鄭麗，侯彩云,*，任發(fā)政

1. 北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心，食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京100083；2. 食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室，食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京100083

白茶壽眉預(yù)防小鼠肥胖作用研究及安全性評(píng)價(jià)

鄭麗1，侯彩云1,2*，任發(fā)政2

1. 北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心，食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京100083；2. 食品質(zhì)量與安全北京實(shí)驗(yàn)室，食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，北京100083

取1、3、7年壽眉（白茶）制備白茶提取物（White tea extracts, WTEs）。在對(duì)雄性C57BL/6J小鼠喂飼高脂飼料的同時(shí)給予WTEs干預(yù)，誘導(dǎo)建立預(yù)肥胖模型。觀察小鼠體質(zhì)量增量、攝食量、脂肪和肝臟組織病理學(xué)變化，統(tǒng)計(jì)脂肪濕重，測(cè)定血脂及血轉(zhuǎn)氨酶水平。qPCR測(cè)定小鼠肝臟中脂代謝相關(guān)基因表達(dá)。綜合評(píng)價(jià)WTEs預(yù)防小鼠肥胖功效及其安全性，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探究。結(jié)果顯示，WTEs在無(wú)肝毒性和生長(zhǎng)抑制作用條件下，能抑制脂肪細(xì)胞分化和脂肪的過(guò)度積累，還能下調(diào)SREBP-1c、FAS和ACC1的轉(zhuǎn)錄水平，抑制肝臟脂肪酸合成和脂肪過(guò)度積累，有效預(yù)防肥胖和脂肪肝的發(fā)生。高劑量下，WTEs預(yù)防肥胖功效隨白茶年份的增加而顯著降低。

白茶；預(yù)防肥胖；安全性

六大茶類中，白茶為中國(guó)特有，是以特定茶樹(shù)品種的鮮葉為原料，經(jīng)萎凋、干燥等工藝制成的產(chǎn)品。其制法不揉不炒，既不破壞酶的活性，也不促進(jìn)酶促氧化過(guò)程[1-2]。白茶是所有茶類中自由基含量最低的茶[3]，被認(rèn)為是最原始、最自然健康的茶。另外，白茶儲(chǔ)藏價(jià)值較高，坊間流傳其年份越久，保健功效越強(qiáng)，有“一年茶、三年藥、七年寶”的說(shuō)法，并且盛傳其具有解油膩、降脂減肥等保健作用。相關(guān)體內(nèi)及臨床實(shí)驗(yàn)的科學(xué)文獻(xiàn)少有報(bào)道。

在現(xiàn)階段，白茶預(yù)防肥胖功效研究主要集中在體外實(shí)驗(yàn)，缺乏體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的支持。本研究通過(guò)高脂飼料誘導(dǎo)建立小鼠預(yù)肥胖模型，對(duì)比研究 1年白茶的提取物（WTE-1Y）、3年白茶的提取物（WTE-3Y）和7年白茶的提取物（WTE-7Y）預(yù)防肥胖的功效，并對(duì)其劑量安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，同時(shí)采用 qPCR技術(shù)對(duì)小鼠肝臟脂代謝相關(guān)基因進(jìn)行定量，研究白茶提取物預(yù)防肥胖的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與動(dòng)物

選取市售2015年一級(jí)壽眉白茶餅（制于2015年8月16日）、2013年一級(jí)壽眉白茶餅（制于2013年8月22日）和2009年一級(jí)壽眉白茶餅（制于2009年8月22日）作為白茶樣品。這些白茶樣品均制于福建省福鼎市白琳鎮(zhèn)，購(gòu)于福建裕榮香茶業(yè)有限公司。奧利司他膠囊（Orlistat）購(gòu)于重慶華森制藥有限公司。

雄性 C57BL/6J小鼠，繁殖飼料 1032，60kcal%高脂飼料H10060，購(gòu)于北京華富康生物科技股份有限公司。

1.1.2 試劑

DEPC水購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；DEPC購(gòu)自美國(guó)sigma公司；Trizol試劑購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；異丙醇、氯仿、無(wú)水乙醇購(gòu)自北京化工廠，均為分析純；反轉(zhuǎn)錄試劑盒5X All-In-One RT MasterMix，實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒EvaGreen 2X qPCR MasterMix-No Dye購(gòu)自美國(guó)abm公司；小鼠GAPDH內(nèi)參引物購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司.

1.1.3 儀器設(shè)備

分析天平FA2004、中藥超細(xì)粉碎機(jī)MBF-02B、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG-9070A、電熱恒溫水浴鍋 W201B、循環(huán)水真空泵SHB-III(A)、真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52AA、真空冷凍干燥機(jī)、紫外分光光度計(jì)TU1810。

1.2 方法

1.2.1 白茶提取物制備及理化成分測(cè)定

將樣品粉碎，并過(guò)40目篩備用，精確稱取粉碎茶樣，按 1∶15的茶水比，95℃水浴浸提 30 min，過(guò)濾，浸提兩次，合并茶湯冷卻至50～60℃后，58℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，真空冷凍干燥得到白茶提取物（WTEs），包括WTE-1Y、WTE-3Y和WTE-7Y。密封包裝，－20℃保存?zhèn)溆?，并測(cè)定其茶多酚[4]、咖啡堿[5]和總黃酮[6]含量。

1.2.2 劑量設(shè)計(jì)

茶葉人體推薦劑量為 60 kg成人每日 9.0 g，即0.15 g·kg-1[7]。參照保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序與檢驗(yàn)方法規(guī)范，選擇人體推薦量的 5、10倍為小鼠的低、高茶葉攝入劑量，分別為0.75 g·kg-1、1.5 g·kg-1。選擇減肥藥 Orlistat為陽(yáng)性對(duì)照，Orlistat成人推薦劑量為一次1粒，即120 mg，以成人標(biāo)準(zhǔn)體重計(jì)算其推薦攝入劑量為2 mg·kg-1，按黃繼漢等[8]的動(dòng)物劑量折算表得，小鼠Orlistat攝入劑量為25 mg·kg-1。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì)

遵循實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物管理和使用指南[9]。選取SPF級(jí)健康的6周齡雄性C57BL/6J小鼠115只，首先于標(biāo)準(zhǔn)條件動(dòng)物房（溫度23℃±2℃，濕度 50%±5%，壓差 20～50 Pa，12 h/12 h光暗循環(huán)）適應(yīng)性喂養(yǎng) 7 d。自由攝食和飲水。然后按照體重隨機(jī)分為9組，如表1所示。除給予NC組普通繁殖飼料外，PC、HC和WTEs組均給予 60%高脂飼料。按照 0.02 mL·g-1的灌胃量[10]，NC組和HC組以蒸餾水灌胃，PC組以O(shè)rlistat液灌胃，其余干預(yù)組以相當(dāng)于茶葉劑量的WTEs溶液灌胃，灌胃時(shí)間固定為每天的20∶00。

表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組Table 1 Test animals and groups

1.2.4 常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)

每周測(cè)量體質(zhì)量和攝食量，并按照繁殖飼料 14.567 kJ·g-1和高脂飼料 21.934 kJ·g-1計(jì)算各組的總能量攝入量。實(shí)驗(yàn) 8周結(jié)束后，準(zhǔn)確稱量附睪脂肪、腎周脂肪及皮下脂肪組織濕重。

1.2.5 生化指標(biāo)檢測(cè)

血樣在 4℃、5 000 r·min-1離心 15 min，分離血清樣本，–80℃保存?zhèn)溆?。全自?dòng)生化分析儀測(cè)定血清總膽固醇（Total cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglyceride, TG）、高密度脂蛋白-膽固醇（High density lipoprotein cholesterol, HDL-C）、低密度脂蛋白-膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine transaminase,ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase,AST）水平，按試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行測(cè)定。

1.2.6 組織形態(tài)學(xué)觀察

取肝臟同葉、皮下脂肪組織各約0.5 cm3，迅速置于組織固定液中固定48 h，常規(guī)石蠟包埋，切片，Hamp;E染色，顯微鏡觀察肝臟組織的脂肪沉積情況，觀察脂肪細(xì)胞形態(tài)及其脂肪積累情況，應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件于200倍視野下統(tǒng)計(jì)皮下脂肪細(xì)胞直徑。

1.2.7 肝臟脂代謝相關(guān)基因表達(dá)水平的測(cè)定

Trizol試劑抽提小鼠肝臟總 RNA，檢測(cè)RNA濃度及 OD260/OD280值，反轉(zhuǎn)錄制備cDNA 第一鏈，熒光定量采用 20 μL體系，EvaGreen 2X qPCR MasterMix-No Dye10μL，cDNA 模板 1 μL，上游引物（10 nmol·L-1）0.6 μL，下游引物（10 nmol·L-1）0.6 μL，ddH2O補(bǔ)充至20 μL。按照梯度程序：95℃、10min，95℃、15 s，60℃、60 s，循環(huán) 35次。以 GAPDH為內(nèi)參基因，采用delta delta Ct法[11]對(duì)各脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平進(jìn)行分析。

腺苷酸活化的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase alpha 2, AMPK-α2）、脂肪細(xì)胞決定與分化因子-1（Adipocyte differentiation and determination factor 1, SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase, FAS）、乙酰輔酶-A羧化酶1（Acetyl-Coenzyme A carboxylase 1, ACC1）、B類清道夫受體 I（Scavenger receptor class B, member 1, SR-BI）、肝臟腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor alpha,TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（Interleukin 6, IL-6）基因引物由Primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)，引物序列如表2所示，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用 SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示；方差分析采用LSD或 Tamhane’s T2(M)方法檢測(cè)，P＜0.05 定義為差異顯著。圖像采用Origin 8.0進(jìn)行繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 WTEs主要功效成分

3個(gè)年份的白茶提取物中茶多酚、咖啡堿和總黃酮含量如表3所示。從表中可以看出，3個(gè)年份的白茶提取物中茶多酚含量存在顯著性差異（P＜0.01），且以WTE-1Y的茶多酚含量最高，WTE-7Y次之，WTE-3Y最低。WTE-7Y的總黃酮含量顯著高于其他兩個(gè)年份的樣品，WTE-1Y中總黃酮含量次之，WTE-3Y最低。WTEs中茶多酚和黃酮含量隨白茶年份增加并未表現(xiàn)出規(guī)律的變化。3個(gè)年份的白茶提取物中，咖啡堿含量無(wú)顯著性差異。

表2 引物序列Table 2 Primer sequences

表3 WTEs主要功效成分含量Table 3 Contents of main efficacy components of white tea extract mg·g-1

2.2 WTEs對(duì)小鼠攝食和體質(zhì)量的影響

WTEs對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響結(jié)果如圖1所示。實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠體質(zhì)量均呈穩(wěn)定增長(zhǎng)趨勢(shì)（圖 1-A）。8周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，HC組小鼠體質(zhì)量（30.1 g）高出 NC 組（22.7 g）32.60%，并顯著高于 WTEs干預(yù)的各組小鼠體質(zhì)量（24.3～26.2 g），成功建立小鼠預(yù)肥胖模型。

由圖1-C可知，WTEs干預(yù)對(duì)小鼠食欲無(wú)影響，這導(dǎo)致高脂飲食各組小鼠的總能量攝入量顯著高于 NC組（圖 1-D）。其中，WTEs組與 HC組無(wú)顯著差異。但由圖 1-B可知，WTEs組小鼠體質(zhì)量增量均顯著低于HC組，且1L、1H、3H和7L組小鼠甚至與NC組無(wú)顯著性差異。由此可見(jiàn)，本研究所設(shè)劑量范圍內(nèi)，WTEs在不產(chǎn)生生長(zhǎng)抑制作用的前提下，可有效預(yù)防高脂飲食引起的肥胖的發(fā)生。

已知Orlistat屬脂肪酶抑制劑，可通過(guò)阻斷胃腸道對(duì)膳食脂肪的吸收，減少能量攝入。由圖 1-C可知，Orlistat對(duì)小鼠食欲存在抑制作用，但其總能量攝入量與HC組并無(wú)顯著性差異，使得PC組小鼠體質(zhì)量增量與HC組無(wú)顯著差異，并顯著高于NC組（圖1-B）。由此可見(jiàn)，Orlistat雖能抑制膳食脂肪吸收，但不能有效預(yù)防高脂飲食引起的肥胖發(fā)生。WTEs組和PC組總能量攝入量無(wú)顯著差異，但WTEs組小鼠體質(zhì)量增量均低于PC組，其中 1L、1H、3H、7L組達(dá)到顯著性水平。從側(cè)面證明WTEs很有可能具有比Orlistat更有效的抑制胃腸道消化吸收脂肪的效果。

值得注意的是，高劑量干預(yù)組（1H、3H、7H）中，小鼠體質(zhì)量增量隨著白茶年份增加而顯著增加（P＜0.01），即高劑量條件下，WTEs預(yù)防肥胖功效隨白茶年份增加而呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。WTE-1Y和WTE-3Y干預(yù)組中，高劑量組（1H、3H）體質(zhì)量增量分別顯著低于其相應(yīng)的低劑量組（1L、3L），而7H組小鼠體質(zhì)量增量卻顯著高于 7L組。推測(cè)年份較短的白茶可劑量依賴性預(yù)防肥胖發(fā)生，而年份較長(zhǎng)的白茶也能預(yù)防肥胖發(fā)生，但不具劑量依賴性。這可能是7年壽眉白茶在儲(chǔ)藏過(guò)程中，某些生物活性成分發(fā)生了相互作用和轉(zhuǎn)化，使其預(yù)防肥胖機(jī)制發(fā)生改變，具體原因有待進(jìn)一步研究。

圖1 WTEs對(duì)小鼠攝食和體質(zhì)量的影響Fig. 1 Effects of white tea extracts on food intake and body weight of mice

2.3 WTEs對(duì)小鼠脂肪組織的影響

由圖2-A可知，高脂飲食導(dǎo)致HC組小鼠脂肪濕質(zhì)量顯著升高，比NC組高出192%，WTEs干預(yù)可有效抑制脂肪濕質(zhì)量的升高，從1L到7H，對(duì)高脂飲食引起的脂肪濕質(zhì)量的升高可分別降低 43.48%、56.91%、46.03%、56.14%、51.62%和 52.27%，各組之間無(wú)顯著性差異。

統(tǒng)計(jì)脂肪細(xì)胞直徑發(fā)現(xiàn)，HC組和PC組小鼠脂肪直徑顯著高于 NC組，WTEs與NC組均無(wú)顯著性差異（圖2-B）。從皮下脂肪組織的Hamp;E染色結(jié)果（圖3）可知，NC組小鼠脂肪細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列整齊致密；HC組小鼠脂肪細(xì)胞大小不一，呈無(wú)序狀排列，細(xì)胞出現(xiàn)充脂和體積增大，呈現(xiàn)不同程度的分化；WTEs干預(yù)使小鼠的脂肪細(xì)胞狀態(tài)接近于 NC組，而PC組與HC組接近。由此可見(jiàn)，WTEs可有效抑制高脂飲食引起脂肪細(xì)胞分化，抑制脂肪積累，進(jìn)而達(dá)到預(yù)防肥胖的作用。

圖2 WTEs對(duì)小鼠脂肪組織的影響Fig. 2 Effects of white tea extracts on adipose tissues

2.4 WTEs對(duì)小鼠肝臟組織的影響

解剖過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，NC組小鼠的肝臟呈暗紅色，形態(tài)規(guī)則，切面有顆粒感，邊緣銳利。HC組和PC組小鼠的肝臟顏色發(fā)黃，無(wú)光澤，切面有油膩感。WTEs各組小鼠肝臟形態(tài)與NC組較為一致。

肝臟組織Hamp;E染色結(jié)果如圖4所示，NC組小鼠肝細(xì)胞大小均勻，排列整齊，肝竇清晰，肝索排列整齊有序，細(xì)胞核清晰可見(jiàn)，胞漿均勻，未見(jiàn)脂滴。HC組小鼠肝細(xì)胞大小不勻，肝竇明顯縮小，甚至消失不見(jiàn)，肝索排列混亂無(wú)序，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂肪滴。PC組小鼠肝臟狀況與 HC組相似，可見(jiàn)大量脂滴空泡。WTEs與NC組相似，未見(jiàn)脂滴出現(xiàn)。由此可見(jiàn)，WTEs可有效抑制高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟脂肪過(guò)度積累，從而預(yù)防脂肪肝的發(fā)生。

2.5 WTEs對(duì)小鼠血脂的影響

由圖5可知，高脂飲食使小鼠血清TC和LDL-C水平顯著升高，WTEs對(duì)其升高未產(chǎn)生顯著抑制作用；各組間TG水平無(wú)顯著變化，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同。值得注意的是，高脂飲食使小鼠血清HDL-C水平也顯著升高。研究發(fā)現(xiàn)，WTEs各組小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平均無(wú)顯著變化（表4），肝臟中炎癥因子TNF-α和IL-6轉(zhuǎn)錄水平也無(wú)顯著性升高（圖 6-A、6-B）。另外，WTEs各組小鼠肝臟SR-BI表達(dá)水平不減反增，且較 NC組均達(dá)顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。故 WTEs組小鼠肝臟既未出現(xiàn)急性炎癥或脂肪肝，HDL受體表達(dá)也未受到抑制。故HDL-C水平升高為代償性升高，以清除高脂飲食誘導(dǎo)的高水平血膽固醇，來(lái)維持循環(huán)系統(tǒng)的膽固醇平衡。

2.6 WTEs對(duì)小鼠脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

由圖 7可知。高脂飲食使小鼠肝臟AMPK-α2轉(zhuǎn)錄水平降低16%，與HC組相比，WTEs干預(yù)可使 AMPK-α2轉(zhuǎn)錄水平升高0.21%～0.53%，但未表現(xiàn)出顯著性差異（圖7-A）。高脂飲食還可顯著上調(diào) SREBP-1c轉(zhuǎn)錄水平，HC和PC組SREBP-1c轉(zhuǎn)錄水平分別為NC組的1.62和1.45倍。WTEs干預(yù)顯著降低SREBP-1c表達(dá)，從1L到7H，與HC組相比，各組 SREBP-1c轉(zhuǎn)錄水平分別降低36%、40%、21%、25%、10%和14%，WTEs各組之間無(wú)顯著性差異。另外，高脂飲食可誘導(dǎo) FAS和 ACC1表達(dá)水平分別上調(diào) 50%和40%，WTEs干預(yù)使FAS和ACC1基因表達(dá)水平顯著降低。從1L到7H，與HC組相比，各組FAS轉(zhuǎn)錄水平分別降低31%、38%、30%、36%、39%和31%，ACC1分別降低25%、37%、23%、33%、24%和 24%。由此可見(jiàn)，WTEs可通過(guò)下調(diào)SREBP-1c、FAS和ACC1轉(zhuǎn)錄水平，從而抑制肝臟脂肪酸合成和脂肪積累，進(jìn)而預(yù)防肥胖和脂肪肝的發(fā)生。

圖3 小鼠皮下脂肪組織病理學(xué)變化Fig. 3 Histopathology of subcutaneous adipose tissues in mice

圖4 小鼠肝臟組織病理學(xué)變化Fig. 4 Histopathology of liver tissues in mice

圖5 WTEs對(duì)小鼠血脂的影響Fig. 5 Effects of white tea extracts on the levels of serum lipids

表4 小鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平Table 4 The serum AST and ALT levels of mice U·L-1

圖6 WTEs對(duì)小鼠肝臟TNF-α、IL-6和SR-BI轉(zhuǎn)錄水平的影響Fig. 6 Effects of white tea extracts on the transcription levels of TNF-α, IL-6 and SR-BI in livers

圖7 WTEs對(duì)小鼠肝臟AMPK-α2、SREBP-1c、FAS和ACC1轉(zhuǎn)錄水平的影響Fig. 7 Effects of white tea extracts on the transcription levels of AMPK-α2, SREBP-1c, FAS and ACC1 in livers

3 討論

肥胖是人體攝入能量超過(guò)機(jī)體所需，多余的能量以脂肪形式貯存于皮下組織及內(nèi)臟器官周圍，尤其是下腹部與臀部，從而損害身體健康的疾病[12]。體質(zhì)量超過(guò)正常人標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量的10%～19%者為超重，超過(guò)20%者則為肥胖。對(duì)于肥胖，應(yīng)堅(jiān)持以預(yù)防為主。本研究模擬高脂飲食結(jié)構(gòu)，以 60%高脂飼料飼喂C57BL/6J小鼠，最終使 HC組小鼠體質(zhì)量高出NC組32.49%，成功建立預(yù)肥胖模型。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高劑量條件下，WTEs預(yù)防肥胖功效隨白茶年份的增加而降低。其中，茶多酚含量最高的 WTE-1Y對(duì)肥胖的預(yù)防效果最好，而總黃酮含量最高的 WTE-7Y并未表現(xiàn)出最好的預(yù)防肥胖的功效。事實(shí)上，茶葉中部分黃酮類化合物如黃酮及黃酮醇類、黃烷-3-醇衍生物（兒茶素類）、花色素類等均屬于茶多酚，兩者功效相輔相成，又相互獨(dú)立，是茶葉中降脂減肥功效物質(zhì)的主體。茶葉中黃酮多以糖苷形式存在，以黃酮醇苷為主[13]。茶多酚和黃酮雖為同源，但預(yù)防肥胖效果仍存在差異，由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，茶多酚含量最高的 WTE-1Y效果高于總黃酮含量最高的WTE-7Y。另外，茶多酚和黃酮含量均最低的 WTE-3Y預(yù)防肥胖效果要高于 WTE-7Y，由此可見(jiàn)，除上述常見(jiàn)功效成分外，白茶中還存在其他影響脂代謝的功效成分。Gondoin等[14]就發(fā)現(xiàn)木麻黃素及其衍生物在低濃度時(shí)可高效抑制脂肪酶活性。除此之外，茶多酚和咖啡堿、茶多酚之間的協(xié)同作用也對(duì)其預(yù)防肥胖作用的發(fā)揮至關(guān)重要[15-16]。另外，本實(shí)驗(yàn)測(cè)得WTE-1Y中茶多酚含量最高，WTE-7Y中黃酮含量最高，這與已有的關(guān)于白茶提取物的主要功效成分隨年份的變化規(guī)律較為一致；但WTE-3Y中茶多酚和總黃酮含量均最低。推測(cè)本實(shí)驗(yàn)所選的3年壽眉白茶可能存在品質(zhì)問(wèn)題，這可能與2013年原料采摘期天氣、溫度變化等客觀因素有關(guān)。另外，3個(gè)年份白茶的提取物中，咖啡堿含量無(wú)顯著性差異，這與咖啡堿穩(wěn)定的嘌呤堿雜環(huán)化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)使其含量在短期儲(chǔ)藏條件下變化不大。

另外，本研究中WTEs未能抑制高脂飲食誘導(dǎo)的血清 TC和 LDL-C升高，并且實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，TG水平無(wú)顯著性變化。事實(shí)上，C57BL/6J小鼠對(duì)高脂飼料比較敏感，容易形成高脂血癥。有研究顯示，9周齡 C57BL/6J小鼠在高脂飲食第 3～11周內(nèi)，其血清 TC和LDL-C水平穩(wěn)定為正常小鼠的2.4倍和6.2倍，而TG水平在實(shí)驗(yàn)期間無(wú)顯著變化[17]。Nishiumi等[18]發(fā)現(xiàn)，7周綠茶干預(yù)不能抑制高脂飲食誘導(dǎo)的血脂水平升高，而14周綠茶干預(yù)可顯著抑制血脂水平升高，且實(shí)驗(yàn)期間，高脂飲食小鼠血清TG水平無(wú)顯著性變化。另外，更長(zhǎng)周期的茶葉或茶葉提取物干預(yù)均可顯著降低高脂飲食小鼠的血脂水平[19-22]。故本實(shí)驗(yàn)中WTEs未能預(yù)防血脂升高，可能是由于試驗(yàn)周期過(guò)短。

除TC和LDL-C水平顯著升高外，HDL-C水平也顯著升高，高密度脂蛋白（High density lipoprotein, HDL）是促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的主要脂蛋白，可將肝外組織的膽固醇運(yùn)至肝臟進(jìn)行代謝，防止膽固醇等在肝外組織或血管壁堆積而形成冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病[23]。但是HDL-C絕對(duì)水平的升高并非均為良性，炎癥反應(yīng)等可使 HDL主要成分如脂質(zhì)被修飾，致使其活性降低，并產(chǎn)生促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化作用[24]。故對(duì)作為慢性低度炎癥的肥胖癥，分析其HDL-C升高的原因尤為必要。首先，可能是小鼠肝臟出現(xiàn)諸如急性肝炎或脂肪肝等病理變化；其次，可能是小鼠肝臟HDL受體 SR-BI表達(dá)受到抑制，減弱膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。兩者均能導(dǎo)致血清 HDL-C水平升高。SR-BI作為 HDL受體，在膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中具有重要的生理功能，SR-BI活性降低，肝臟選擇性攝入膽固醇能力下降，使血漿HDL-C水平升高[25-26]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，WTEs干預(yù)組小鼠肝臟既無(wú)炎癥反應(yīng)，也未發(fā)生脂肪肝等病理變化，HDL受體 SR-BI表達(dá)水平也未被抑制。故本實(shí)驗(yàn)中，小鼠HDL-C水平升高對(duì)機(jī)體并無(wú)損害作用，屬代償性升高，清除高脂飲食誘導(dǎo)的高水平血膽固醇，以維持循環(huán)系統(tǒng)中膽固醇平衡。

綜合來(lái)看，WTEs干預(yù)未使小鼠體質(zhì)量顯著低于正常對(duì)照組，且 WTEs各組血清 ALT和AST水平與正常對(duì)照組無(wú)顯著差異。因此，本實(shí)驗(yàn)所設(shè)劑量范圍內(nèi)，WTEs可在不產(chǎn)生生長(zhǎng)抑制和肝毒性的條件下，一方面，通過(guò)抑制高脂飲食誘導(dǎo)的脂肪細(xì)胞分化，抑制脂肪組織增長(zhǎng)，從而預(yù)防肥胖的發(fā)生；另一方面，通過(guò)促進(jìn)小鼠血清HDL-C水平代償性升高，以清除高脂飲食誘導(dǎo)的高水平的血膽固醇，并通過(guò)下調(diào)SREBP-1c、FAS和ACC1轉(zhuǎn)錄水平來(lái)抑制脂肪酸合成和脂肪積累。SREBP-1c是脂類合成的重要核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可以調(diào)節(jié)脂肪酸合成關(guān)鍵酶如FAS、ACC1和硬脂酰輔酶A脫氫酶 1（Stearoyl-Coenzyme A desaturase 1,SCD1）等基因的表達(dá)，肝臟超表達(dá)SREBP-1c、FAS、ACC1則促進(jìn)脂肪酸合成和脂肪積累，從而引起脂肪肝變性[27]。WTEs可有效抑制三者的表達(dá)，從而達(dá)到預(yù)防肥胖和脂肪肝發(fā)生的功效。

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Anti-obesity Efficacy of Shoumei White Tea on High-fat Diet Mice and Its Safety Evaluation

ZHENG Li1, HOU Caiyun1,2*, REN Fazheng2

1. Beijing Advanced Innovation Center for Food Nutrition and Human Health, College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China; 2. Beijing Laboratory for Food Quality and Safety, College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China

White tea extracts (WTEs) had been prepared from Shoumei white tea stored for 1, 3 and 7 years,respectively. Male mice (C57BL/6J) were fed with high-fat diet and supplemented with WTE to establish the anti-obesity efficacy model. Body weight gain, food intake, the pathobiology changes of the liver and adipose tissues,serum lipids profiles and differential expression profiles of lipid metabolism-related genes of liver in mice were investigated. The results showed that WTEs inhibited adipocyte differentiation and lipid excessive accumulation in adipose tissues, inhibited fatty acid synthesis and lipid excessive accumulation in liver by ameliorating the expression levels of lipid metabolism-related genes via down-regulation of the mRNA expression level of SREBP-1c,FAS and ACC1, thus depressing the increase of body weight and adipose tissues induced by high-fat diet. The preventing obesity efficacy of Shoumei white tea in high dosage was reduced with the increase of the storage years..

white tea, anti-obesity, safety

TS272.5+9；R972+.6

A

1000-369X（2017）06-586-11

2017-03-23

2017-04-23

北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心開(kāi)放基金項(xiàng)目

鄭麗，女，碩士研究生，主要從事白茶預(yù)防肥胖功能性評(píng)價(jià)等研究，E-mail：18810889738@163.com。*通訊作者：food319@139.com