李黎洪，陳智偉，陳昱，吳麗婷

(莆田學(xué)院附屬醫(yī)院，福建莆田 351100)

三陰性乳腺癌組織中Stathmin、p53蛋白表達(dá)變化及意義

李黎洪，陳智偉，陳昱，吳麗婷

(莆田學(xué)院附屬醫(yī)院，福建莆田 351100)

目的觀察Stathmin和p53蛋白在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法分別檢測(cè)106例三陰性乳腺癌組織(觀察組)及42例非三陰性乳腺癌組織(對(duì)照組)中Stathmin和p53蛋白表達(dá)，Stathmin和p53蛋白表達(dá)間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。結(jié)果觀察組及對(duì)照組癌組織中Stathmin蛋白表達(dá)陽性率分別為83.02%(88/106)、35.71%(15/42)，p53蛋白表達(dá)陽性率分別為59.43%(63/106)、11.90%(5/42)，兩組乳腺癌組織中Stathmin和p53蛋白表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為31.81、23.76，P均lt;0.05)。Stathmin和p53蛋白在腫瘤TNM分期及有無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均lt;0.05)，而與患者年齡、腫瘤大小及組織學(xué)類型均無關(guān)(P均gt;0.05)；Stathmin與組織學(xué)分級(jí)無關(guān)(χ2=2.97，P=0.23)，而p53與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(χ2=9.49，P=0.00)；Stathmin與p53蛋白陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.24，P=0.01)。結(jié)論Stathmin和p53蛋白在三陰性乳腺癌組織中呈高表達(dá)，二者可能在三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮協(xié)同作用。

三陰性乳腺癌；Stathmin蛋白；p53蛋白；免疫組化

我國(guó)乳腺癌近年發(fā)病率為24.86/10萬，呈上升趨勢(shì)及年輕化特點(diǎn)[1]。乳腺癌在形態(tài)學(xué)與臨床治療反應(yīng)上具有異質(zhì)性，可分為管腔型A、管腔型B、正常乳腺樣型、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)過表達(dá)型和基底樣癌型。其中基底樣乳腺癌免疫組化法多以雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和Her-2均陰性表達(dá)為特征，因此被稱為三陰性乳腺癌[2]。三陰性乳腺癌組織分化程度較低，增殖速度快、浸潤(rùn)性強(qiáng)，早期即可出現(xiàn)他處轉(zhuǎn)移，由于不宜行內(nèi)分泌治療卻又缺乏有效的針對(duì)性靶向治療措施，故臨床預(yù)后差[3]。Stathmin在人類多種腫瘤中過表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞高度惡性、增殖快、易侵襲遠(yuǎn)處器官相關(guān)[5]。Stathmin在乳腺癌細(xì)胞系中的高表達(dá)已有報(bào)道，Stathmin低表達(dá)與微管穩(wěn)定性和乳腺癌良好的預(yù)后相關(guān)[6]。p53是重要的抑癌基因，與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[4]。p53能否作為三陰性乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立因素，目前國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道尚有爭(zhēng)議，而且聯(lián)合檢測(cè)Stathmin及p53蛋白在三陰性乳腺癌中的表達(dá)情況尚未見報(bào)道。2013年1月～2016年12月，我們應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)了三陰性乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達(dá)，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年1月～2016年12月于莆田學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷為三陰性乳腺癌標(biāo)本106例份(觀察組)，患者均為女性，年齡26～73歲，中位年齡46歲，≤45歲者44例，gt;45歲者62例。患者術(shù)前均未經(jīng)放療、化療、內(nèi)分泌及其他任何針對(duì)腫瘤的治療。腫瘤直徑1.0～10.0 cm，其中l(wèi)t;2 cm者31例，2～5 cm者52例，≥5 cm者23例；組織病理學(xué)類型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌79例，浸潤(rùn)性小葉癌22例，黏液癌2例，神經(jīng)內(nèi)分泌癌1例，髓樣癌1例，大汗腺癌1例；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)34例，Ⅱ級(jí)52例，Ⅲ級(jí)20例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期43例，Ⅲ+Ⅳ期63例；有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移65例，無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。同時(shí)選取經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷為非三陰性乳腺癌組織42例份作為對(duì)照組，均為女性，年齡17～69歲，中位年齡44歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達(dá)檢測(cè) 取出兩組存檔的石蠟組織塊，切片、HE染色等常規(guī)處理后，采用EnVision免疫組化二步法對(duì)兩組樣本中的Stathmin、p53蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。Stathmin抗體和p53抗體稀釋度均為1∶200。用已知Stathmin、p53陽性組織切片和磷酸鹽緩沖液分別代替一抗做陰性對(duì)照。由兩位主治級(jí)別以上的病理醫(yī)生對(duì)切片染色結(jié)果采用雙盲法分別獨(dú)立觀察并打分。Stathmin蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，以呈現(xiàn)出清晰的棕黃(褐)色顆粒沉積為陽性表達(dá)。p53定位于胞核內(nèi)，以呈現(xiàn)出明顯的棕黃(褐)色顆粒沉積為陽性表達(dá)。結(jié)合染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞百分比綜合判斷。染色結(jié)果行半定量分析：在高倍(×400)鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)不重復(fù)視野陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)選定區(qū)域中染色陽性腫瘤細(xì)胞與總體腫瘤細(xì)胞的百分比，按染色陽性細(xì)胞百分率評(píng)分，lt;5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，≥50%為3分；按染色強(qiáng)度計(jì)分：細(xì)胞無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；將染色計(jì)數(shù)得分與染色強(qiáng)度得分相加，0分為陰性，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中等陽性(++)，4分以上為強(qiáng)陽性(+++)。+～+++均代表陽性表達(dá)，以上結(jié)果由病理科醫(yī)生盲法獨(dú)立完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。對(duì)計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，Stathmin、p53蛋白表達(dá)間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組乳腺癌組織中Stathmin和p53蛋白表達(dá)比較 Stathmin和p53蛋白在兩組乳腺癌組織中均有不同程度表達(dá)，觀察組Stathmin蛋白表達(dá)呈+、++、+++各為3、35、50例,p53蛋白表達(dá)呈+、++、+++各為11、25、27例；對(duì)照組Stathmin蛋白表達(dá)呈+、++、+++各為3、10、2例,p53蛋白表達(dá)呈+、++、+++各為0、3、2例。觀察組及對(duì)照組癌組織中Stathmin蛋白表達(dá)陽性率分別為83.02%(88/106)、35.71%(15/42)，p53蛋白表達(dá)陽性率分別為59.43%(63/106)、11.90%(5/42)，兩組乳腺癌組織中Stathmin和p53蛋白表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為31.81、23.76，P均lt;0.05)。

2.2 Stathmin和p53蛋白表達(dá)與三陰性乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 見表1。Stathmin和p53蛋白表達(dá)在三陰性乳腺癌TNM分期及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均lt;0.05)；在患者年齡、腫瘤大小及組織學(xué)分型方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均gt;0.05)；不同的組織學(xué)分級(jí)中，Stathmin表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=2.97，P=0.23)，而p53表達(dá)卻存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=9.49，P=0.00)。

表1 Stathmin和p53蛋白表達(dá)與三陰性乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 三陰性乳腺癌組織中Stathmin與p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 Stathmin蛋白表達(dá)陽性88例，其中p53蛋白表達(dá)陽性57例；Stathmin蛋白表達(dá)陰性18例，其中p53蛋白表達(dá)陽性6例；Stathmin與p53蛋白在106例三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.24，P=0.01)。

3 討論

三陰性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展受多種因素的調(diào)節(jié)，與原癌基因激活及抑癌基因失活密切相關(guān)。Stathmin是一種高度保守的細(xì)胞質(zhì)蛋白，通過被蛋白激酶磷酸化影響微管形成及細(xì)胞有絲分裂過程，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，從而影響細(xì)胞的增殖、分化及功能[7]。阻斷Stathmin可使細(xì)胞分裂停止于G2/M期，抑制細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)，Stathmin在急性淋巴細(xì)胞白血病、人成骨肉瘤、喉磷狀細(xì)胞癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞中存在高表達(dá)，Stathmin參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[6～9]。p53基因位于人染色體17p13.3l，與細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡、DNA修復(fù)等相關(guān)。正常的p53蛋白能抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，正常p53不易被檢測(cè)到，當(dāng)p53發(fā)生突變后，失去了抑癌功能，并誘導(dǎo)正常細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時(shí)阻礙其他野生型p53發(fā)揮其功能，最終促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、演進(jìn)及轉(zhuǎn)移[5]。p53與癌癥患者的不良預(yù)后密切相關(guān)[10]。

本研究發(fā)現(xiàn)，與非三陰性乳腺癌組織相比，三陰性乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明Stathmin及p53與乳腺癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)。該結(jié)果與國(guó)外類似研究一致[11,12]。進(jìn)一步分析顯示，在TNM分期不同的條件下，與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌組織中Stathmin及p53蛋白表達(dá)水平更高，且呈遞升式演變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此與國(guó)外類似研究基本一致[13]。說明Stathmin及p53可能與三陰性乳腺癌的發(fā)生、病情進(jìn)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，二者有望成為三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中的重要標(biāo)志物。Masciarelli等[14]體外研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤細(xì)胞株中，p53突變能通過結(jié)合啟動(dòng)子，阻礙其轉(zhuǎn)錄功能下調(diào)miR-223的表達(dá)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Stathmin與p53蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，表明p53對(duì)Stathmin蛋白表達(dá)具有促進(jìn)或失去“監(jiān)控”作用，側(cè)面證實(shí)了正常的p53對(duì)Stathmin表達(dá)可能存在正性調(diào)控作用及二者之間的互相關(guān)系。此與Masciarelli等[14]的結(jié)果基本一致，提示Stathmin可能是體內(nèi)正常p53作用的靶基因，二者聯(lián)合檢測(cè)可作為三陰性乳腺癌進(jìn)展及轉(zhuǎn)移評(píng)估的重要指標(biāo)。同時(shí)，若能通過抑制p53及Stathmin蛋白在腫瘤中的表達(dá)，可為三陰性乳腺癌的治療提供新的靶點(diǎn)。本研究結(jié)果還顯示，p53與組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)，三陰性乳腺癌組織學(xué)分級(jí)越高、分化越差、預(yù)后越差，突顯了其在乳腺癌演進(jìn)過程中扮演重要角色。p53高表達(dá)率提示三陰性乳腺癌預(yù)后不良，檢測(cè)三陰性乳腺癌中p53表達(dá)可作為指導(dǎo)臨床診治及判斷預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

綜上所述，Stathmin和p53蛋白在三陰性乳腺癌組織中呈過表達(dá)，二者可能在三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。但本研究為回顧性研究，不足之處在于選取的病理樣本為近年來診斷的三陰性乳腺癌病例，不僅病例樣本較少且未做進(jìn)一步的病例隨訪及生存率分析。

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