兩位先證者發(fā)現(xiàn)。I4855M可能干擾了Ca2+釋放，在野生型RYR2中引起負(fù)顯性效應(yīng)，最終通過(guò)基因結(jié)構(gòu)及功能檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，這一變異為功能缺失變異。他們的研究提示，這一新的RYR2變異可能是CPVT和LVNC的重疊變異。除了以上三種基因變異，Makita等[7]還報(bào)道了少見(jiàn)的CPVT致病基因，鈣調(diào)蛋白表達(dá)異常的CALM1、CALM2基因也與CPVT的發(fā)生相關(guān)。這也提示，CPVT和LQTS存在著重疊致病基因。近期，學(xué)者們通過(guò)對(duì)CALM、TRD進(jìn)行基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，它們是CPVT的致病變異，分別為CPVT4、CPVT5[8]。Vega等[9]發(fā)現(xiàn)，與LQT7有關(guān)的KCNT2變異及與LQT4有關(guān)的ANK2變異，可能是CPVT的變異基因亞型，這些證據(jù)也表明，CPVT和LQTS存在著很多的基因重疊。

1.3BrS的基因檢測(cè) BrS是沒(méi)有器質(zhì)性心臟病的常染色顯性遺傳病。迄今為止，發(fā)現(xiàn)多達(dá)19種致病基因[10]，這些基因引起鈉、鉀、鈣通道結(jié)構(gòu)或功能改變。以往研究發(fā)現(xiàn)，SCN5A是BrS最常見(jiàn)的致病基因。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，單一的SCN5A變異會(huì)在同一個(gè)體或家系出現(xiàn)多種臨床表型，如BrS、LQT3、病竇綜合征(SSS)、心臟傳導(dǎo)障礙(CCD)，出現(xiàn)所謂的重疊綜合征[11]。并且，相同基因型的BrS臨床表型可能會(huì)出現(xiàn)很大差別，甚至有些患者僅僅通過(guò)表現(xiàn)出早復(fù)極綜合征(ERS)而被識(shí)別[11]。以上發(fā)現(xiàn)，提示BrS更容易表現(xiàn)出重疊綜合征和基因異質(zhì)性，這或許和BrS的致病基因類(lèi)型較多，和其他離子通道病基因重疊概率大有關(guān)。

1.4JWSs的基因檢測(cè) JWSs包括BrS和ERS。目前，與 BrS相關(guān)的SCN5A基因變異就超過(guò)300個(gè)，在BrS和ERS中有很多與SCN5A基因變異相關(guān)。SCN5A的功能缺失突變與BrS和ERS都有關(guān)系，也與SSS、CCD、Lenegre病有關(guān)。當(dāng)存在顯著增大的短暫外向鉀電流(Ito)時(shí)，功能缺失突變導(dǎo)致INa減低表現(xiàn)為BrS/ERS，否則表現(xiàn)為傳導(dǎo)異常[12]。在BrS先證者中發(fā)現(xiàn)，13%病人包括下列基因變異：CACNA1C(Cav1.2)、CACNB2b(Cavβ2b)和CACNA2D1(Cavα2δ)。相對(duì)罕見(jiàn)基因突變包括：三磷酸甘油脫氫酶1基因(GPD1L)、SCN1B(鈉通道的β1亞基)、KCNE3(MiRP2)、SCN3B(鈉通道的β3亞 基)、KCNJ8 (Kir6.1)、KCND3(Kv4.3)、RANGRF(MOG1)、SLMAP、ABCC9(SUR2A)、(Navβ2)、PKP2(plakophillin-2)、FGF12(FHAF1)、HEY2和SEMA3A(腦信號(hào)蛋白)[13]。最近發(fā)現(xiàn)編碼鈉通道的SCN10A基因突變也可引起B(yǎng)rS。Behr等[14]分析了SCN10A突變及罕見(jiàn)突變的患病率，發(fā)現(xiàn)兩者具有很高的相關(guān)性(5%～16.7%)。這些基因突變引起鈉和鈣通道電流(INa、ICa)的功能缺失，以及Ito和ATP敏感性鉀電流(IK-ATP)的功能獲得[14]。另外，最新報(bào)道的易感但仍需驗(yàn)證的基因有：瞬時(shí)受體電位M通道蛋白-4基因(TRPM4)和KCND2基因[15]。

早期復(fù)極樣改變(ERP)的心電圖改變具有明顯家族聚集性。目前已確定的與ERP和ERS都相關(guān)的基因變異有7個(gè)。另外，在ERS先證者中也發(fā)現(xiàn)了L型鈣通道(CACNA1C、CACNB2和CACNA2D1)的α1、β2、α2δ亞基，Nav1.5的α1亞基，以及Nav1.8(SCN5A、 SCN10A)的功能缺失突變[13]。

1.5緩慢型心律失常的基因檢測(cè) SCN5A在心房肌表達(dá)豐富，這在以往已經(jīng)明確。Baskar等[16]報(bào)道過(guò)某一SCN5A變異可引起整個(gè)心房傳導(dǎo)阻滯，從而引起心房靜止或SSS，但具體作用機(jī)制不明。Chiang等[17]對(duì)緩慢型心律失?；颊哌M(jìn)行回顧性研究發(fā)現(xiàn)，功能缺失的SCN5A變異和竇房結(jié)功能不良、心房靜止及起搏奪獲不良相關(guān)。以往也有學(xué)者報(bào)道調(diào)控心房鈉尿肽(ANP)表達(dá)的鈉尿肽前體蛋白A(NPPA)基因變異與心房靜止有關(guān)，這可能與ANP啟動(dòng)第二信使環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)參與調(diào)控離子通道有關(guān)，但NPPA變異引起的心房電生理效應(yīng)仍不清楚[18]。越來(lái)越多的證據(jù)顯示，LMNA、SCN1B、SCN10A、GJA5(Cx40)、KCNJ2、TRPM4、KCNK17等基因變異參與了心臟傳導(dǎo)阻滯的發(fā)生[18]。

2 基因檢測(cè)臨床應(yīng)用的評(píng)價(jià)

2.1LQTS基因檢測(cè)評(píng)價(jià) 以往研究發(fā)現(xiàn)，在LQTS中KCNQ1基因(LQT1)占30%～35%，KCNH2基因(LQT2)占25%～30%，SCN5A基因(LQT3)占5%～10%，這三種基因占LQTS基因檢測(cè)陽(yáng)性病例的90%。雖然其他類(lèi)型LQTS相關(guān)基因<5%，但在LQTS基因檢測(cè)中仍會(huì)遇到假陽(yáng)性的可能[19]。

另外，在確診的LQTS中，LQT1～3基因表型和臨床表型相關(guān)，并且根據(jù)臨床特點(diǎn)(癥狀、家族史、心電圖)可以推斷基因型，這在以往已經(jīng)明確，對(duì)這類(lèi)明確基因表型和臨床表型關(guān)聯(lián)的候選基因進(jìn)行基因檢測(cè)更合理[20]。少數(shù)的LQTS，其基因型和臨床特點(diǎn)并無(wú)關(guān)聯(lián)。某些表現(xiàn)出明顯臨床特點(diǎn)的LQTS患者，其陽(yáng)性基因檢出率只有10%[21]，這在LQT7和LQT8基因檢測(cè)中更常見(jiàn)[22]。因此，對(duì)未能明確基因表型和臨床表型有確信關(guān)聯(lián)的致病基因型，并不適合用于臨床基因檢測(cè)。由于LQTS相關(guān)基因變異較大，最近有學(xué)者[23]試圖通過(guò)全外顯子測(cè)序(WES)篩選可疑基因，這或許能揭示LQTS的真實(shí)世界數(shù)據(jù)，但基因序列的高變異性和相關(guān)基因的低覆蓋率會(huì)使這一檢測(cè)手段的敏感性降低。

2.2CPVT基因檢測(cè)評(píng)價(jià) Makita等[7]報(bào)道了CALM1、CALM2基因與CPTV的發(fā)生相關(guān)。近期，學(xué)者們通過(guò)對(duì)CALM、TRD進(jìn)行基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，它們是CPVT的致病變異，分別為CPVT4、CPVT5[8]。Vega等[9]發(fā)現(xiàn)，與LQT7有關(guān)的KCNT2變異及與LQT4有關(guān)的ANK2變異，可能是CPVT的變異基因亞型，這些證據(jù)表明，CPVT和LQTS存在著很多的基因重疊。NGS的出現(xiàn)解決了基因測(cè)序的問(wèn)題，但通過(guò)NGS無(wú)法提高重疊綜合征的基因檢測(cè)特異度。CPVT的基因檢測(cè)，對(duì)合理選擇治療策略(藥物、ICD、LCSD、RFCA)有指導(dǎo)意義，但對(duì)重疊綜合征相關(guān)基因進(jìn)行檢測(cè)，較低的特異度或許會(huì)限制基因檢測(cè)的臨床應(yīng)用。

2.3BrS基因檢測(cè)評(píng)價(jià) 最近的專(zhuān)家共識(shí)認(rèn)為，已在先證者發(fā)現(xiàn)BrS致病基因突變者，推薦其家族成員及相關(guān)親屬進(jìn)行該特定突變的檢測(cè)(Ⅰ類(lèi)推薦)[24]。BrS發(fā)作前心電圖正常，暈厥、室性心動(dòng)過(guò)速或心臟驟?？赡苁鞘装l(fā)表現(xiàn)，具有較高的心源性猝死(SCD)風(fēng)險(xiǎn)。有學(xué)者認(rèn)為SCN5A是BrS最常見(jiàn)的致病基因，對(duì)此致病進(jìn)行基因檢測(cè)，有很強(qiáng)的預(yù)測(cè)價(jià)值。然而，真實(shí)世界似乎并非如此。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，SCN5A變異似乎并不是BrS的未來(lái)心臟事件(暈厥或SCD)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[25]。通過(guò)亞組分析發(fā)現(xiàn)，和錯(cuò)義的SCN5A變異相比，引起蛋白表達(dá)截短(中斷或移碼)的SCN5A變異中出現(xiàn)了PR、QRS間期延長(zhǎng)。通過(guò)對(duì)中國(guó)臺(tái)灣的漢族人群研究發(fā)現(xiàn)，SCN5A變異很可能并不是BrS心律失常復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)因子，但可能能夠預(yù)測(cè)心律失常事件的啟動(dòng)時(shí)間(數(shù)據(jù)尚未發(fā)布)。對(duì)BrS進(jìn)行基因檢測(cè)前，必須有能夠診斷BrS的臨床證據(jù)(臨床發(fā)作史、家族史、心電圖)，而且對(duì)臨床確診的BrS，不同于LQTS，無(wú)論藥物或ICD，均不依賴(lài)于基因檢測(cè)指導(dǎo)。基因檢測(cè)更多是體現(xiàn)在心臟事件復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值上。以上研究顯示，BrS相關(guān)基因似乎并非心律失常事件的預(yù)測(cè)因子，預(yù)測(cè)價(jià)值有限。對(duì)臨床確診的BrS，進(jìn)行基因檢測(cè)或許并不合適，但對(duì)家系中的其他成員檢測(cè)，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)可疑基因及豐富變異基因位點(diǎn)有一定意義。

盡管目前專(zhuān)家共識(shí)推薦BrS1或復(fù)雜BrS基因檢測(cè)有益，但對(duì)SCN5A檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，仍有2%～5%的正常人群出現(xiàn)了SCN5A稀有變異，這也提示并非所有已知的SCN5A變異必須進(jìn)行基因檢測(cè)[26]。此外，根據(jù)2012年外顯子組排序計(jì)劃(ESP)提供的數(shù)據(jù)，與BrS相關(guān)的SCN5A變異，在人群中的分布特點(diǎn)仍不清楚。ESP僅僅發(fā)現(xiàn)7%(22/300)的SCN5A變異與BrS相關(guān)，原先學(xué)者們認(rèn)為的所謂致病變異，只是基于這一變異在正常人群中沒(méi)有出現(xiàn)?，F(xiàn)在來(lái)看，這類(lèi)變異可能本來(lái)就罕見(jiàn)或者出現(xiàn)頻率很低，單純歸結(jié)為致病變異而進(jìn)行基因檢測(cè)或許并不合適。此外，很多的BrS變異基因呈不顯性表達(dá)或變異表達(dá)，對(duì)此類(lèi)變異進(jìn)行合理解釋更難，基因檢測(cè)對(duì)此類(lèi)變異幾乎沒(méi)有什么幫助[27]。

BrS更容易表現(xiàn)出重疊綜合征和基因異質(zhì)性，單一的SCN5A變異會(huì)在同一個(gè)體或家系出現(xiàn)多種臨床表型，如BrS、LQT3、SSS、CCD[11]。雖然NGS通過(guò)高通量測(cè)序使變異基因的檢測(cè)更準(zhǔn)確全面，但由于重疊綜合征的存在，對(duì)基因檢測(cè)的特異度提出了挑戰(zhàn)。

2.4JWSs基因檢測(cè)評(píng)價(jià) 針對(duì)BrS和ERS的眾多致病基因，當(dāng)前僅僅對(duì)很小一部分變異進(jìn)行了功能表達(dá)研究，確定了這些變異與疾病的因果關(guān)系，闡明了合理的致病機(jī)制。學(xué)者們運(yùn)用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型進(jìn)行研究的基因變異也很少，而對(duì)BrS或ERS先證者分離的原代心肌細(xì)胞或誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞衍生的心肌細(xì)胞的研究更少。通過(guò)計(jì)算模擬技術(shù)有益于預(yù)測(cè)突變的功能，但至今仍未進(jìn)行嚴(yán)格測(cè)試。Schwartz等[28]強(qiáng)調(diào)：缺乏對(duì)基因變異的功能學(xué)或生物學(xué)驗(yàn)證，是基因檢測(cè)解讀中最嚴(yán)重的不足所在。

源于NGS方法的應(yīng)用，擴(kuò)大了對(duì)一些特異性疾病的認(rèn)識(shí)。 如大幾率外顯子排序工程(GO-ESP)和外顯子組聚集研究(ExAC)，極大地改變了以往關(guān)于心臟離子通道病易感基因所謂的“正?！钡募膊∝?fù)擔(dān)和背景基因變異認(rèn)知的程度[29]。對(duì)BrS患者基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，18%～28%的患者可檢測(cè)到SCN5A基因變異，而在普通人群中同樣存在3%～5%的“良性” SCN5A基因變異。這表明，對(duì)基因檢測(cè)結(jié)果的解釋非常復(fù)雜。這提示即使是攜帶最常見(jiàn)致病突變且有典型BrS表型的患者，基因檢測(cè)出現(xiàn)“假陽(yáng)性”的概率仍高達(dá)10%。目前，已經(jīng)確定了20余個(gè)JWSs易感基因。 這些基因信息僅增加了檢測(cè)結(jié)果解釋中總的 “基因?qū)W噪音”，并未實(shí)質(zhì)性地增加基因檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)真致病突變的機(jī)會(huì)[30]。以上這些基因檢測(cè)中存在的問(wèn)題使我們認(rèn)識(shí)到，以純粹的概率論來(lái)解讀JWSs基因檢測(cè)的結(jié)果很有必要，但卻不能據(jù)此得出是否有病或確診疾病的結(jié)論。

3 小結(jié)

近30年，離子通道病的基因檢測(cè)取得了輝煌的成就。盡管更加先進(jìn)的DNA測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于離子通道病的基因檢測(cè)中，使基因結(jié)構(gòu)和功能復(fù)雜的離子通道病得以明確，但NGS基因檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床實(shí)踐仍面臨挑戰(zhàn)。NGS篩選多致病基因的同時(shí)，不可避免的納入了有意義的不確定罕見(jiàn)變異(VUS)，并增加了后續(xù)基因功能研究的難度。盡管有這些技術(shù)的幫助， 基因檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)的大量基因變異仍成為我們被迫面對(duì)的“基因?qū)W煉獄”，這些變異的數(shù)目也會(huì)隨著外顯子或基因?qū)W測(cè)序的廣泛應(yīng)用而更趨增多。這就要求建立一個(gè)包含有臨床確診和變異分級(jí)證據(jù)相關(guān)的基因變異數(shù)據(jù)庫(kù)。這樣或許更能推動(dòng)離子通道病的基因檢測(cè)，至少現(xiàn)階段，離子通道病基因檢測(cè)的潘多拉盒子仍未打開(kāi)。

1 Marsman RF,Barc J,Beekman L,et al.A mutation in CALM1 encoding calmodulin in familial idiopathic ventricular fibrillation in childhood and adolescence[J].J Am Coll Cardiol, 2014,63(3):259

2 Mizusawa Y,Horie M,Wilde AA.Genetic and clinical advances in congenital long QT syndrome[J].Circ J,2014,78(12):2 827

3 Kondo T,Hisatome I,Yoshimura S,et al.Characterization of the novel mutant A78T-HERG from a long QT syndrome type 2 patient: instability of the mutant protein and stabilization by heat shock factor 1[J].J Arrhythm,2015,32(5):433

4 Refaat MM,Hassanieh S,Scheinman M.Catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia[J].Card Electrophysiol Clin,2016,8(1):233

5 Sumitomo N.Current topics in catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia[J].J Arrhythm,2015,32(5):344

6 Roston TM,Guo W,Krahn AD,et al.A novel RYR2 loss-of-function mutation (I4855M) is associated with left ventricular non-compaction and atypical catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia[J].J Electrocardiol,2017,50(2):227

7 Makita N,Yagihara N,Crotti L,et al.Novel calmodulin mutations associated with congenital arrhythmia susceptibility[J].Circ Cardiovasc Genet, 2014,7(4):466

8 Rouxbuisson N,Cacheux M,Fourestlieuvin A,et al.Absence of triadin, a protein of the calcium release complex, is responsible for cardiac arrhythmia with sudden death in human[J].Hum Mol Genet,2012,21(12):2 759

9 Vega AL,Tester DJ,Ackerman MJ,et al.Protein kinase A-dependent biophysical phenotype for V227F-KCNJ2 mutation in catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia[J].Circ Arrhythm Electrophysiol,2009,2(5):540

10 Bezzina CR,Barc J,Mizusawa Y,et al.Common variants at SCN5A-SCN10A and HEY2 are associated with Brugada syndrome,a raredisease with high risk of sudden cardiac death[J].Nat Genet,2013,45(9):1 044

11 Li A, Behr ER.Brugada syndrome: an update[J].Future Cardiol,2013,9(2):253

12 Park DS,Cerrone M,Morley G,et al.Genetically engineered SCN5A mutant pig hearts exhibit conduction defects and arrhythmias[J].J Clin Invest,2015,125(1):403

13 Antzelevitch C,Yan GX,Ackerman MJ,et al.J-Wave syndromes expert consensus conference report: Emerging concepts and gaps in knowledge[J].J Arrhythm,2016,32(5):315

14 Behr ER,Savio-Galimberti E,Barc J,et al.Role of common and rare variants in SCN10A: results from the Brugada syndrome QRS locus gene discovery collaborative study[J].Cardiovasc Res,2015,106(3):520

15 Liu H,Chatel S,Simard C,et al.Molecular genetics and functional anomalies in a series of 248 Brugada cases with 11 mutationsin the TRPM4 channel[J].PLoS One,2013,8(1):e54 131

16 Baskar S,Ackerman MJ,Clements D,et al.Compound heterozygous mutations in the SCN5A-encoded Nav1.5 cardiac sodium channel resulting in atrial standstill and His-Purkinje system disease[J].J Pediatr,2014,165(5):1 050

17 Chiang DY,Kim JJ,Valdes SO,et al.Loss-of-function SCN5A mutations associated with sinus node dysfunction,atrial arrhythmias, and poor pacemaker capture[J].Circ Arrhythm Electrophysiol,2015,8(5):1 105

18 Ishikawa T,Tsuji Y,Makita N.Inherited bradyarrhythmia: a diverse genetic background[J].J Arrhythm,2016,32(5):352

19 Giudicessi JR,Ackerman MJ.Genetic testing in heritable cardiac arrhythmia syndromes: differentiating pathogenic mutations from background genetic noise[J].Curr Opin Cardiol,2013, 28(1):63

20 Takigawa M,Kawamura M,Noda T,et al.Seasonal and circadian distributions of cardiac events in genotyped patients with congenital long QT syndrome[J].Circ J,2012,76(9):2 112

21 Tester DJ,Will ML,Haglund CM,et al.Compendium of cardiac channel mutations in 541 consecutive unrelated patients referred for long QT syndrome genetic testing[J].Heart Rhythm, 2005,2(5):507

22 Boczek NJ,Miller EM,Ye D,et al.Novel Timothy syndrome mutation leading to increase in CACNA1C window current[J].Heart Rhythm,2015,12(1):211

23 Burgos M,Arenas A,Cabrera R.Semiconductor whole exome sequencing for the identification of genetic variants in colombian patients clinically diagnosed with long QT syndrome[J].Mol Diagn Ther,2016,20(4):353

24 Priori SG,WildeAA,Horie M,et al.HRS/EHRA/APHRS expert consensus statement on the diagnosis and management of patients with inherited primary arrhythmia syndromes:document endorsed by HRS,EHRA,and APHRS in May 2013 and by ACCF,AHA,PACES,and AEP C in June 2013[J].Heart Rhythm,2013,10(12):1 932

25 Probst V,Veltmann C,Eckardt L,et al.Long-term prognosis of patients diagnosed with Brugada syndrome:results from the FINGER Brugada Syndrome Registry[J].Circulation,2010,121(5):635

26 Kapplinger JD,Tester DJ,Alders M,et al. An international compendium of mutations in the SCN5A-encoded cardiac sodium channel in patients referred for Brugada syndrome genetic testing[J].Heart Rhythm,2010,7(1):33

27 Risgaard B,Jabbari R,Refsgaard L,et al.High prevalence of genetic variants previously associated with Brugada syndrome in new exome data[J].Clin Genet,2013,84(5):489

28 Schwartz PJ,Ackerman MJ,Jr GA,et al.Impact of genetics on the clinical management of channelopathies[J].J Am Coll Cardiol,2013,62(3):169

29 Andreasen C,Refsgaard L,Nielsen JB,et al.Mutations in genes encoding cardiac ion channels previously associated with sudden infant death syndrome(SIDS) are present with high frequency in new exome date[J].Can J Cardiol,2013,29(9):1 104

30 Alfares AA,Kelly MA,Mcdermott G,et al.Results of clinical genetic testing of 2,912 probands with hypertrophic cardiomyopathy:expanded panels offer limited additional sensitivity[J].Genet Med,2015, 17(11):880