張靜 李翔 汪偉 劉紅佶 李祥玉 李華宏 王泰 田夢(mèng)瑤 楊鳳嬌

補(bǔ)腎活血中藥對(duì)大鼠慢性高眼壓模型視網(wǎng)膜PI3K/AKt通路Bcl-2及Bad的影響

張靜1,2李翔1汪偉3劉紅佶4李祥玉4李華宏4王泰4田夢(mèng)瑤4楊鳳嬌4

目的觀察補(bǔ)腎活血中藥對(duì)大鼠慢性高眼壓模型視網(wǎng)膜Bcl-2及Bad的干預(yù)作用,探討其作用機(jī)理。方法選取30只SD大鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組、給藥組及模型組,每組各10只。采用烙閉鞏膜上靜脈方法制作慢性高眼壓大鼠動(dòng)物模型,每組連續(xù)灌胃8周后處死大鼠,觀察補(bǔ)腎活血法對(duì)EIOP大鼠眼壓、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和視網(wǎng)膜Bcl-2、Bad 表達(dá)的影響。結(jié)果SD大鼠造模后即刻直至造模后8周與造模前眼壓相比均升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P<0.01),造模后8周眼壓與造模后即刻相比,給藥組有降低趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；造模后8周,給藥組Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)最高,與對(duì)照組和模型組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),模型組Bcl-2表達(dá)多于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),模型組Bad陽(yáng)性表達(dá)最高,與給藥組和對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),給藥組的Bad的表達(dá)多于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。給藥組RGCs超微結(jié)構(gòu)較模型組明顯改善。結(jié)論補(bǔ)腎活血中藥(杞菊地黃丸合復(fù)方丹參片)能保護(hù)SD大鼠慢性EIOP模型視功能,主要表現(xiàn)為:上調(diào)Bcl-2的表達(dá)、下調(diào)Bad的表達(dá)、降低眼壓及改善RGCs超微結(jié)構(gòu)。

青光眼； 補(bǔ)腎活血中藥； 視網(wǎng)膜； 大鼠慢性高眼壓模型； 視神經(jīng)保護(hù)； Bad； Bcl-2

青光眼(glaucoma)為繼白內(nèi)障后的世界第二大不可逆的致盲性眼病。其以病理性的眼壓升高,進(jìn)行性的視神經(jīng)(optic nerve,ON)損害和特征性視野缺損為特點(diǎn)[1]。青光眼的發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜,諸多危險(xiǎn)因素都可以導(dǎo)致青光眼的產(chǎn)生,而最危險(xiǎn)的因素就是病理性眼壓(intraocular pressure,IOP)升高[2],所以青光眼的主要治療措施就是將眼壓控制到靶眼壓。但隨著對(duì)青光眼認(rèn)識(shí)的不斷深入,發(fā)現(xiàn)部分青光眼患者即使將眼壓控制在正常范圍內(nèi)(10～21mmHg),也會(huì)發(fā)生進(jìn)行性視野缺損和視力喪失,因此,青光眼視神經(jīng)損傷的發(fā)病機(jī)制和視神經(jīng)保護(hù)成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)采用烙閉上鞏膜靜脈法誘導(dǎo)產(chǎn)生高眼壓維持穩(wěn)定、持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的慢性高眼壓動(dòng)物模型[3],通過(guò)觀察補(bǔ)腎活血中藥(杞菊地黃丸和復(fù)方丹參片合用)對(duì)EIOP大鼠眼壓及B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)及Bcl-xl/bcl-2相關(guān)死亡啟動(dòng)子(Bcl-associated death protein,Bad)的表達(dá)的影響,探討其保護(hù)視功能的作用機(jī)理,為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

標(biāo)準(zhǔn)1級(jí)SD大鼠30只,雌雄不拘,8～12周齡,體重約150～200g,等價(jià)飼料飼養(yǎng),大鼠及飼料均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。飼養(yǎng)室溫20～25℃,空氣流通,相對(duì)濕度55%～75%,12小時(shí)光照維持,晝夜循環(huán)。自由攝食飲水。納入標(biāo)準(zhǔn):①無(wú)外眼疾??；②雙眼瞳孔直接對(duì)光反射和間接對(duì)光反射正常；③無(wú)歪頸。

1.2 藥品與試劑

復(fù)方丹參片(批號(hào)7122426)、杞菊地黃丸(批號(hào)7072153)均購(gòu)于北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠(chǎng)。Bcl-2抗體(批號(hào)BA0412),Bad抗體(批號(hào)BA0530)均購(gòu)于武漢博士德公司。

1.3 造模方法

SD大鼠購(gòu)回后,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天,進(jìn)行眼壓測(cè)量,正常眼壓區(qū)間估計(jì),取平均眼壓在9～18mmHg者,隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、給藥組,模型組和給藥組進(jìn)行單眼(右眼)造模,左眼不做處理。方法如下:大鼠稱(chēng)重及固定后,用3%戊巴比妥鈉按1.5ml/kg體重行左下腹腔注射全身麻醉,同時(shí)術(shù)眼予0.5%鹽酸丙美卡因滴眼液角結(jié)膜表面麻醉,于10點(diǎn)至2點(diǎn)鐘位距角鞏膜緣1～2mm剪開(kāi)上方球結(jié)膜,分離筋膜,暴露角鞏膜緣后3～4mm近赤道部10點(diǎn)、12點(diǎn)和1點(diǎn)處3支上鞏膜靜脈并烙閉,整復(fù)球結(jié)膜,術(shù)眼涂金霉素眼膏,待大鼠蘇醒后放回籠內(nèi),0.25%氯霉素眼液滴眼,2次/日,連續(xù)6天。對(duì)照組右眼眼科手術(shù)止血器不開(kāi)開(kāi)關(guān)而不起烙閉作用,其余操作相同。因?yàn)楣辔傅仍騽?dòng)物死亡4只。

1.4 分組與給藥方法

對(duì)照組、模型組大鼠給予每天3ml生理鹽水灌胃。將復(fù)方丹參片合杞菊地黃丸磨成粉狀,加入生理鹽水,每60片(18g)配置成100ml懸混液,濃度為0.18g/ml,給藥組混懸液灌胃1.8g/kg.d。實(shí)驗(yàn)中,根據(jù)大鼠體重選取混懸液劑量。每只大鼠每天灌胃總量均3ml,所需混懸液劑量不足3ml的用生理鹽水補(bǔ)足。每天下午17:00灌胃1次,連續(xù)灌胃8周。每2周稱(chēng)體重1次,依據(jù)體重調(diào)給藥量。

1.5 眼壓檢測(cè)

每日固定時(shí)間13:00～16:00測(cè)量眼壓,采用TONO-PEN筆試眼壓計(jì),分別測(cè)量3組大鼠造模前、造模后即刻、造模后二周、造模后四周、造模后六周、造模后八周右眼的IOP。

1.6 免疫組化檢測(cè)

以頸椎脫臼法于造模8周后處死大鼠,立即取出眼球后,暴露視神經(jīng)并保留足夠長(zhǎng)的視神經(jīng),勿牽拉及損傷視神經(jīng),自球后1mm剪斷視神經(jīng),立即將其放入FAA液中固定48小時(shí),梯度酒精脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,切片厚4um,干燥后備用。免疫組織化學(xué)染色,詳細(xì)操作步驟如下:取已切好的石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。3%雙氧水室溫孵育10 min。蒸餾水沖洗,PBS浸泡 5min。甩去多余液體,切片上滴加10%山羊血清封閉液,室溫孵育10min,傾去血清,不洗,滴加稀釋的Bcl-2抗體、Bad抗體(均為1:100),放入冰箱內(nèi)4℃下孵育過(guò)夜。次日取出,PBS沖洗3次,每次5min。滴加生物素標(biāo)記二抗工作液,濕盒內(nèi)37℃水浴箱孵育30min,PBS沖洗3次,每次5min。滴加試劑辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液(S-A/HRP),濕盒內(nèi)37℃水浴箱孵育20min,PBS沖洗3次,每次5min。配置DAB顯色液,在顯微鏡下掌握顯色程度。蘇木素復(fù)染,自來(lái)水沖洗4min,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。顯微鏡下觀察染色結(jié)果及拍片。 陰性對(duì)照:用PBS替代一抗,其余步驟同上。結(jié)果判定:隨機(jī)選取高倍鏡(×200)下6個(gè)視野進(jìn)行觀察,Bcl-2、Bad陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色染色,共36個(gè)視野,用Mias-2000型圖形圖像分析儀測(cè)量,求取每張切片6個(gè)視野的染色面積總和、積分光密度總和、平均黑度。

1.7 電鏡下RGCs超微結(jié)構(gòu)觀察

各組隨機(jī)選定1只大鼠,處死后立即剝離眼球,3%戊二醛浸泡預(yù)固定,1%四氧化鋨再固定,丙酮逐級(jí)脫水,環(huán)氧樹(shù)脂Epon812包埋,半薄切片光學(xué)定位,超薄切片,醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙重染色,日立H-600IV型透射電鏡下觀察RGCs細(xì)胞形態(tài)、核、胞膜及細(xì)胞器等,在四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院病理電鏡室完成。

1.8 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 慢性EIOP大鼠IOP

各組大鼠組間及造模、用藥前后眼壓比較(見(jiàn)表1):

由表1可見(jiàn):造模前對(duì)照組、給藥組及模型組IOP無(wú)明顯差異(為P>0.05)；造模后即刻,對(duì)照組上升不明顯,前后比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),給藥組、模型組上升明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且與對(duì)照組差異明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；造模后八周,給藥組及模型組與造模前相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；給藥組造模后八周與造模后即刻相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),模型組造模后八周與造模后即刻相比,無(wú)明顯差異(P>0.05)。

表1 各組造模前、造模后即刻及造模后8周眼壓比較(單位:mmHg)

注：與造模前相比,△P<0.01；與對(duì)照組相比,▲P<0.01；與造模后即刻相比,☆P<0.01

2.2 補(bǔ)腎活血中藥對(duì)EIOP大鼠視網(wǎng)膜Bcl-2表達(dá)的影響(見(jiàn)表2、圖1-3)

由表2可見(jiàn):檢測(cè)指標(biāo)為總面積、積分光密度及平均黑度,如上表所示各項(xiàng)指標(biāo)中以給藥組Bcl-2表達(dá)最多,給藥組的總面積、積分光密度與對(duì)照組與模型組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；模型組總面積、積分光密度多于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；給藥組平均黑度與模型組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表2 Bcl-2在視網(wǎng)膜的表達(dá)

注：與對(duì)照組相比,▲P<0.01；與給藥組相比,★P<0.01

2.3 補(bǔ)腎活血中藥對(duì)EIOP大鼠視神經(jīng)Bad表達(dá)的影響(見(jiàn)表3,圖4-6)

由表3可見(jiàn):檢測(cè)指標(biāo)為總面積、積分光密度及平均黑度,如上表所示各項(xiàng)指標(biāo)中以模型組Bad表達(dá)最多,其總面積,積分光密度與對(duì)照組及給藥組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；給藥組的總面積、積分光密度多于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；給藥組平均黑度與模型組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.4 杞菊地黃丸和復(fù)方丹參片對(duì)慢性EIOP大鼠RGCs超微結(jié)構(gòu)的影響(圖7-9)

正常大鼠RGCs細(xì)胞核(N)呈圓形或卵圓形,核膜清晰,染色質(zhì)均勻,細(xì)胞器豐富、線(xiàn)粒體(Mi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)形態(tài)正常(圖7)。造模后RGCs損傷明顯,表現(xiàn)為細(xì)胞核(N)呈圓形或卵圓形,輪廓極不規(guī)則,核膜清晰可見(jiàn),核內(nèi)染色質(zhì)固縮,胞漿空泡化,核糖體明顯減少,殘存線(xiàn)粒體(Mi)高度膨脹、破裂,部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)擴(kuò)張,呈空泡狀(圖8)。而給予補(bǔ)精益視片后大鼠RGCs損害較模型組輕,其部分細(xì)胞核(N)呈圓形或卵圓形,形態(tài)欠規(guī)則,核膜清晰可見(jiàn),核內(nèi)染色質(zhì)呈聚集趨勢(shì),線(xiàn)粒體(Mi)輕度腫脹、變形,部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)擴(kuò)張,胞漿中細(xì)胞器種類(lèi)、數(shù)量均有減少,分布較稀疏(圖9)。

圖1 對(duì)照組Bcl-2染色(200×) 圖2 模型組Bcl-2染色(200×) 圖3 給藥組Bcl-2染色(200×)

表3 Bad在視網(wǎng)膜的表達(dá)

注：與對(duì)照組相比,▲P<0.01,△P<0.05；與給藥組相比,★P<0.01

圖4 對(duì)照組Bad染色 圖5 模型組Bad染色 圖6 給藥組Bad染色

3 討論

青光眼是眼科常見(jiàn)的不可逆的致盲性眼病。青光眼的致病特點(diǎn)就是視野缺損和視神經(jīng)損傷,發(fā)病隱匿,病因復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明了,已往青光眼的治療主要是通過(guò)藥物或者手術(shù)方式將眼內(nèi)壓控制在適當(dāng)范圍,而部分青光眼患者即使經(jīng)藥物或手術(shù)降低了眼壓,但RGCs的凋亡、視神經(jīng)的損傷仍繼續(xù)發(fā)展,甚至導(dǎo)致視力喪失[4],因此在控制眼壓的同時(shí),阻斷或降低RGCs的凋亡和增加RGCs的存活能力,已成為青光眼治療的研究方向[5-6]。國(guó)外已有實(shí)驗(yàn)證明PI3K/Akt信號(hào)通路在RGCs的凋亡過(guò)程中起到抑制作用[7],但具體作用機(jī)理仍然不清楚近年來(lái),PI3K/Akt信號(hào)通路(磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,phosphatidylinositol 3-kinase pathway/protein kinase B,PI-3K/Akt)已成為凋亡基因調(diào)控?zé)狳c(diǎn),PI3K/Akt信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)元存活的作用已經(jīng)得到許多研究的證實(shí)[ 8-10 ]。PI3K是一種胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶,普遍存在于機(jī)體內(nèi)各類(lèi)細(xì)胞中,Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是PI3K的活化物質(zhì),主要負(fù)責(zé)由PI3K始動(dòng)的生物信息的傳導(dǎo),生長(zhǎng)因子等胞外因子通過(guò)與其相應(yīng)的酪氨酸激酶受體結(jié)合后,引導(dǎo)PI3K移動(dòng)至附近的漿膜,活化的PI3K催化產(chǎn)生PI一3,4-P2和PIP3,后者誘導(dǎo)無(wú)活性的Akt和磷脂酰肌醇依賴(lài)的激酶一l(PI)K一1)轉(zhuǎn)位至漿膜內(nèi)表面,從而實(shí)現(xiàn)Akt的激活,發(fā)揮抗凋亡作用,激活后的Akt通過(guò)直接磷酸化凋亡機(jī)器組件或間接改變編碼凋亡機(jī)器組件的基因表達(dá)水平,來(lái)控制凋亡過(guò)程,如:通過(guò)磷酸化抑制前凋亡蛋白Bad的活性；Bad引起細(xì)胞凋亡,與Bcl-2和Bcl-xL在線(xiàn)粒體外膜處結(jié)合形成異源二聚體有關(guān)。D’Agata等[11]對(duì)正常的剛剛出生、生后15d及成年大鼠眼組織研究結(jié)果證明,大鼠脈絡(luò)膜叢上皮細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中均有Bad表達(dá)。吳紅色等[12]研究發(fā)現(xiàn),大鼠視神經(jīng)鉗夾傷后3d,Bad開(kāi)始高水平表達(dá),5d達(dá)到高峰,7d開(kāi)始下降,Bad高水平表達(dá)促進(jìn)了RGCs繼發(fā)性的死亡,直到傷后14d Bad表達(dá)水平明顯下降,使RGCs數(shù)目維持于穩(wěn)定狀態(tài)。Burne等[13]的研究顯示切斷軸索后,bcl-2轉(zhuǎn)基因的表達(dá)保護(hù)了視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞免于凋亡。因此說(shuō)Bad作為細(xì)胞凋亡基因的代表,Bcl-2作為細(xì)胞生存基因的代表,兩者之間表達(dá)水平的平衡結(jié)果,決定了細(xì)胞是生存還是凋亡。楊柳等[14]發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的Bcl-2能夠促進(jìn)小鼠視神經(jīng)損傷后的再生,并且再生的神經(jīng)軸突在4d后長(zhǎng)入腦內(nèi)的靶組織。

圖7 透射電鏡觀察 對(duì)照組RGCs(×12000)。細(xì)胞核(N)呈圓形或卵圓形,核膜清晰,染色質(zhì)均勻,細(xì)胞器豐富、線(xiàn)粒體(Mi)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)形態(tài)正常 圖8 透射電鏡觀察 模型組RGCs(×20000)。細(xì)胞核(N)呈圓形或卵圓形,輪廓極不規(guī)則,核膜清晰可見(jiàn),核內(nèi)染色質(zhì)固縮,胞漿空泡化,核糖體明顯減少,殘存線(xiàn)粒體(Mi)高度膨脹、破裂,部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)擴(kuò)張,呈空泡狀 圖9 透射電鏡觀察 給藥組RGCs(×20000)。部分細(xì)胞核(N)呈圓形或卵圓形,形態(tài)欠規(guī)則,核膜清晰可見(jiàn),核內(nèi)染色質(zhì)呈聚集趨勢(shì),線(xiàn)粒體(Mi)輕度腫脹、變形,部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)擴(kuò)張,胞漿中細(xì)胞器種類(lèi)、數(shù)量均有減少,分布較稀疏

青光眼是一類(lèi)以特異性視神經(jīng)損害和視野缺損為共同特征的眼病,類(lèi)似中醫(yī)“五風(fēng)內(nèi)障”及“青盲”,屬瞳神疾病,五風(fēng)內(nèi)障(青光眼)基本病機(jī)為氣血失和、玄府閉阻的中醫(yī)理論以及病久則肝腎兩虧,神光衰微甚至泯滅、不睹三光而成“青盲”(青光眼視功能損害而視神經(jīng)萎縮)的病理過(guò)程,提出肝腎虛損、脈絡(luò)瘀滯是青光眼視神經(jīng)病理改變的主要病機(jī),滋養(yǎng)肝腎、活血通絡(luò)是防治青光眼視神經(jīng)損害的基本方法,故本實(shí)驗(yàn)選取杞菊地黃丸和復(fù)方丹參片合用共奏滋補(bǔ)肝腎、活血化瘀之功,通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),來(lái)進(jìn)一步闡述補(bǔ)腎活血中藥在青光眼治療方面的作用機(jī)制,拓展臨床思路。我們的前期研顯示[15-17]杞菊地黃丸合復(fù)方丹參片可以抑制EIOP大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層(retinal nerve fiber layer,RNFL)和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(retinal ganglion cells layer,RGCL)變薄,改善RGCs超微結(jié)構(gòu),防止RGCs和RNFL損害,有助于多焦視網(wǎng)膜電圖(multifocal electroretinogram,mfERG)總波及1、2、3、4環(huán)P1波反應(yīng)密度、總波P1波峰潛時(shí)、2環(huán)及3環(huán)N1波反應(yīng)密度,3環(huán)、4環(huán)N1波峰潛時(shí)的恢復(fù),上調(diào)RGCs抗凋亡基因Bcl-2、抑制凋亡促進(jìn)基因Bax[18],并可修復(fù)初級(jí)視皮質(zhì)(primary visual cortex,PVC)及外側(cè)膝狀體(lateral geniculate nucleus,LGN)的損傷,提高EIOP大鼠PVC及LGN的BDNF表達(dá)[19-22]。臨床觀察[23]也發(fā)現(xiàn)杞菊地黃丸與復(fù)方丹參片治療眼壓控制后青光眼視功能的臨床療效良好。

本研究通過(guò)觀察補(bǔ)腎活血中藥對(duì)大鼠慢性高眼壓模型視網(wǎng)膜PI3K/AKt通路凋亡相關(guān)因子Bcl-2及Bad的干預(yù)作用及對(duì)EIOP大鼠視網(wǎng)膜RGCs超微結(jié)構(gòu)的影響,進(jìn)一步探討補(bǔ)腎活血中藥對(duì)青光眼視功能保護(hù)的作用機(jī)理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎活血中藥(杞菊地黃丸合復(fù)方丹參片)用于SD大鼠慢性EIOP模型,能降低眼壓,上調(diào)Bcl-2的表達(dá)及下調(diào)Bad的表達(dá)、改善RGCs超微結(jié)構(gòu)來(lái)抑制細(xì)胞凋亡,最終發(fā)揮對(duì)慢性高眼壓大鼠視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。杞菊地黃丸為經(jīng)典古方,為滋補(bǔ)肝腎明目的代表方劑,復(fù)方丹參片活血化瘀通絡(luò),兩者均為《中國(guó)藥典》載入藥品、非處方用藥,可作為臨床青光眼視神經(jīng)保護(hù)藥物推廣應(yīng)用。

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EffectsoftraditionalChinesemedicineofBuShenHuoXueonritinalBcl-2andBadofPI3K/AKtpathwayinratmodelofelevatedintraocularpressure

ZHANGJing1,2,LIXiang1,WANGWei3,LIUHong-ji4,LiXiang-yu4,LIHua-hong4,WANGTai4,TIANMeng-yao4,YANGFeng-jiao4

(1.DepartmentofOphthalmology,TheTeachingHospitalofChengduUniversityofTCM,Chengdu,Sichuan,610072;2.YanglingDemonstrationZoneHospital,Xianyang,Shanxi,712100 ;3.TraditionalChineseMedicineHospitalAffiliatedtoSouthwestMedicalUniversity,Luzhou,Sichuan,646000;4.ChengduUniversityofTCM,Chengdu,Sichuan,610075)

ObjectiveTo observe the effect of traditional Chinese medicine (TCM) of BuShenHuoXue on retinal BCL-2 and Bad in SD rat model of chronic elevated intraocular pressure,and explore it’s initial mechanism.MethodsThe rats were randomly divided into 3 groups:control group,model group and treatment group,10 rats in each group.The model of chronic EIOP was established by unilaterally cauterizing 3 episcleral vessels.After given TCM of BuShenHuoXue or normal saline for 8 weeks,the rats were put to death.The effect of intraocular pressure(IOP),expression of retinal BCL-2 and Bad,ultrastructure of RGCs were observed.ResultsCompared with pre-operation,IOP in treatment group and model group at model building until postoperation 8 weeks were increased(allP<0.01).There was obviously reduce in treatment group between postoperation 8 weeks and models building (P<0.01),While model group was not statistically significant(P>0.05).8 weeks after-modeling,the Immunohistochemical detection of retina showed that the treatment group’s expression on Bcl-2 was the highest,compared with the control group and modle group,there were statistically differences(allP<0.01),model group’s expression on Bad was the highest,compared with the treatment group and control group,there were statistically differences(allP<0.01).The ultrastructure of RGCs in the treatment group was significantly improved compared with model group.ConclusionTCM of BuShenHuoXue (QijuDihuang pills and DaShen tablets)can protect the visual function on the rat model of chronic EIOP.It mainly manifested as follows:up-regulated the expression of retinal Bcl-2,dwonregulated the expression of retinal Bad,reduced IOP slightly and improved the ultrastructure of RGCs.

Glaucoma; TCM of BuShenHuoXue(QijuDihuang pills and DaShen tablets); Retina; The rat model of chronic elevated intraocular pressure; Visual function protection; Bcl-2; Bad

國(guó)家自然科學(xué)基金(81373695/H2713);成都中醫(yī)大學(xué)科技發(fā)展基金(030018024)

1.610072,四川成都,成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院；2.712100,陜西咸陽(yáng),楊凌示范區(qū)醫(yī)院；3.646000,四川瀘州,西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院；4.610075,四川成都,成都中醫(yī)藥大學(xué)

李翔,E-mail:jeannelxiang@126.com

10.3969/j.issn.1674-9006.2017.04.006

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