羅文杰，鐘亨任，何露露，邵佳琪，宋彥廷，張英霞

(海南大學 海洋學院，熱帶生物資源教育部重點實驗室， 海南 ?？?570228)

抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌穩(wěn)定性及其抗菌機理

羅文杰，鐘亨任，何露露，邵佳琪，宋彥廷，張英霞

(海南大學 海洋學院，熱帶生物資源教育部重點實驗室， 海南 ?？?570228)

Lc-NKlysin-1是從海洋魚類——大黃魚(Larimichthyscrocea)中獲得的抗菌肽，為進一步優(yōu)化該抗菌肽和研究其結構與功能的關系，本文截取了其N末端的12個氨基酸殘基，設計并合成了抗菌肽Lc-NKlysin-1a，同時，通過瓊脂板打孔法，對其抗菌活性，不同溫度、pH值、鹽濃度等對其抗菌活性的影響，其溶血活性，最低抑菌質量濃度，其抗菌特征等進行了研究，并在掃描電鏡下觀察了其對細菌形態(tài)結構的影響.結果表明：抗菌肽Lc-NKlysin-1a對革蘭氏陽性菌(金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌)和革蘭氏陰性菌(大腸桿菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、抗鏈霉素大腸桿菌)均具有抗菌活性；但對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和抗鏈霉素大腸桿菌的抗菌活性最好，其最低抑菌質量濃度(MIC)在15.625～31.25 μg·mL-1之間；相對于Lc-NKlysin-1，Lc-NKlysin-1a的抗菌活性明顯增強；Lc-NKlysin-1a在15.625～31.25 μg·mL-1時，其溶血率為3.80%～7.37%，溶血活性較低；Lc-NKlysin-1a對溫度、pH和鹽等具有良好的耐受性，且穩(wěn)定性高.此外，通過掃描電鏡還觀察到，抗菌肽Lc-NKlysin-1a作用于細菌后細菌的形態(tài)發(fā)生了明顯改變，其細胞膜出現了褶皺和塌陷的現象，最終導致了內溶物外瀉而死亡.改造后的抗菌肽其相對分子質量小，活性高，穩(wěn)定性強，更易于被開發(fā)成抗菌肽類藥物.

抗菌肽； 大黃魚； 抗菌活性； 穩(wěn)定性； 機理

抗生素的發(fā)現和使用是人類醫(yī)學史上的巨大進步，它挽救了數以億計的生命[1]，但抗生素的濫用亦導致了許多耐藥菌出現，這些耐藥菌給人類的健康帶來了極大的威脅.抗菌肽是生物免疫系統產生的一類抵抗外界病原體感染的肽類生物活性物質，它廣泛存在于昆蟲、植物、動物及人體內[2].抗菌肽不僅具有抗生素的抗菌特性，而且與傳統的抗生素相比，它還具有抗菌譜廣、不易產生耐藥性、使用后無藥物殘留和具有熱穩(wěn)定性等優(yōu)點，因此，它可作為一種新型的抗生素替代品[3-4].海洋擁有豐富的生物多樣性和生態(tài)環(huán)境多樣性，其中，無脊椎動物和魚類是海洋生物多樣性的代表，是具有新型結構和功能的抗菌肽的重要來源.大黃魚(Larimichthyscrocea)是一種海洋經濟魚類，為我國傳統“四大海產”之一[5]，Zhou等從大黃魚中獲得了多種抗菌肽，他對抗菌肽Lc-NKlysin-1(GLLKSLCKKFVKGHLGELIEELTTSDD)的抗菌活性進行了初步的研究，發(fā)現Lc-NKlysin-1對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和大腸桿菌具有抗菌活性，而對副溶血弧菌不具有活性[6].抗菌肽的正電荷數、疏水性、兩親性α-螺旋、肽鏈長度、C-末端或N-末端二級結構等都與其抗菌活性或溶血活性密切相關，因此，通過刪除或替換抗菌肽中的氨基酸，可以獲得活性更好的抗菌肽[7～8].為了優(yōu)化抗菌肽Lc-NKlysin-1，通過對其結構的分析發(fā)現，抗菌肽Lc-NKlysin-1含有27個氨基酸殘基，其合成成本相對較高，且抗菌肽Lc-NKlysin-1帶有1 個負電荷，不利于與帶有負電荷的細菌細胞壁相互作用.為此，本研究截取了其N-末端的12個氨基酸殘基序列，并進行了固相合成，同時將其命名為Lc-NKlysin-1a(GLLKSLCKKFVK).抗菌肽Lc-NKlysin-1a(電荷數+4)富含賴氨酸，相對于原模版抗菌肽Lc-NKlysin-1(電荷數-1)，其所帶正電荷增加，堿性帶有正電荷的區(qū)域與帶負電荷的細菌細胞壁可相互作用，從而使抗菌肽更易于吸附到細胞壁上.Lc-NKlysin-1a中的亮氨酸、苯丙氨酸和纈氨酸構成了疏水性區(qū)域，這有利于抗菌肽通過細胞膜的脂質雙分子層.Lc-NKlysin-1a中還含有甘氨酸、絲氨酸、半胱氨酸和賴氨酸，這些極性氨基酸形成的區(qū)域和疏水性氨基酸形成的區(qū)域形成了兩親性的分子結構，這是抗菌肽發(fā)揮抗菌作用的基礎[9].Lc-NKlysin-1a與模版抗菌肽相比，其疏水性氨基酸的含量相對減少，這有利于降低其溶血活性.鑒此，筆者研究了抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性和其在不同條件下的抗菌穩(wěn)定性，旨在獲得一種抗菌活性穩(wěn)定，溶血率低，合成成本低，且相較于原抗菌肽活性更好的抗菌肽；并試圖在此基礎上，通過殺菌曲線和掃描電鏡來初步探究抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌機理.

1 材料與方法

1.1菌株受試菌株，革蘭氏陰性菌：大腸桿菌(Escherichiacoli，ATCC 25922)、抗鏈霉素大腸桿菌、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa，ATCC 15442)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus，實驗室分離)；革蘭氏陽性菌：金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，ATCC 25923)，枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis，ATCC 6633).

1.2抗菌肽Lc-NKlysin-1a的合成通過固相合成法來合成多肽(上海吉爾生化)，并利用RP-HPLC進行純化(純度大于95%)，然后凍干，用MALDI-TOF檢測合成的多肽.

1.3抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性檢測以瓊脂板擴散法測定抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性[10].分別將所測試的6株細菌的單菌落接種于5 mL的 LB液體培養(yǎng)基中，并于37 ℃振蕩培養(yǎng)8 h，接著調整菌液濃度至1.2×109CFU·mL-1，取200 μL菌懸液，將其加至50～55 ℃的100 mL的LB培養(yǎng)基中，搖勻，倒入培養(yǎng)皿，冷卻，打孔.于孔中分別加入8 μL2 g·L-1的卡那霉素(陽性對照)、無菌水(陰性對照)和2 g·L-1的Lc-NKlysin-1a溶液，并于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)12 h(枯草芽孢桿菌培養(yǎng)24 h)，然后觀察并測量抑菌圈的直徑.

1.4抗菌肽Lc-NKlysin-1a的最低抑菌質量濃度(MIC)測定用無菌水配制2 g·L-1的Lc-NKlysin-1a溶液，通過二倍稀釋，分別配制成質量濃度為1 000，500，250，125，62.5，31.25，16.625 μg·mL-1和8.312 5 μg·mL-1的抗菌肽溶液(備用)，調整菌液濃度至1×106CFU·mL-1，在96孔板中加入100 μL菌液，再分別加入100 μL不同質量濃度的抗菌肽溶液、無菌水或2 g·L-1的卡那霉素，混合均勻，每孔設置3個重復，然后于37 ℃培養(yǎng)12 h，每孔再加入20 μL刃天青溶液(1.4 g·L-1)，培養(yǎng)2 h，觀察孔中的顏色變化.

1.5Lc-NKlysin-1a抗菌穩(wěn)定性的研究

1.5.1 不同溫度對抗菌肽抗菌活性的影響配制2 g·L-1的Lc-NKlysin-1a溶液，分別在25，40，60，80，100 ℃處理20 min，并通過瓊脂板擴散法，于每孔分別加入8 μL不同溫度處理的抗菌肽溶液或無菌水(陰性對照)，每孔設3個重復，然后將培養(yǎng)皿倒置，于37 ℃培養(yǎng)12 h，觀察并測量抑菌圈的直徑.

1.5.2 加熱時間對抗菌肽抗菌活性的影響為了檢測100 ℃下不同處理時間對抗菌肽抗菌活性的影響，本研究將Lc-NKlysin-1a(2 g·L-1)溶液在100 ℃下分別處理0，20，40，60，80 min，接著，通過瓊脂板擴散法，于各孔中分別加入8 μL 以上處理的Lc-NKlysin-1a或無菌水(陰性對照)，每孔設3個重復，實驗方法見4.1.

1.5.3 不同pH對抗菌肽抗菌活性的影響參考劉晶晶等人的方法處理抗菌肽[11]，即配制2 g·L-1的Lc-NKlysin-1a抗菌肽溶液，在分別用1 mol·L-1的HCl和1 mol·L-1的NaOH調節(jié)pH至2，3，4，5，6，7，8，9，10后，用0.22 μm的微孔濾膜過濾(除菌)，再通過瓊脂板擴散法，于各孔分別加入8 μL不同pH處理的抗菌肽溶液，每孔設3個重復，實驗方法見4.1.

1.5.4 不同鹽濃度對抗菌肽抗菌活性的影響分別用0.5，1，1.5，2 mol·L-1的無菌氯化鈉溶液配制2 g·L-1的Lc-NKlysin-1a溶液，再通過瓊脂板擴散法，分別于各孔加入8 μL不同鹽濃度處理的抗菌肽溶液和無菌水(陰性對照)，每孔設3個重復，實驗方法見4.1.

1.6抗菌肽Lc-NKlysin-1a對金黃色葡萄球菌的殺菌曲線將金黃色葡萄球菌單菌落接種到LB液體培養(yǎng)基中，于37 ℃振蕩培養(yǎng)3 h，調整細菌懸液至1×106CFU·mL-1，各取2.4 mL菌懸液，分別加入800 μL 125 μg·mL-1和62.25 μg·mL-1的Lc-NKlysin-1a溶液(終質量濃度分別為31.25，15.625 μg·mL-1)或無菌水，混勻，并于37℃振蕩培養(yǎng)，然后分別在0，30，60，120，180 min取菌液并涂布培養(yǎng)，最后計數菌落數.

1.7抗菌肽Lc-NKlysin-1a對細菌形態(tài)的影響取大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌單菌落，并將其接種于LB液體培養(yǎng)基中，于37 ℃振蕩培養(yǎng)12 h，然后取750 μL菌液，加入Lc-NKlysin-1a溶液，使其終濃度為4×MIC，接著，以無菌水為陰性對照，于37 ℃培養(yǎng)1 h，然后以5 000 r·min-1離心3 min，取上清，以磷酸緩沖液洗2次，再加入φ=4%的戊二醛，于4 ℃固定8 h，離心，以磷酸緩沖液洗2次；接著加入φ=2%的戊二醛，于4 ℃固定1 h，離心，以磷酸緩沖液洗2次；最后，依次用體積分數為20%，50%，80%，100%的乙醇梯度脫水，每次10 min，然后取菌懸液，將其滴到錫箔紙上，待乙醇揮發(fā)干后，用掃描電鏡觀察.

1.8抗菌肽Lc-NKlysin-1a的溶血活性取新鮮兔子血液，在3 500 r·min-1下離心10 min，棄上清，以生理鹽水洗細胞，直至上清透亮，然后用生理鹽水稀釋細胞至2×107CFU·mL-1，并以二倍稀釋法制備質量濃度分別為400，200，100，50，25，12.5，6.25 μg·mL-1的Lc-NKlysin-1a溶液，以w=0.1%的SDS溶液和生理鹽水分別作為陽性對照和陰性對照，將不同質量濃度的抗菌肽溶液和紅細胞溶液按V抗菌肽∶V細紅胞=1∶1混合，于37 ℃孵育1 h，再在3 500 r·min-1下離心10 min，取上清，最后于405 nm處測吸光值，計算溶血率.

1.9統計學方法利用SPSS 19對實驗數據進行分析，并通過單樣品T檢驗來分析數據差異.

2 結 果

2.1抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性抗菌肽Lc-NKlysin-1a對大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌均具有抑菌活性(表1)，其中，抗菌肽Lc-NKlysin-1a對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑最大，對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑最小(圖1)，這說明抗菌肽對金黃色葡萄球菌的抑菌活性較好，但對枯草芽孢桿菌的抑菌活性則相對較弱.

表1 抗菌肽Lc-NKlysin-1a對不同細菌的抑菌圈直徑

1： 2 g·L-1 的Lc-NKlysin-1a ； 2： 2 g·L-1的卡那霉素 ； 3： 無菌水

2.2抗菌肽Lc-NKlysin-1a的最低抑菌質量濃度(MIC) 抗菌肽Lc-NKlysin-1a對大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抗菌活性較好，MIC值較低(在15.625～31.25 μg·mL-1的范圍)，其對綠膿桿菌和枯草芽孢桿菌的抗菌活性亦相對較低，MIC在62.5～125 μg·mL-1之間(表2)，此結果與抑菌圈直徑的測量結果相符.

表2 抗菌肽Lc-NKlysin-1a對不同細菌的最低抑菌質量濃度

2.3抗菌肽Lc-NKlysin-1a的穩(wěn)定性研究

2.3.1 不同溫度對抗菌肽抗Lc-NKlysin-1a抗菌活性的影響不同溫度處理后，抗菌肽Lc-NKlysin-1a對大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別約為4.5 mm，5.5 mm，6.3 mm，與室溫檢測的抑菌圈直徑差別不大，這說明溫度對抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性沒有顯著影響(p>0.05)(圖2).

2.3.2 在100 ℃下不同處理時間對抗菌肽Lc-NKlysin-1a抗菌活性的影響圖3顯示，在100 ℃處理0，20，40，60，80 min后，抗菌肽Lc-NKlysin-1a對大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別約為4.5 mm，6.5 mm，6.5 mm；在100 ℃下處理20，40，60，80 min后，抗菌肽Lc-NKlysin-1a對抗鏈霉素大腸桿菌的抗菌活性較其在常溫條件下的活性有極顯著的提高；抗菌肽在100 ℃下處理20，40，60 min后，其對金黃色葡萄球菌的抗菌活性較其在常溫條件下的活性沒有顯著的影響，但在處理80 min后，卻具有顯著的提高；在100 ℃下處理40，60，80 min后，抗菌肽Lc-NKlysin-1a對大腸桿菌的抗菌活性相較于其在常溫條件下的活性具有極顯著的提高.實驗說明，在100 ℃下處理抗菌肽Lc-NKlysin-1a一定時間后，抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性具有一定的提高.

2.3.3 不同pH值對抗菌肽Lc-NKlysin-1a抗菌活性的影響pH在2.0～10.0時，抗菌肽Lc-NKlysin-1a對大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均具有抗菌活性，它對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和抗鏈霉素大腸桿菌產生最大抑菌圈的pH值分別為7，2和9.抗菌肽Lc-NKlysin-1a在pH為2.0～10.0的環(huán)境下仍能維持較高的抗菌活性(圖4)，這說明抗菌肽Lc-NKlysin-1a在酸性、堿性和中性條件下都具有抗菌活性.

2.3.4 不同鹽濃度對抗菌肽Lc-NKlysin-1a抗菌活性的影響對于大腸桿菌，隨著鹽濃度的增加，抑菌圈的直徑逐漸減??；而對抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，隨著鹽濃度的增加，抑菌圈的直徑卻先增加后減小，且當鹽濃度為1 mol·L-1時，抑菌圈的直徑達到最大，此時，抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性最強(圖5).

2.4抗菌肽Lc-NKlysin-1a對金黃色葡萄球菌的殺菌曲線抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌作用具有濃度依賴特點，隨著抗菌肽濃度的增加，其對金黃色葡萄球菌的殺菌程度逐漸增加.用0.5×MIC和1×MIC的抗菌肽Lc-NKlysin-1a處理金黃色葡萄球菌后，在180 min內細菌數量緩慢下降；而用1×MIC的抗菌肽對其進行處理后，在30 min內細菌的數量則迅速減少，至180 min，細菌數量仍持續(xù)緩慢地下降(圖6).

2.5抗菌肽Lc-NKlysin-1a對細菌形態(tài)的影響對于用無菌水處理的大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，其細菌的形態(tài)完整，且未見細胞損傷；但用4×MIC的抗菌肽Lc-NKlysin-1a處理1 h后，卻發(fā)現3種細菌的形態(tài)發(fā)生了改變(圖7).

2.6抗菌肽Lc-NKlysin-1a的溶血活性測定實驗結果表明，當抗菌肽Lc-NKlysin-1a的質量濃度達到200 μg·mL-1時，其對兔紅細胞的溶血率達到最大，為11.83%，當其質量濃度為最低抑菌質量濃度時，其溶血率在4.09%～7.37%之間，溶血活性較低.

3 討 論

近年來，對海洋生物的研究雖然取得了長足的進展，但與陸地生物相比，對其的研究仍顯落后，尤其是有獨特結構和功能的抗菌肽，對其的發(fā)掘和研究顯得更為滯后.海洋來源的抗菌肽往往具有較強的紅細胞溶解活性[12].因此，需重新設計和優(yōu)化抗菌肽分子，這樣就可以降低其細胞毒性，增強其生物活性，降低其生產成本[13].抗菌肽Lc-NKlysin-1a為海洋大黃魚抗菌肽Lc-NKlysin-1的衍生物，為其N末端12個氨基酸殘基序列.Zhou等人的研究顯示，抗菌肽Lc-NKlysin-1對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和哈氏弧菌具有抗菌活性；對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和哈氏弧菌的最低抑菌質量濃度范圍為35.688～71.376 μg·mL-1；對枯草芽孢桿菌的最低抑菌質量濃度范圍為71.376～142.752 μg·mL-1[6].而其衍生物Lc-NKlysin-1a不僅對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和副溶血弧菌具有抗菌活性，而且對銅綠假單胞菌和耐藥菌抗鏈霉素大腸桿菌也具有抗菌活性，這說明該抗菌肽具有更廣的抗菌譜.Lc-NKlysin-1a對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和抗鏈霉素大腸桿菌的最低抑菌質量濃度范圍為15.625～31.25 μg·mL-1，對副溶血弧菌的最低抑菌質量濃度范圍為31.25～62.5 μg·mL-1，對銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌的最低抑菌質量濃度范圍為62.5～125 μg·mL-1.相對于其模板抗菌肽Lc-NKlysin-1，其衍生物Lc-NKlysin-1a對細菌的最低抑菌質量濃度更小，抗菌活性更好，且隨著Lc-NKlysin-1a的相對分子質量降低，其合成成本也相應降低.

傳統抗生素是通過作用于細菌的生理代謝過程和破壞細菌的正常代謝而起到抗菌作用的，然而，細菌可以通過改變自身的基因構成和調整藥物作用的靶點等方式來避開多種抗生素的作用，從而產生耐藥性[14].抗菌肽可以以兩種方式作用于細菌，即胞內作用和膜作用[15-16]，在通過胞內作用時，抗菌肽可透過細胞膜并進入細胞質，然后作用于細胞內靶標，破壞細胞內的正常代謝，從而使細菌死亡，這與傳統抗生素的作用方式相似；在膜作用時，抗菌肽通過所帶正電荷與細菌細胞壁結合，其兩性結構使其可以結合到細胞膜，進而使細胞膜穿孔，破壞其完整性，最終導致細胞內溶物外溢和使細菌死亡[17].多數抗菌肽以膜作用方式作用于細菌，抗菌肽與細胞壁的這種非特異性結合，使細菌對抗菌肽不易產生耐藥性[18].通過掃描電鏡的觀察可知，抗菌肽Lc-NKlysin-1a是通過作用于細菌細胞膜和破壞其結構來使其發(fā)生褶皺、坍塌和形成穿孔并最終使胞內物質外流而致使細菌死亡的，因此，Lc-NKlysin-1a主要是通過膜作用方式來作用于細菌的，至于其是否同時伴有其他的抗菌機制，這還有待于今后更深入的研究.

抗菌肽Lc-NKlysin-1a具有廣譜抗菌活性，它對大腸桿菌、抗鏈霉素大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抗菌活性最好，其最低抑菌質量濃度在15.625～31.25 μg·mL-1的范圍內.抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌活性在25 ℃～80 ℃的范圍內較穩(wěn)定，但在100 ℃下，不同處理時間對其抗菌活性有一定的促進作用；不同pH值對Lc-NKlysin-1a抗菌活性的影響不大；在不同鹽濃度下，Lc-NKlysin-1a對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抗菌活性較穩(wěn)定，然而，鹽濃度的增加卻對抗鏈霉素大腸桿菌的抗菌活性具有顯著的促進作用.抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌譜廣，其對耐藥菌具有抗菌活性，且具有穩(wěn)定性好，溶血活性低，相對分子質量小等特點，這使其具有能被開發(fā)成抗菌肽藥物的良好潛力.

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AntimicrobialStabilityandMechanismofAntimicrobialPeptideLc-NKlysin-1a

Luo Wenjie, Zhong Hengren, He Lulu, Shao Jiaqi, Song Yanting, Zhang Yingxia

(Key Laboratory of Tropical Biological Resources of Ministry of Education, College of Marine Science, Hainan University, Haikou 570228, China)

The antimicrobial peptide, Lc-NKlysin-1, was obtained from marine fish, the large yellow croaker (Larimichthys crocea). In the report, in order to study the relationship between structure and function of Lc-NKlysin-1, Lc-NKlysin-1a (12 N-terminal amino acid residues of Lc-NKlysin-1) was designed and synthesized. The effects of temperature, pH and salt concentration on antibacterial activity of Lc-NKlysin-1a were determined by agar plate drilling method. The hemolytic activity of Lc-NKlysin-1a was measured by hemoglobin releasing method. The minimum inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial peptide was determined by two fold dilution method. The growth curve was drawn to analyze the antimicrobial characteristics of Lc-NKlysin-1a. Under scanning electron microscope, the effects of Lc-NKlysin-1a on the morphology and structure of bacteria was observed. The results indicated that Lc-NKlysin-1a has the antimicrobial activities against Gram-positive strains,Staphylococcusaureus,Bacillussubtilis, and Gram-negative strains,Escherichiacoli,Pseudomonasaeruginosa,Vibrioand streptomycin-resistentE.coli. And the MIC of Lc-NKlysin-1a againstS.aureus,E.coli, and streptomycin-resistantE.coliwere 15.625-31.25 μg.mL-1. The antimicrobial activities of Lc-NKlysin-1a were stronger than that of Lc-NKlysin-1. Lc-NKlysin-1a had high stability against temperature, pH and salt concentration. After being treated with Lc-NKlysin-1a, the cell membrane was folded and collapsed, and leading to cell death. The higher antimicrobial activity, lower molecular mass and stabilities of Lc-NKlysin-1a make it to be a promising candidate of novel antimicrobial agents or models for the development of novel antimicrobial peptides.

antimicrobial peptide;Larimichthyscrocea; antimicrobial activity; stability; mechanism

2017-07-11

國家自然科學基金(31560593)；海南大學省級特色重點學科—藥學(海洋藥物)研究生創(chuàng)新課題

羅文杰(1992 - )，男，安徽太和人，海南大學海洋學院2015級碩士研究生，E-mail:1806428111@qq.com

張英霞( 1973 - ) ，女，吉林集安人，教授，碩士生導師，研究方向: 動物活性蛋白與多肽，E-mail: yingxiazhang@hotmail.com

1004-1729(2017)04-0345-07

R 931.74

ADOl10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2017.0053