段軍偉，唐曉平，張濤，趙龍，彭華，段劼

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，四川 南充 637000)

microRNA-34a對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響

段軍偉，唐曉平，張濤，趙龍，彭華，段劼

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，四川 南充 637000)

目的研究microRNA-34a對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。方法選取南充市川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2015年3月至2016年3月收治的100例膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象，采集膠質(zhì)瘤組織樣本，選取同期在我院接受減壓術(shù)治療的40例腦外傷患者為對(duì)照，術(shù)中采集正常腦組織樣本。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)microRNA-34a在膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織樣本中表達(dá)水平。將轉(zhuǎn)染后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87分為空白對(duì)照組、無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組及microRNA-34a轉(zhuǎn)染組，檢測(cè)microRNA-34a對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87增殖、凋亡、遷移、侵襲能力的影響。結(jié)果膠質(zhì)瘤組織microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量為(0.53±0.48)，顯著低于正常腦組織的(1.38±0.25)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同惡化程度膠質(zhì)瘤組織microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。microRNA-34a轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后48 h細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡率顯著高于空白對(duì)照組與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組，劃痕24 h后細(xì)胞遷移數(shù)、細(xì)胞12 h穿膜數(shù)顯著低于空白對(duì)照組與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論microRNA-34a具有抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡等作用。

膠質(zhì)瘤；microRNA-34a；細(xì)胞生物學(xué)；增殖；凋亡

膠質(zhì)瘤是臨床常見(jiàn)原發(fā)性顱腦腫瘤，具有較高致殘率與致死率，對(duì)人類健康造成嚴(yán)重威脅[1]。目前膠質(zhì)瘤治療主要以手術(shù)、放療、化療、靶向治療、中醫(yī)藥治療等為主，但由于膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)速度快，與周圍組織界限模糊，侵襲性強(qiáng)，難以徹底根除，治療后仍具有較高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[2]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)microRNA與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展存在密切聯(lián)系，為膠質(zhì)瘤治療提供新思路[3]。本研究選取我院近年來(lái)收治的100例膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象，采集膠質(zhì)瘤組織樣本，探討microRNA-34a對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 膠質(zhì)瘤組織樣本 選取南充市川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2015年3月至2016年3月收治的100例膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《中國(guó)中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤診斷與治療指南(2015)》[4]，經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)為膠質(zhì)瘤患者；(2)初發(fā)膠質(zhì)瘤；(3)在我院接受手術(shù)治療，術(shù)前未經(jīng)放化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有嚴(yán)重心、肺、肝、腎等器官疾??；(2)合并有其他惡性腫瘤；(3)復(fù)發(fā)性膠質(zhì)瘤；(4)既往手術(shù)史或放化療史。100例患者中男性68例，女性32例；年齡35～57歲，平均(46.08±10.82)歲；膠質(zhì)瘤形態(tài)學(xué)分型：彌漫星形細(xì)胞瘤22例，間變星形細(xì)胞瘤17例，大腦膠質(zhì)瘤病11例，少變膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤10例，間變少突膠質(zhì)瘤8例，少突星形細(xì)胞瘤12例，室管膜瘤20例；膠質(zhì)瘤惡性程度分級(jí)：Ⅰ級(jí)21例，Ⅱ級(jí)25例，Ⅲ級(jí)40例，Ⅳ級(jí)14例。本組患者均接受手術(shù)治療，在術(shù)中采集膠質(zhì)瘤組織樣本。選取同期在我院接受減壓術(shù)治療的40例腦外傷患者為對(duì)照組，其中男性28例，女性12例，年齡26～55歲，平均(40.43±14.39)歲，術(shù)中采集正常腦組織樣本。膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織取材成功后，迅速置入凍存管，在液氮環(huán)境保存?；颊呋蚱浼覍賹?duì)本研究知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.1.2 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)，采用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，含10%小牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素，置于37℃、5%CO2恒溫箱培養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR) 取50 mg組織標(biāo)本，研磨成漿，采用Trizol法提取總DNA，microRNA提取試劑盒購(gòu)自德國(guó)Roche公司。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國(guó)Invitrogen)說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄cDNA。本實(shí)驗(yàn)以U6作為內(nèi)源性參照，microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量采用2△△Ct計(jì)算。Real-time PCR購(gòu)自美國(guó)Invirogen公司，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，PCR 循環(huán)參數(shù)：95℃，5 min；95℃，15 s；65℃，15 s；72℃，32 s；95℃，15 s，共40個(gè)循環(huán)，4℃保存。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 取出液態(tài)氮冷藏人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87凍存管，浸入37℃水浴中搖動(dòng)融化，吸出細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入離心管，滴加10 mL培養(yǎng)液，置入離心機(jī)，1 000 r/min離心5 min。棄置上清液，加入10%小牛血清培養(yǎng)基，37℃、5%CO2恒溫箱靜置培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下，采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法直接計(jì)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞密度。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87，種植于24孔板中，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度培養(yǎng)達(dá)到70%～90%。轉(zhuǎn)染步驟嚴(yán)格按照Lipofectamine 2000(美國(guó)Invitrongen公司)試劑盒說(shuō)明書(shū)。在37℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)48 h后，提取總DNA，行反轉(zhuǎn)錄cDNA，實(shí)驗(yàn)步驟與上同。采用Real-time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后microRNA-34a表達(dá)情況。

1.2.4 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖 取出轉(zhuǎn)染后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87，分為空白對(duì)照組、無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組以及microRNA-34a轉(zhuǎn)染組。轉(zhuǎn)染前1 d將細(xì)胞消化接種至24孔培養(yǎng)板，約5×103細(xì)胞/孔，次日以50 mol/L轉(zhuǎn)染濃度轉(zhuǎn)染，設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，以及只加細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8工作液的空白孔，置入37℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后每12 h使用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測(cè)三組細(xì)胞吸光度，計(jì)算三組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。

1.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 取出轉(zhuǎn)染后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87，分組方法同上。置入37℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)48 h，將細(xì)胞吹打成單細(xì)胞懸液，加入緩沖液洗滌，1 000 r/min離心4 min，棄置緩沖液，加入5 μL AnnexinV-FITC和5 μL PI染色，震蕩混勻，室溫避光15 min。加入200 μL Binding buffer重懸細(xì)胞濃度，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)然后細(xì)胞凋亡情況。

1.2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移 取出轉(zhuǎn)染后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87，分組方法同上。將三組細(xì)胞制備為懸液，接種至六孔板中，置入37℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h。次日用20 μL移液器沿培養(yǎng)孔底部作直線劃痕，呈一字型，劃痕過(guò)程嚴(yán)格無(wú)菌。采用緩沖液沖洗劃痕，加入培養(yǎng)液，置入用37℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h。觀察劃痕區(qū)域細(xì)胞遷移情況。

1.2.7 Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲 取出轉(zhuǎn)染后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87，分組方法同上。加入10%小牛血清培養(yǎng)基，長(zhǎng)勢(shì)良好可換用無(wú)血清培養(yǎng)液，置入37℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h。采用人工基質(zhì)膠構(gòu)建侵襲小室，均勻鋪滿所有微孔，室溫放置1 h凝膠。將Transwell小室放入24孔培養(yǎng)板，上室加入100 μL人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87懸液，下室加入10%小牛血清培養(yǎng)基500 μL，置入37℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)48 h。用緩沖液淋洗Transwell小室，再用棉簽擦去濾膜上層細(xì)胞。0.1%結(jié)晶紫溶液染色30 min，采用顯微鏡選取5個(gè)200倍視野計(jì)算穿過(guò)小室底膜的細(xì)胞數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 microRNA-34a在膠質(zhì)瘤與正常腦組織中的表達(dá) 在膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織樣本中均可檢測(cè)到microRNA-34a表達(dá)。正常腦組織microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量為(1.38±0.25)，高于膠質(zhì)瘤組織microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量(0.53±0.48)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.310，P＜0.05)。Ⅰ級(jí)膠質(zhì)瘤組織microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量為(0.83±0.18)，Ⅱ級(jí)為(0.67±0.19)，Ⅲ級(jí)為(0.35±0.12)，Ⅳ級(jí)為(0.10±0.05)。不同惡化程度膠質(zhì)瘤組織microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 Real-time PCR檢測(cè)microRNA-34a的轉(zhuǎn)染效果 在人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞系中，microRNA-34a轉(zhuǎn)染組microRNA-34a表達(dá)量為(6.06±0.15)，顯著高于空白對(duì)照組的(1.67±0.18)與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組的(1.59±0.20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (t=91.788、87.594，P＜0.05)。

2.3 microRNA-34a對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響 microRNA-34a轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h細(xì)胞生長(zhǎng)抑制均顯著高于空白對(duì)照組與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

2.4 microRNA-34a對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響 microRNA-34a轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡率為(8.79±2.82)%，顯著高于空白對(duì)照組的(4.88±1.14)%與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組的(5.12±1.69)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.595、10.938，P＜0.05)。

表1 三組轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%±s)

表1 三組轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%±s)

組別microRNA-34a轉(zhuǎn)染組空白對(duì)照組無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組檢驗(yàn)值1(microRNA-34a轉(zhuǎn)染組vs空白對(duì)照組)檢驗(yàn)值2(microRNA-34a轉(zhuǎn)染組vs無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組)檢驗(yàn)值3(空白對(duì)照組vs無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組)轉(zhuǎn)染后12 h 12.54±2.17 4.42±0.89 4.88±1.04 t=16.961 P＜0.05 t=15.595 P＜0.05 t=1.646 P＞0.05轉(zhuǎn)染后24 h 18.92±3.34 5.63±1.25 6.34±1.29 t=18.257 P＜0.05 t=17.213 P＜0.05 t=1.936 P＞0.05轉(zhuǎn)染后36 h 27.65±2.05 6.85±0.95 5.82±1.35 t=45.099 P＜0.05 t=43.569 P＜0.05 t=3.057 P＜0.05轉(zhuǎn)染后48 h 38.40±4.11 6.16±0.93 7.55±2.19 t=37.481 P＜0.05 t=32.453 P＜0.05 t=2.862 P＜0.05轉(zhuǎn)染后60 h 35.17±3.63 8.92±1.31 8.46±1.74 t=33.323 P＜0.05 t=32.506 P＜0.05 t=1.035 P＞0.05轉(zhuǎn)染后72 h 18.96±3.22 7.73±1.65 8.20±1.63 t=15.205 P＜0.05 t=14.606 P＜0.05 t=0.993 P＞0.05

2.5 microRNA-34a對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移的影響 microRNA-34a轉(zhuǎn)染組劃痕24 h后細(xì)胞遷移數(shù)為(79.25±6.21)，顯著低于空白對(duì)照組的(168.49±11.75)與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組的(151.44±10.32)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.448、14.681，P＜0.05)。

2.6 microRNA-34a對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響 microRNA-34a轉(zhuǎn)染組細(xì)胞12 h穿膜數(shù)為(52.35±4.78)，顯著低于空白對(duì)照組的(233.47±13.95)與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組的(219.22±10.76)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=60.172、69.432，P＜0.05)。

3 討 論

膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的惡性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，具有極高侵襲性，手術(shù)根除難度大，患者復(fù)發(fā)率高，聯(lián)合放化療也無(wú)法取得較佳療效[5]。膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展分子機(jī)制，與如何抑制膠質(zhì)瘤侵襲能力，是目前臨床神經(jīng)外科重要研究課題[6]。microRNA是新近發(fā)現(xiàn)的一類非編碼單鏈RNA分子，含18～25個(gè)核苷酸，在細(xì)胞內(nèi)具有多種重要調(diào)節(jié)作用[7]。目前已發(fā)現(xiàn)28 645個(gè)microRNA，越來(lái)越多研究證實(shí)microRNA參與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展。李星光等[8]發(fā)現(xiàn)microRNA-17高表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良存在密切聯(lián)系。李新星等[9]指出microRNA-221是抑癌基因p27Kipl的調(diào)控因子，可以通過(guò)抑制p27Kipl基因表達(dá)，激活膠質(zhì)瘤細(xì)胞，影響治療與預(yù)后。郎博娟等[10]認(rèn)為microRNA-184低表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，加速腫瘤細(xì)胞增殖，在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展中占有重要地位。趙焱等[11]發(fā)現(xiàn)microRNA-93可以通過(guò)介導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β R2表達(dá)，減弱膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力。根據(jù)microRNA在膠質(zhì)瘤發(fā)展中的作用，可將microRNA分為致癌基因與抑癌基因，前者促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化、增殖、遷移、侵襲，后者參與腫瘤細(xì)胞凋亡，調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲。MicroRNA-34a是一種microRNA抑癌基因，廣泛分布于心、肺、肝、腦等組織中，其編碼基因位于1號(hào)染色體短臂。近年來(lái)研究證實(shí)microRNA-34a可以抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲。袁匯等[12]發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者體內(nèi)microRNA-34a表達(dá)顯著下降，microRNA-34a可以作為宮頸癌治療靶點(diǎn)。莊彪等[13]認(rèn)為microRNA-34a高表達(dá)可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲。金向宇等[14]指出microRNA-34a可以通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2、C-MYC、P53等基因，促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲。為闡明microRNA-34a在過(guò)程中作用，本研究首先比較正常腦組織與膠質(zhì)瘤組織樣本microRNA-34a表達(dá)量，以及不同惡化程度膠質(zhì)瘤組織microRNA-34a表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)隨膠質(zhì)瘤惡化程度上升，microRNA-34a相對(duì)表達(dá)量逐漸降低，提示microRNA-34a與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展存在密切聯(lián)系，可以指導(dǎo)膠質(zhì)瘤分級(jí)。細(xì)胞增殖指細(xì)胞通過(guò)分裂產(chǎn)生新個(gè)體的過(guò)程，是生物體重要生命特征。惡性腫瘤通過(guò)腫瘤細(xì)胞增殖方式不斷發(fā)展惡化[15]。本研究采用經(jīng)典CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)microRNA-34a對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，結(jié)果顯示microRNA-34a轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率均顯著高于空白對(duì)照組與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組，表明microRNA-34a可以減弱膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力。腫瘤發(fā)生是細(xì)胞凋亡受阻造成的腫瘤細(xì)胞失控生長(zhǎng)，過(guò)度增殖[16]。抑制腫瘤細(xì)胞抗凋亡能力，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，是腫瘤治療重要機(jī)制。正常細(xì)胞不會(huì)被AnnexinV-FITC與PI染色，早期凋亡細(xì)胞可被AnnexinV-FITC染色而不會(huì)被PI染色，晚期凋亡細(xì)胞與壞死細(xì)胞可被AnnexinV-FITC與PI染色。本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)，microRNA-34a轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡率顯著增高，與空白對(duì)照組、無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明microRNA-34a具有誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的能力。遷移指腫瘤細(xì)胞隨血液、淋巴轉(zhuǎn)移至其他部位，侵襲指腫瘤細(xì)胞在原發(fā)部位浸潤(rùn)，兩者均為惡性腫瘤重要生物學(xué)特性。相關(guān)研究顯示，膠質(zhì)瘤具有較強(qiáng)遷移、侵襲能力，發(fā)生機(jī)制可能與腫瘤細(xì)胞黏附、局部基質(zhì)降解、腫瘤血管新生等相關(guān)[17]。本研究分別采用劃痕實(shí)驗(yàn)與Transwell法檢測(cè)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移與侵襲能力，結(jié)果顯示microRNA-34a轉(zhuǎn)染組劃痕24 h后細(xì)胞遷移數(shù)、細(xì)胞12 h穿膜數(shù)顯著低于空白對(duì)照組與無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組，提示microRNA-34a可以有效抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲能力。

綜上所述，microRNA-34a在膠質(zhì)瘤組織中呈低表達(dá)，隨病理分級(jí)增高而降低。microRNA-34a高表達(dá)可以抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

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Effect of microRNA-34a on biological characteristics of human brain glioma cells.

DUAN Jun-wei,TANG Xiao-ping,ZHANG Tao,ZHAO Long,PENG Hua,DUAN Jie.Department of Neurosurgery,Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College,Nanchong 637000,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo investigate the effect of microRNA-34a on the biological characteristics of human brain glioma cells.MethodsA total of 100 patients with glioma who were admitted in Department of Neurosurgery,Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College from March 2015 to March 2016 were enrolled as the subjects.The glioma tissues were collected.Forty patients with brain trauma treated by decompression in our hospital were selected as controls,and normal brain tissue samples were collected during the operation.The expression levels of microRNA-34a in glioma tissues and normal brain tissues were detected by real-time quantitative PCR.The human cerebral glioma cell line U87 after transfection were divided into the blank control group,nonsense sequence transfection group and microRNA-34a transfection group.The effect of microRNA-34a on the proliferation,apoptosis,migration and invasion ability of human glioma cell line U87 was detected.ResultsThe relative expression level of microRNA-34a in glioma tissues was significantly lower than that in normal brain tissues,(0.53±0.48)vs(1.38±0.25),P＜0.05.The relative expression level of microRNA-34a showed significantly differences in different deteriorated glioma tissues(P＜0.05).48 hoursafter transfection,the cell growth inhibition rate and cell apoptosis rate after transfection in microRNA-34a transfection group were significantly higher than those in the blank control group and the nonsense sequence transfection group(P＜0.05).The number of migrating cells in 24 hours after scratch and number of cells penetrating membrane in 12 hours were significantly lower than those in the blank control group and nonsense sequence transfection group(P＜0.05).ConclusionmicroRNA-34a can inhibit the proliferation,migration and invasion of glioma cells and promote the apoptosis of tumor cells.

四川省醫(yī)學(xué)科研青年創(chuàng)新課題計(jì)劃(編號(hào)：Q15079)

段軍偉。E-mail：kmcvdeng@126.com

Glioma;microRNA-34a;Cell biology;Proliferation;Apoptosis

R730.264

A

1003—6350（2017）23—3826—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.23.014

2017-05-25)