張海濤 呂 穎

(赤峰市藥品檢驗所，內蒙古 赤峰 024050)

高效液相色譜法測定蒙藥制劑敖勒蓋-13中胡椒堿的含量

張海濤 呂 穎

(赤峰市藥品檢驗所，內蒙古 赤峰 024050)

目的：建立高效液相色譜法測定蒙藥制劑敖勒蓋-13中胡椒堿的含量。方法采用DiamonsiL C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱；以甲醇-水(77：23)為流動相；流速1.0 mL·min-1；檢測波長343 nm；柱溫為30 ℃。結果胡椒堿在4～40 μg·mL-1(r = 0.999 9)范圍內線性關系良好，平均回收率為97.94%(n = 9)，RSD為 0.62%。結論本方法簡便準確、穩(wěn)定可靠，可用于蒙藥制劑敖勒蓋-13的含量測定。

蒙藥制劑；高效液相色譜法；敖勒蓋-13；胡椒堿；含量測定

蒙藥制劑敖勒蓋-13散劑，主要由全石榴、肉桂、蘇格木勒、蓽茇、胡椒、白巨勝、光明鹽等13味藥組成，具有開郁順氣，化滯消脹的功效，蒙醫(yī)主要用于治療腹脹，腸鳴，消化不良，胃腸虛弱等。其中蓽茇、胡椒為臣藥，主要含有胡椒堿(piperine)、丁香烯(caryophylene)、胡椒酰胺(pipercide)等化學成分[1]。胡椒堿作為其主要活性成分之一，其化學結構屬于桂皮酰胺類，不僅具有抗?jié)僛2]、抗氧化[3]、免疫調節(jié)及抗腫瘤[4]的作用，而且在眾多研究中，作為生物利用度增強劑[5]的應用越來越引起人們的重視。本研究采用高效液相色譜法測定敖勒蓋-13中胡椒堿的含量，對有效控制和評價產品質量，具有重要的實際應用價值。

1 儀器與試藥

美國沃特世(Waters)高效液相色譜儀(Waters 2695泵， Waters 2487紫外檢測器，Empower色譜工作站)，島津UV-2600型紫外-可見分光光度計，瑞士Precisa型十萬分之一電子天平, 昆山舒美KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗機。

胡椒堿對照品(批號：0775-200203，供含量測定用)，由中國食品藥品檢定研究院提供；甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑為分析純；敖勒蓋-13散劑(1次1.5～3 g，1日1～2次，溫開水送服)阿魯科爾沁旗蒙醫(yī)醫(yī)院自制制劑。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備：精密稱取胡椒堿對照品約10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加無水乙醇溶解、定容、搖勻，制成約200 μg·mL-1的胡椒堿對照品儲備液。精密吸取胡椒堿對照品儲備液2.5 mL，置50 mL棕色量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備： 取敖勒蓋-13樣品約0.16g，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加入無水乙醇40 mL，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放置至室溫后，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備： 按處方比例制備不含蓽茇、胡椒的陰性樣品，按2.1.2項下方法制備操作，即得。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗： 色譜柱：DiamonsiL C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇-水(77:23)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：343 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。理論板數(shù)按胡椒堿峰計算不低于5000。分別精密吸取胡椒堿對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，在上述色譜條件下進樣測定，色譜圖見圖1。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察： 精密吸取胡椒堿對照品儲備液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置25 mL棕色量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別取上述溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄胡椒堿色譜峰面積。以胡椒堿峰面積為縱坐標(Y)，濃度為橫坐標(X)，進行線性回歸，得線性方程為Y = 7.376 × 104X - 2.336 × 103， r = 0.999 9(n = 9)。結果表明胡椒堿進樣濃度在4～40 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

2.3.2 精密度試驗：精密吸取2.1.1項下對照品溶液10 μL，按2.2項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，計算胡椒堿峰面積的RSD(n = 6)為0.40%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗： 精密吸取2.1.2項下同一供試品溶液10 μL ，分別于0，2，4，8，12，18，24 h進樣測定，測得胡椒堿峰面積的RSD(n = 7)為0.57 %。結果表明，供試品溶液在24h內穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重復性試驗：分別取同一批號(100311)樣品6份，按2.1.2項下方法制備供試品溶液，進樣測定。結果胡椒堿含量的RSD為0.37 %，表明重復性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗： 精密稱取已知含量的同一樣品9份，每份約0.08 g，精密稱定，分別置50 mL棕色量瓶中，分別加入胡椒堿對照品儲備液0.5 ，1.0 ，1.5 mL，各3份，按2.1.2項下方法制備供試品溶液，分別進樣10 μL，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗(n = 9)

2.4 樣品測定： 按上述建立好的方法對敖勒蓋-13制劑進行含量測定。結果見表2。代表性樣品色譜圖見圖1(B)。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

3 小結與討論

本實驗通過對流動相、檢測波長、樣品超聲提取時間等條件的篩選，建立了敖勒蓋-13中胡椒堿含量的測定方法，比較了流動相甲醇-水[6]不同比例(60:40；70:30；75:25；77:23；80:20；90:10)等度洗脫時色譜峰的分離效果，結果甲醇-水的比例為77:23 時，所得色譜圖基線平直，各組分之間可以得到較好分離，峰形良好，保留時間適宜；對胡椒堿對照品溶液在200～700 nm波長范圍內掃描，胡椒堿在343 nm波長處有最大吸收，故選擇343 nm為檢測波長；分別考察了樣品超聲處理20 min、30 min和40 min的提取量，結果表明超聲處理20 min時提取不完全，30 min與40min的提取量無明顯變化，故選擇30 min作為超聲處理時間。

根據(jù)胡椒堿的光穩(wěn)定性研究，避光條件下更有利于胡椒堿的穩(wěn)定和保存[7]，故在實驗操作中使用棕色量瓶，以避免其由于分解而影響結果準確性。

本實驗建立的HPLC測定蒙藥制劑敖勒蓋-13中胡椒堿含量的方法操作簡單，靈敏度高，重現(xiàn)性好，結果準確，適用于敖勒蓋-13蒙藥制劑的質量控制。

[1]國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草. 蒙藥卷 [M]. 上海：上?？茖W技術出版社，2004：274-275.

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HPLCDeterminationofPiperineinMongolianMedicinePreparationAoLeGai-13

ZHANG Hai-tao,LV Ying

Chifeng Institute for Drug Control， Chifeng 024050，Inner Mongolia，China

Objective：To establish? a method for the determination of piperine in mongolian medicine preparation Ao Le Gai-13. Methods：A DiamonsiL-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column was used with the mobile phase being chromatographic methanol-water(77:23), flow rate being 1.0 mL·min-1 ,detecting wavelength being 343 nm, the column temperature being 30℃. Results：The linear response range from 4-40 μg·mL-1(r = 0.999 9，n = 6)of piperine；the average recoveries(n = 9)of the method was 97.94% with RSD 0.62%. Conclusion：The method is simple，accurate，reproducible and stable，and can be used for the quality control of mongolian medicine preparation Ao Le Gai-13.

mongolian medicine preparation；HPLC；Ao Le Gai-13；piperine；determination

張海濤，男(1978-)，碩士，副主任藥師，赤峰市藥品檢驗所業(yè)務室主任，主要從事藥品、食品、保健品、化妝品、醫(yī)療器械及藥包材等項目的檢驗、質量標準的制訂及相關科研工作。E-mail：zhanghaitao.2001@163.com

R291.2

B

1006-6810(2017)05-0042-03

2017年1月23日收稿