方 霞 鄭守鑫 柳明波 熊 彪

欽州市第一人民醫(yī)院，廣西 欽州 535000

·論著臨床診治·

廣西北部灣地區(qū)成人化膿性腦膜炎腦脊液培養(yǎng)的病原菌分析

方 霞 鄭守鑫 柳明波 熊 彪

欽州市第一人民醫(yī)院，廣西 欽州 535000

目的探討廣西北部灣地區(qū)成人化膿性腦膜炎腦脊液培養(yǎng)的病原菌分布及其對(duì)抗菌藥物的敏感性。方法回顧分析2015-01-2017-06欽州市第一人民醫(yī)院收治的51例化膿性腦膜炎患者的腦脊液涂片及培養(yǎng)結(jié)果，并分析病原菌的藥物敏感性。結(jié)果51株病原菌，以真菌感染的新型隱球菌為主，共28株，革蘭陰性桿菌6株，腦膜炎奈瑟菌1株。革蘭陽(yáng)性球菌12株，革蘭陽(yáng)性球菌中以鏈球菌為主。在培養(yǎng)出的真菌中，均對(duì)氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、兩性霉素B、氟胞嘧啶敏感。結(jié)論廣西北部灣地區(qū)成人化膿性腦膜炎病原菌以新型隱球菌為主。

化膿性腦膜炎；細(xì)菌性腦膜炎；廣西北部灣地區(qū)；病原菌；藥敏試驗(yàn)；成人

成人化膿性腦膜炎也稱細(xì)菌性腦膜炎(簡(jiǎn)稱化腦，APM)，起病急、病情嚴(yán)重，發(fā)展迅速，致殘率高、病死率高[1-2]。在全球范圍內(nèi)，每年新發(fā)病的化膿性腦膜炎感染患者可達(dá)120萬(wàn)，在發(fā)展中國(guó)家化腦的病死率高達(dá)20%[3]。其最主要的致病菌是腦膜炎奈瑟球菌和肺炎鏈球菌，在發(fā)達(dá)國(guó)家的化腦患者中其致死率分別為7%和30%。在發(fā)展中國(guó)家APM致死率更高，可達(dá)50%[4]。所以，快速確診化膿性腦膜炎，并進(jìn)行早期治療，能夠明顯減輕其致殘率和減少病死率。

為研究廣西北部灣地區(qū)化膿性腦膜炎的病原菌分布以及耐藥性，現(xiàn)對(duì)2015-01—2017-06欽州市第一人民醫(yī)院收治的51例化腦患者的腦脊液涂片及培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1．1一般資料選取欽州市第一人民醫(yī)院2015-01—2017-06收治的診斷為化膿性腦膜炎患者送檢的腦脊液標(biāo)本，剔除同一患者分離培養(yǎng)出來(lái)的重復(fù)菌株。

1．2方法對(duì)懷疑為顱內(nèi)感染的患者，嚴(yán)格采用無(wú)菌操作技術(shù)采集腦脊液標(biāo)本1～2 mL，消毒瓶口后注入兒童專用培養(yǎng)瓶(美國(guó)BD公司)上機(jī)培養(yǎng)，取出報(bào)警陽(yáng)性的培養(yǎng)瓶分區(qū)劃線接種于含5%羊血的哥倫比亞瓊脂平皿和嗜血桿菌巧克力平皿(廣州迪景公司)，血平皿放35 ℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)；嗜血桿菌巧克力平皿放含5% CO2的培養(yǎng)箱35 ℃培養(yǎng)過(guò)夜。所分離菌株采用法國(guó)生物梅里埃VITEK2 Compact系統(tǒng)進(jìn)行鑒定和藥敏。實(shí)驗(yàn)卡片采用VITEK系統(tǒng)的鑒定卡和藥敏卡；少量無(wú)相應(yīng)藥敏卡片的細(xì)菌采用梅里埃ATB藥敏板條進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。同時(shí)采集2～3 mL腦脊液送檢涂片，3 500 r/min離心10 min，取出沉淀做片，進(jìn)行墨汁染色、革蘭染色并鏡檢。

1．3結(jié)果判讀按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)的指南進(jìn)行。

1．4標(biāo)準(zhǔn)菌株銅綠假單胞菌ATCC27853、金黃色葡萄球菌ATCC29213、大腸埃希菌ATCC25922。

2 結(jié)果

51例腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性患者中每例均只分離到1種菌株，其中真菌32株(62.7%)，革蘭陽(yáng)性球菌12株(23.5%)，革蘭陰性桿菌6株(11.7%)，革蘭陰性球菌1株(2.0%)。在32株真菌中新型隱球菌28株(87.5%)，白假絲酵母菌2株(6.2%)，近平滑假絲酵母菌1株(3.1%)，羅倫特隱球菌1株(3.1%)；在12株革蘭陽(yáng)性球菌中豬鏈球菌Ⅱ型4株(36.4%)，表皮葡萄球菌3株(27.3%)，金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌各2株(占18.2%)，人葡萄球菌1株(9%)；在6株革蘭陰性桿菌中銅綠假單胞菌2株(33.3%)，莫拉菌群、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、大腸埃希菌各1株(16.7%)。見(jiàn)圖1～2。

圖1 腦脊液細(xì)菌分布 圖2 真菌分類

在培養(yǎng)出的真菌中，均對(duì)氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、兩性霉素B、氟胞嘧啶敏感；4株豬鏈球菌Ⅱ型均對(duì)萬(wàn)古霉素、青霉素、奎奴普丁/達(dá)福普丁敏感，2株肺炎鏈球菌均對(duì)萬(wàn)古霉素、氯霉素、阿莫西林、厄他培南、利奈唑胺、泰利霉素敏感，對(duì)紅霉素和四環(huán)素均耐藥；5株葡萄球菌屬均對(duì)萬(wàn)古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/達(dá)福普丁、替加環(huán)素敏感。6株革蘭陰性菌中，1株多重耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌，1株多重耐藥的銅綠假單胞菌和1株產(chǎn)碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌。

3 討論

化膿性腦膜炎是嚴(yán)重威脅人類健康的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，起病急、病情嚴(yán)重，發(fā)展迅速，致殘率、病死率高，預(yù)后效果與是否能早期確診并積極給予有效的治療措施有密切的關(guān)系。腦脊液的相關(guān)檢查是化膿性腦膜炎診斷和療效評(píng)估的重要指標(biāo)，特別是腦脊液涂片和培養(yǎng)的檢查[5]，準(zhǔn)確性極其重要。所以，通過(guò)采集分析患者腦脊液培養(yǎng)以及涂片檢查的結(jié)果，對(duì)明確化膿性腦膜炎診斷有重要的臨床指導(dǎo)意義。

化膿性腦膜炎的確診主要依靠腦脊液相關(guān)檢查、涂片以及細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果。本文分析51例患者細(xì)菌的構(gòu)成，真菌居多，其中以新型隱球菌感染者最多，其次為豬鏈球菌Ⅱ型、表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌以及白假絲酵母。在我國(guó)寧夏地區(qū)化膿性腦膜炎腦脊液培養(yǎng)以革蘭陽(yáng)性球菌為主，其中以葡萄球菌屬感染者最多見(jiàn)，其次分別為單核細(xì)胞增生李斯特菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌以及草綠色鏈球菌[6]。在我國(guó)山東濟(jì)南地區(qū)化膿性腦膜炎腦脊液培養(yǎng)以腦膜炎雙球菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌屬感染為主[7]。在我國(guó)河南地區(qū)化膿性腦膜炎腦脊液培養(yǎng)以鮑曼不動(dòng)桿菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌為主[8]。研究顯示，由于廣西北部灣地區(qū)流行病學(xué)的不同，特別是廣西HIV感染患者較多[9]，由HIV感染引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染主要為隱球菌[10]，以及當(dāng)?shù)厝藗兿矚g養(yǎng)鴿、養(yǎng)豬等生活習(xí)慣和各地區(qū)衛(wèi)生條件不同、抗菌藥物的廣泛使用等，導(dǎo)致當(dāng)?shù)鼗撔阅X膜炎的病原菌分布發(fā)生了較大變化，主要以新型隱球菌感染為主，其次為豬鏈球菌Ⅱ型。豬鏈球菌感染很多情況是由于接觸死豬、病豬和其排泄物等造成的[11]。豬鏈球菌有30多種血清型，感染人類常見(jiàn)血清型為Ⅱ型[12]。本研究分離的豬鏈球菌血清型和文獻(xiàn)報(bào)道一致，肺炎鏈球菌是引起兒童腦膜炎最常見(jiàn)病原菌[13]，本研究中分離2株，其在山東、寧夏、河南[14]等地區(qū)成人化膿性腦膜炎病原菌分離均有報(bào)道，可見(jiàn)肺炎鏈球菌是引起成人腦膜炎又一重要病原菌，值得重視。

本研究藥敏結(jié)果顯示，在培養(yǎng)出的真菌中，均未發(fā)現(xiàn)對(duì)氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、兩性霉素B、氟胞嘧啶耐藥株，與熊志剛等[15]研究的關(guān)于隱球菌和念珠菌對(duì)這5類藥物敏感性>95%無(wú)差異。在培養(yǎng)出的革蘭陽(yáng)性球菌藥敏中，不同細(xì)菌耐藥性各不相同，但無(wú)論是鏈球菌還是葡萄球菌均未發(fā)現(xiàn)對(duì)萬(wàn)古霉素和利奈唑胺耐藥株；鏈球菌對(duì)紅霉素和四環(huán)素耐藥情況嚴(yán)重，考慮到這兩種抗菌藥物不易通過(guò)血腦屏障[16]，故在選擇用藥時(shí)應(yīng)避開(kāi)。臨床分離的革蘭陰性桿菌的耐藥情況十分嚴(yán)重[17]，本研究分離的6株革蘭陰性桿菌中均有多重耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌、多重耐藥的銅綠假單胞菌和產(chǎn)碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌。這種細(xì)菌的分離讓臨床對(duì)化膿性腦膜炎的抗感染治療面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。

腦脊液細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果受標(biāo)本采集時(shí)間和是否使用抗菌藥物等因素的影響；腦脊液涂片受菌量多少的影響，菌量太少不易檢出。當(dāng)培養(yǎng)和涂片是陰性結(jié)果時(shí)也不完全排除細(xì)菌、真菌感染的可能，特別是病毒、結(jié)核分枝桿菌、厭氧菌以及原蟲等病原菌的感染時(shí)用普通細(xì)菌培養(yǎng)、革蘭染色和墨汁染色方法很難檢測(cè)到病原菌。所以，必須綜合運(yùn)用免疫、生化、PCR和熒光等方法進(jìn)行檢測(cè)。

廣西北部灣地區(qū)成人化膿性腦膜炎病原菌以新型隱球菌為主，該地區(qū)醫(yī)生在懷疑腦脊液細(xì)菌感染時(shí)，不應(yīng)盲目參照其他地區(qū)細(xì)菌感染特點(diǎn)使用抗菌藥物，應(yīng)根據(jù)本地區(qū)感染特點(diǎn)立即送檢腦脊液培養(yǎng)、腦脊液墨汁染色、革蘭染色等相關(guān)檢查。當(dāng)染色發(fā)現(xiàn)有真菌，特別是隱球菌屬時(shí)可以經(jīng)驗(yàn)性使用氟胞嘧啶進(jìn)行治療[18]。培養(yǎng)出革蘭陽(yáng)性球菌時(shí)可以經(jīng)驗(yàn)性使用萬(wàn)古霉素或利奈唑胺，待實(shí)驗(yàn)室檢查的藥敏結(jié)果回報(bào)后再根據(jù)敏感藥物調(diào)整用藥方案。這樣可以早期快速診斷化膿性腦膜炎，從而達(dá)到早期治療，并提高成人化腦的治療效果，減輕致殘率和病死率的目的。

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PathogenanalysisofadultpurulentmeningitisinBeibuGulfofGuangxi

FANGXia，ZHENGShouxin，LIUMingbo，XIONGBiao

TheFirstPeople’sHospitalofQinzhou，Qinzhou535000，China

ObjectiveTo investigate the distribution of pathogens in cerebrospinal fluid culture of adult purulent meningitis in Beibu Gulf of Guangxi and its sensitivity to antimicrobial agents．MethodsThe results of cerebrospinal fluid smear and culture in 51 patients with purulent meningitis in our hospital from January 2015 to June 2017 were retrospectively analyzed，and the drug sensitivity of pathogens was analyzed．ResultsAmong the 51 strains of pathogenic bacteria，there were mainly 28 strains of Cryptococcus neoformans with fungal infection，6 strains of Gram-negative bacilli，1 Strain of Neisseria gonorrhoeae．12 strains of Gram-positive cocci were mainly streptococcus．In cultured fungi，fluconazole，Aripiprazole，itraconazole，anphotericin B，and fluorouracil were all sensitive．ConclusionThe pathogen of adult purulent meningitis in Beibu Gulf area of Guangxi is mainly Cryptococcus neoformans．

Purulent meningitis；Bacterial meningitis；Guangxi Beibu Gulf area；Pathogens；Drug sensitivity test；Adult

10.3969/j.issn.1673-5110.2017.23.021

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2013746)

方霞(1986-)，女，本科，主管檢驗(yàn)技師。研究方向：臨床微生物。Email：17883126@qq．com

R512.3

A

1673-5110(2017)23-0084-03

(收稿 2017-08-04)

夏保軍

信息：方霞，鄭守鑫，柳明波，等．廣西北部灣地區(qū)成人化膿性腦膜炎腦脊液培養(yǎng)的病原菌分析[J]．中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2017，20(23)：84-86．