易 霞 楊沁潔 李清亮

（四川省內(nèi)江市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，四川內(nèi)江641000）

靈芝多糖對(duì)內(nèi)江豬免疫功能的影響

易 霞 楊沁潔 李清亮

（四川省內(nèi)江市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，四川內(nèi)江641000）

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)內(nèi)江豬接種PRRSV弱毒苗建立免疫模型，探討了靈芝多糖對(duì)內(nèi)江豬免疫功能的影響，從而尋求一種綠色的飼料添加劑，使食品更安全。本試驗(yàn)選擇了80頭生長(zhǎng)育肥內(nèi)江豬（分為2組，每組40頭）為研究對(duì)象。試驗(yàn)按照2×2的因子設(shè)計(jì)：因子1設(shè)接種PRRSV弱毒苗和不接種兩種處理；因子2為靈芝多糖添加水平，設(shè)0，50mg/kg兩個(gè)水平。在試驗(yàn)的第1d和29d接種弱毒苗，在試驗(yàn)第7、14、21、28、35和42d收集2個(gè)組的血清，測(cè)定其免疫指標(biāo)。接種疫苗組特異性抗體顯著上升（p＜0.01）。GLP組在第7d和第14d血清特異性抗體的濃度顯著升高（p＜0.01）。血清中IL-1β濃度顯著降低（p＜0.05），且血清IFN-γ的濃度升高。飼糧中添加靈芝多糖能增強(qiáng)機(jī)體免疫力，能抑制炎癥因子IL-1β來(lái)緩解免疫應(yīng)激造成的生長(zhǎng)抑制。

靈芝多糖 PRRSV 免疫應(yīng)答 內(nèi)江豬 飼料添加劑

0 引言

靈芝是一種珍貴的藥食兩用真菌，補(bǔ)中增智，益心補(bǔ)氣等滋補(bǔ)功效，源自其含有多種活性物質(zhì)，其中靈芝多糖是主要的研究表明靈芝之所以具有益壽延年活性成分。PRRSV是一種感染豬的病毒。現(xiàn)在用的PRRSV疫苗主要是弱毒活疫苗、滅活疫苗。其中弱毒活疫苗的效果較好。PRRSV弱毒苗被廣泛使用，但其安全性和有效性存在不一致的結(jié)果，在某些條件下注射弱毒苗還存在毒力返強(qiáng)的情況，用PRRS弱毒苗注射豬還存在向非疫苗豬傳播PRRSV致病性的情況。通過(guò)在日糧中添加靈芝多糖來(lái)減少接種疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)激，協(xié)同PRRS弱毒疫苗對(duì)PRRSV感染的生長(zhǎng)育肥內(nèi)江豬提供有效的保護(hù)，提高生長(zhǎng)育肥內(nèi)江黑豬的生產(chǎn)性能，是很值得研究的問(wèn)題，并且具有廣闊的前景。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)豬：60kg左右的內(nèi)江豬，源自四川省內(nèi)江市農(nóng)科院畜牧研究所豬場(chǎng)；飼養(yǎng)方為自由飲水、自由采食，確保舍內(nèi)溫度適宜、清潔、空氣流通，并定期對(duì)圈舍進(jìn)行清洗消毒；靈芝多糖，購(gòu)買(mǎi)于上海康舟真菌多糖有限公司；PRRSV弱毒苗：北美ATCCVR-2332PRRS株活疫苗（I ngelvac?PRRSVMLV，每頭分含TCID50為104.8），豬PRRSV抗體、IL-1β、IL-10和IFN-γELISA試劑盒均為R&D公司進(jìn)口分裝。主要儀器設(shè)備：各種規(guī)格移液器，普通離心機(jī)等。

1.2 試驗(yàn)分組及處理

試驗(yàn)期為42d。試驗(yàn)按照2×2的因子設(shè)計(jì)：因子1為接種PRRSV弱毒苗和不接種兩種處理；因子2為靈芝多糖添加水平，設(shè)0，50mg/kg兩個(gè)水平（表示為CON和GLP）。試驗(yàn)共4個(gè)處理，每個(gè)處理組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭豬，共80頭豬。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

每個(gè)組隨機(jī)選取一頭豬，在試驗(yàn)的7d、14d、21d、28d、35d、42d靜脈采血5ml，收集血清，-70℃冰箱保存待測(cè)。血清中PRRSV特異性抗體分別用酶聯(lián)免疫分析（ELISA）定量試劑盒（R&D公司）檢測(cè)。IL-10、I F N-γ、IL-1β采用ELISA定量試劑盒檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。p<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗內(nèi)江豬血清特異性抗體的影響

在接種疫苗后第7d和第14d，日糧和免疫對(duì)血清PRRSV特異性抗體濃度的影響顯著（p<0.05）（表2）。

表2 靈芝多糖對(duì)內(nèi)江豬血清特異性抗體的影響

2.2 靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗內(nèi)江豬血清細(xì)胞因子的影響

在第1次接種疫苗之后，接種疫苗組豬血清中IL-1β濃度的最大值出現(xiàn)在接種疫苗的第7d，同時(shí)，第2次接種PRRSV弱毒苗后的第7d，豬血清中IL-1β濃度上升的幅度比第1次小。接種疫苗組在第7d、第14d和第35d，接種疫苗組血清比PBS對(duì)照組的IL-l β濃度顯著提高。就日糧組而言，內(nèi)江豬飼喂G L P日糧之后，接種疫苗組內(nèi)江豬血清中IL-1β的濃度下降，在接種疫苗后第7d、第14d差異顯著（p<0.05）。結(jié)果顯示，在接種疫苗后第7d和第14d，日糧和免疫對(duì)血清IL-1β濃度的影響顯著（p<0.05）。

接種疫苗組豬血清中INF-γ的濃度變化幅度較小，且在接種疫苗后前14d高于PBS對(duì)照組。在接種疫苗后的第7d、第14d和第35d，與PBS對(duì)照組相比，接種疫苗組豬血清中的INF-γ濃度明顯上升（p<0.05）。就日糧而言，在接種后G L P日糧能夠使豬血清中的INF-γ濃度升高，但差異不顯著。結(jié)果顯示，日糧和免疫對(duì)豬血清INF-γ濃度的影響不顯著（p>0.05）。

接種疫苗組豬血清中IL-10濃度在第7d和第14d極顯著高于PBS對(duì)照組（p<0.05），之后漸降低。在第2次接種疫苗后的7d，與對(duì)照組相比，接種疫苗組內(nèi)江豬血清中的IL-I0濃度顯著增高（p<0.05）。就PBS日糧組而言，G L P日糧降低了接種疫苗組血清中IL-10濃度，但血清IL-10相差不大（p>0.05）。結(jié)果顯示，日糧和免疫對(duì)血清IL-10濃度的影響不顯著（p>0.05）。

3 討論

3.1 靈芝多糖日糧對(duì)接種豬藍(lán)耳病弱毒苗內(nèi)江豬特異性抗體的影響

在本研究中，接種疫苗組在接種疫苗后其血清PRRSV特異性抗體濃度比PBS對(duì)照組的PRRSV特異性抗體濃度提高顯著。同時(shí)，豬血清中PRRSV特異性抗體最大值出現(xiàn)在接種疫苗之后的第21d，并且內(nèi)江豬血清中PRRSV特性抗體的濃度在達(dá)到最大值之后呈下降的趨勢(shì)。但在第2次接種疫苗之后，豬血清中PRRSV特異性抗體濃度無(wú)上升的趨勢(shì)，且其保持著同一個(gè)濃度。就日糧對(duì)照組而言，飼糧中添加靈芝多糖能夠提高接種疫苗組內(nèi)江豬血清中特異性抗體濃度，抗體濃度在接種疫苗后第7d和第14d差異顯著（p<0.05）。日糧和免疫血清PRRSV特異性抗體濃度在接種疫苗后第7d和第14d差異顯著（p<0.05）。

3.2 靈芝多糖日糧對(duì)接種豬藍(lán)耳病弱毒苗內(nèi)江豬細(xì)胞因子的影響

3.2.1 靈芝多糖日糧對(duì)接種豬藍(lán)耳病弱毒苗內(nèi)江豬細(xì)胞因子IFN-γ的影響

本研究中，在內(nèi)江豬的感染期其血清中IFN-γ水平顯著提高，但與IL-10、IL-1β相比其提高的程度較小。血清中IFN-γ的提高，說(shuō)明表明機(jī)體的免疫和抗病毒能力上升。然而，接種疫苗之后的第21d和第28d，與PBS對(duì)照組相比，血清中IFN-γ水平差異不顯著。

3.2.2 靈芝多糖日糧對(duì)接種豬藍(lán)耳病弱毒苗內(nèi)江豬IL-10的影響

PRRSV感染豬成熟樹(shù)突狀細(xì)胞，降低組織性相容復(fù)合體II，上調(diào)IL-I0，促使PRRSV在感染早期抑制T細(xì)胞的增殖，使機(jī)體細(xì)胞的免疫力下降[4]。此外，提高PRRSV疫苗細(xì)胞介導(dǎo)免疫能夠通過(guò)把機(jī)體中的IL-10降低來(lái)實(shí)現(xiàn)。

在本研究中，接種疫苗組在接種疫苗之后的第7d和第14d，其血清中IL-10明顯上升，血清中IL-β水平降低，導(dǎo)致機(jī)體在感染初期的免疫力降低，接種疫苗后21d漸漸趨于正常水平。

3.2.3 靈芝多糖日糧對(duì)接種豬藍(lán)耳病弱毒苗內(nèi)江豬IL-β的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在接種疫苗之后的前14d，豬血清中IL-l β、IL-10、I F N-γ的濃度升高，其中IL-10的升高會(huì)導(dǎo)致IFN-γ和IL-1β的濃度下降，從而會(huì)抑制機(jī)體免疫。因此關(guān)鍵的問(wèn)題在于解決-在免疫應(yīng)激期，不但要使得機(jī)體的免疫功能提高，還能讓機(jī)體的免疫應(yīng)激在最小的程度，以便能夠使得使免疫應(yīng)激快速正常。

4 結(jié)論

（1）飼糧中添加靈芝多糖能促進(jìn)PRRSV特異性抗體的生成，提高血清中IFN-γ水平，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

（2）在接種PRRSV弱毒苗的情況下，飼糧中添加靈芝多糖能抑制炎癥因子IL-1β，從而緩解免疫應(yīng)激。

[1]趙巖，張瑩，初樂(lè)，等.靈芝多糖的研究進(jìn)展[J].中國(guó)果蔬，2014，（32）：27-30.

[2]毛健，馬海樂(lè).靈芝多糖的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2010，（31）：295-298.

易霞（1990-），女，碩士研究生，四川省隆昌縣人，主要從事內(nèi)江豬遺傳育種及寵物行為研究。