譚陽陽 牛 墨 田 紅

（牡丹江出入境檢驗檢疫局 黑龍江牡丹江 157022）

固相萃取-氣相色譜質譜聯用法測定蔬菜和食用菌中6種氨基甲酸酯類農藥殘留

譚陽陽 牛 墨 田 紅

（牡丹江出入境檢驗檢疫局 黑龍江牡丹江 157022）

建立了一種同時檢測蔬菜和食用菌中滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威6種氨基甲酸酯類農藥殘留量的氣相色譜質譜聯用方法。樣品通過乙腈提取，固相萃取小柱凈化，選用選擇離子掃描方式測定。6種氨基甲酸酯類農藥在0.006～0.400mg/kg范圍內線性關系良好（R2為0.995～0.9991），空白基質樣品在添加3個水平0.020、0.050、0.100mg/kg的回收率為77.2%～96.5%，相對標準偏差（n=3）為2.7%～7.9%，方法檢出限可達0.002～0.004mg/kg。該方法靈敏度高，操作方便、快速，適用于實際樣品的測定。

蔬菜；食用菌；氨基甲酸酯類農藥；固相萃取；GC-MS

1 前言

氨基甲酸酯類農藥是一類廣譜殺蟲劑，是以甲酸酯為前體化合物發(fā)展而來，具有分解快、殘留期短、高效、選擇性強等特點，主要應用于糧食、蔬菜和水果上。20世紀70年代以來，由于有機氯農藥相繼被不同國家禁用或者限制使用，以及抗有機磷農藥的昆蟲品種日益增多，氨基甲酸酯類農藥的使用量逐年增加[1]。國家標準中幾種主要氨基甲酸酯類農藥在蔬菜中的限量為：滅多威0.2mg/kg、克百威0.02mg/kg、甲萘威1mg/kg、仲丁威0.05mg/kg和抗蚜威0.01mg/kg。

國內外對氨基甲酸酯類農藥的分析多采用液相柱后衍生法[2]、GC-MS[3-5]和LC-MS/MS[6，7]法。液相色譜柱后衍生法選擇性較差，易產生假陽性，且需衍生試劑，實驗過程相對復雜；LC-MS/MS是檢測氨基甲酸酯類農藥較好的方法，但是儀器價格太高，不利于普及；GC-MS法兼顧其他兩種方法的優(yōu)點，采用SIM法，不漏掉陽性樣品，能夠準確定性和定量。但目前用氣相色譜質譜聯用儀同時測定蔬菜和食用菌中氨基甲酸酯類農藥的文獻較少。

本研究采用固相萃取和氣相色譜質譜聯用技術，建立了同時測定蔬菜和食用菌中6種氨基甲酸酯類農藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）殘留的方法，實際應用效果良好，可滿足進出口蔬菜和食用菌中多種氨基甲酸酯類農藥殘留量檢測的需要。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 試驗樣品

白菜、黃瓜、胡蘿卜、金針菇、平菇、杏鮑菇：購自超市或農貿市場。

2.1.2 試劑

乙腈、二氯甲烷、丙酮：均為色譜純，科密歐公司；氯化鈉、無水硫酸鈉：均為分析純，科密歐公司；6種氨基甲酸酯類農藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）標準品：農業(yè)部環(huán)境保護科研檢測所。

2.1.3 儀器

GCMS-QP2010PLUS氣相色譜質譜聯用儀：日本Shimadzu公司；AL204-IC電子分析天平：瑞士梅特勒-托利多公司；T-25均質器：德國IKA公司；NEVAP氮吹儀：美國Organomation公司；5804高速離心機：德國艾本德公司；RV10旋轉蒸發(fā)儀：德國IKA公司。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：毛細管柱，HP-5 ms，30 mm×0.25 mm× 0.25 μm；進樣口壓力：65.2 KPa；色譜柱溫度：80℃（3min）120℃（0min）260℃（3min）；進樣口溫度：280℃；載氣：高純氦；進樣量：1 μL。

2.2.2 質譜條件

離子源：EI源；接口溫度：280℃；離子源溫度：230℃；溶劑延遲：6min；掃描方式：SIM。

2.2.3 操作步驟

2.2.3.1 制備與提取

新鮮樣品取500 g左右，初步切碎混勻（四分法取樣，蔬菜無需切得太碎，以免組織液汁流失）；取樣品20.0g（精確至0.01 g）于80mL離心管中，加40mL乙腈，用均質器15 000 rpm勻漿提取1min；加入5～ 7 g氯化鈉，再勻漿提取1min；在8 000 rpm條件下離心5min，取上清液20mL，40℃水浴中旋轉蒸發(fā)至約1mL，待凈化。

2.2.3.2 凈化

用丙酮和二氯甲烷混合液（1∶1，v/v）作為淋洗液。先用5mL淋洗液活化裝有2 cm高無水硫酸鈉的Carb/NH2固相萃取小柱；當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液（2.2.3.1）轉移至凈化柱上，然后用3×1mL淋洗液洗滌樣液瓶，并分別把洗滌液轉移到Carb/NH2柱上，再加入淋洗液12mL；收集所有流出物于50mL雞心瓶中，40℃水浴中旋轉蒸發(fā)至近干，氮氣吹干，5mL丙酮準確定容；取1mL裝入上機瓶中，供氣相色譜質譜聯用儀測定。

3 結果與討論

3.1 前處理條件優(yōu)化

3.1.1 提取方式

參照多個相關文獻中對蔬菜和食用菌中氨基甲酸酯類農藥進行提取，比較了均質、超聲和振蕩提取方式，結果表明超聲提取比較耗時，振蕩提取不充分，均質提取效果最好，故選擇均質提取，然后離心的方式。

3.1.2 提取溶劑

氨基甲酸酯類農藥多具有極性，易溶于極性有機溶劑，且多數食用菌含有多糖、嘌呤、核酸等物質，而蔬菜中一般含有大量色素，前處理難度較高。丙酮對絕大多數農藥的溶解度大，易把農藥從樣品基質中提取出來，但大量雜質也被提取出來，給凈化帶來困難；乙酸乙酯提取效果不能令人滿意；采用乙腈作為提取溶劑進行提取時，加入氯化鈉分層效果較好。通過對丙酮、乙酸乙酯和乙腈3種常用有機溶劑在除雜質、色譜與固相萃取柱的兼容性和毒性等方面進行比較，選擇乙腈作為本實驗的提取溶劑。

3.1.3 固相萃取柱

常用的固相萃取柱有Carb/NH2柱、C18柱和佛羅里硅土小柱，C18柱在稱樣量＞4 g時回收率開始下降，Carb/NH2柱對雜質的去除比佛羅里硅土小柱效果好，因此選擇Carb/NH2固相萃取柱。

3.2 氣相色譜-質譜條件的優(yōu)化

方法采用選擇離子監(jiān)測方式（SIM）大大提高了各農藥靈敏度，每種農藥選擇4種離子檢測，根據保留時間和離子豐度比定性，峰面積定量。圖1為優(yōu)化的氣相色譜-質譜條件下質量濃度為0.2mg/L的6種氨基甲酸酯類農藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）混合標準溶液（黃瓜基質）的選擇離子色譜圖。表1為這6種氨基甲酸酯類農藥的保留時間和特征離子。

3.3 基質效應

基質效應是質譜進行藥物殘留分析檢測時必須注意的問題，研究了以白菜、黃瓜、胡蘿卜、金針菇、平菇、杏鮑菇為空白基質配制標準溶液與溶劑配制的標準溶液中6種農藥 （質量濃度均為0.1mg/L）峰面積之比來考察基質效應，結果表明基質對6種氨基甲酸酯類農藥均有較強的基質效應。因此，本項目以不同樣品空白溶液配制基質標準溶液繪制標準曲線，從一定程度上消除基質效應對定量的影響。

圖1 6種農藥的混合標準選擇離子掃描（SIM）色譜圖

表1 6種農藥的保留時間和特征離子

3.4 標準曲線、方法回收率、精密度及檢出限

向空白黃瓜樣品中分別添加系列標準溶液，每個水平平行測定3次，測定方法回收率及相對標準偏差。同時以空白黃瓜樣品提取液配制系列標準曲線并測定繪制，以產生的3倍信噪比（S/N）時各農藥的濃度作為該農藥的檢出限（LOD）。各農藥的線性范圍、相關系數、回收率、相對標準偏差及檢出限見表2，黃瓜基質空白和添加回收提取圖譜見圖2、圖3。結果表明6種氨基甲酸酯類農藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）在線性范圍內線性良好，相關系數均大于0.995，檢出限能夠滿足國家標準限量要求。

表2 6種農藥的線性范圍、相關系數、回收率、相對標準偏差及檢出限（n=3）

圖2 黃瓜空白樣品選擇離子掃描（SIM）色譜圖

圖3 黃瓜添加回收率加標選擇離子掃描（SIM）色譜圖（加標濃度0.02mg/kg）

3.5 方法應用

從超市或農貿市場中抽取白菜、黃瓜、胡蘿卜、金針菇、平菇、杏鮑菇6種常見蔬菜和食用菌，共6個樣品，按照實驗方法測定這6種氨基甲酸酯類農藥，結果表明白菜有克百威檢出，其他樣品未檢出這6種氨基甲酸酯類農藥。

4 結論

本研究建立了蔬菜和食用菌中6種氨基甲酸酯類農藥的氣相色譜質譜聯用檢測方法。考察了不同基質效應的影響，以不同樣品溶液配制基質標準曲線，從一定程度上消除了基質效應對定量的影響。該方法具有操作簡單、分離效果好、線性范圍寬、回收率高、精密度好和分析效率高等特點，能滿足蔬菜和食用菌中6中氨基甲酸酯類農藥殘留檢測的要求。

[1] 李崇瑛，白亞之，鈕松召，等.食品中氨基甲酸酯類農藥殘留的分析方法[J].分析科學學報，2007，23（6）：723-724.

[2] NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定 第3部分：蔬菜和水果中氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定[S].

[3] GB/T 23216-2008食用菌中503種農藥及相關化學品殘留量的測定 氣相色譜-質譜法[S].

[4] GB/T 19648-2006水果和蔬菜中500中農藥及相關化學品殘留量的測定 氣相色譜-質譜法[S].

[5] 仲岳桐，陳春曉，康莉.蔬菜中氨基甲酸酯類農藥的氣相色譜質譜聯用檢測法[J].職業(yè)與健康，2010，26（3）：280-281.

[6] GB/T 23202-2008食用菌中404種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法[S].

[7] GB/T 20769-2008水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法[S].

Determination of Six Kinds of Carbamate Pesticides in Vegetables and Mushrooms By Solid Phase Extraction Coupled with Gas Chromatography-Mass Spectrometry

TAN Yangyang，NIU Mo，TIAN Hong
（Mudanjiang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Mudanjiang，Heilongjian，157022）

To establish a method fordetermination of Methomyl，Carbonfuran，Tsumacide，Carbaryl，Fenobucarb，Pirimicarb in vegetables and mushrooms by gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）.The samples were extracted CH3-CN and cleaned with solid phase extraction，and the selected ion monitoring（SIM）mode was selected to quantify.The linear range was 0.006～0.400mg/kg，and the correlation coefficients were 0.9959～0.9991.The recoveries at three levels of 0.020、0.050、0.100mg/kg into blank matrix ranged from 77.2%～96.5%with the relative standarddeviations of 2.7%～7.9%.The limits ofdetection were in the range of 0.002～0.004mg/kg.This method is found to be sensitive fast and accurate.It can be used fordetermination of carbamate pesticides in vegetables and mushrooms.

Vegetables；Mushrooms；Carbamate Pesticides；Solid Phase Extraction；GC-MS

O657.6

E-mail：zhengshi9918@163.com

2017-04-20