彭 峰 鄭逢梅 章四新 王建舉 蘇 雷

（河南省諸美種豬育種集團(tuán)有限公司，河南正陽 463612）

豬瘟免疫程序設(shè)計試驗研究

彭 峰 鄭逢梅 章四新 王建舉 蘇 雷

（河南省諸美種豬育種集團(tuán)有限公司，河南正陽 463612）

針對某規(guī)?；i場仔豬豬瘟免疫效果不理想的情況，先后設(shè)計并開展了3次試驗：不同廠家豬瘟疫苗免疫效果對比、新免疫程序制定、新舊免疫程序?qū)Ρ?。試驗采集的樣品統(tǒng)一使用IDEXX公司阻斷ELISA方法檢測豬瘟抗體效價。結(jié)果表明：不同廠家豬瘟疫苗免疫效果差異顯著；根據(jù)母源抗體監(jiān)測結(jié)果制定出仔豬35日齡首免、75日齡二免的免疫程序；新免疫程序效果良好，育肥后期豬群仍能達(dá)到免疫抗體保護(hù)水平。

豬瘟；免疫程序；母源抗體；免疫試驗

豬瘟是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的必須上報的傳染病之一，給中國以及多個國家?guī)韲?yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。近十幾年來，豬高致病性藍(lán)耳病疫情、豬偽狂犬病疫情、豬流行性腹瀉疫情相繼暴發(fā)并流行，導(dǎo)致豬瘟問題被很多豬場忽視。豬瘟病毒曾作為國內(nèi)豬場的頭號殺手，廣泛流行于全國大小豬場。截止到目前，國內(nèi)絕大多數(shù)豬場仍是豬瘟病原的陽性場，育肥后期豬群不穩(wěn)定、疾病感染流行等與豬瘟病原有千絲萬縷的關(guān)系。同時很多學(xué)者調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場豬瘟疫苗免疫效果一直不理想[1-3]，對豬場免疫程序調(diào)查研究也發(fā)現(xiàn)，多數(shù)豬場的豬瘟免疫程序制定混亂、隨意，需要調(diào)整[4]，豬瘟的防控壓力仍然巨大。

影響豬瘟防控效果的因素很多，免疫預(yù)防是其中最重要的環(huán)節(jié)之一，而免疫程序是免疫成敗的決定因素。制定合理的免疫程序需要充分考慮母源抗體的狀況、仔豬的健康狀況以及豬場的管理水平等。

河南省某規(guī)?；i場仔豬豬瘟抗體水平一直不理想，針對該場現(xiàn)狀，先后設(shè)計開展三次試驗，制定合理的豬瘟免疫程序，旨在為抗體水平不理想的豬場提供科學(xué)、合理的試驗思路以及免疫程序借鑒。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗用豬

選擇年齡、胎次（2～4胎）、環(huán)境狀況、營養(yǎng)狀況相近的種母豬所生產(chǎn)的仔豬作為試驗用豬。在仔豬10日齡時考察健康狀況，對外觀健康豬只進(jìn)行隨機(jī)分組用于試驗，根據(jù)試驗設(shè)計，每組20頭，每次小試驗用40頭仔豬，三次試驗共計使用120頭仔豬。試驗仔豬23日齡斷奶，常規(guī)飼養(yǎng)管理。

1.1.2 試驗疫苗

選擇國內(nèi)知名的兩家生物制品公司（A公司和B公司）生產(chǎn)的豬瘟高效傳代細(xì)胞苗，每瓶20頭份。

1.1.3 試驗試劑

豬瘟病毒抗體檢測試劑盒（阻斷ELISA），美國IDEXX公司生產(chǎn)。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計

試驗分成三次小試驗：第一次試驗在舊免疫程序的基礎(chǔ)上對比A公司（原有疫苗）和B公司（新增疫苗）的疫苗。A組20頭仔豬，免疫A公司疫苗，采用20日齡首免、60日齡二免的免疫程序；B組20頭仔豬，免疫B公司疫苗，采用20日齡首免、60日齡二免的免疫程序；A、B兩組均在18日齡、35日齡、58日齡、80日齡、140日齡采血。第二次試驗確定B公司疫苗的首免日齡及免疫程序。在全群使用B公司疫苗半年以上（其中母豬已普防2次）后開展仔豬母源抗體消減規(guī)律試驗，C組20頭仔豬不進(jìn)行免疫，D組20頭仔豬使用B公司疫苗正常免疫，C、D組均在21日齡、28日齡、35日齡、42日齡、56日齡、70日齡采血。第三次試驗開展B公司疫苗新舊免疫程序?qū)Ρ?。E組20頭仔豬使用B公司疫苗，35日齡首免、75日齡二免；F組20頭仔豬使用B公司疫苗，20日齡首免、60日齡二免；E、F組均在33日齡、73日齡、96日齡、124日齡、152日齡采血。詳見表1。

對于試驗豬的其他疾病預(yù)防，按照該場原有的免疫程序執(zhí)行；對于所有豬只，在疫苗免疫前后4天不添加抗生素、抗病毒藥物。

1.2.2 疫苗接種及樣品采集

經(jīng)檢查保存完好的疫苗按說明書稀釋后，充分搖勻備用。確定豬只后，在其兩側(cè)耳根后頸部消毒后接種疫苗，逐頭更換針頭。按表1的采血日齡，對每組的仔豬全部采樣，前腔靜脈采血，常規(guī)方法分離血清，記錄編號，置－20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。每次小試驗采樣全部結(jié)束后統(tǒng)一檢測抗體效價，針對每次小試驗的樣品在同一天檢測抗體并使用同一批次試劑盒。

1.2.3 免疫副反應(yīng)觀察

免疫后72小時內(nèi)觀察豬免疫后的接種反應(yīng)，每隔4小時測量1次體溫、觀察記錄豬只采食情況以及精神狀況。若有異常，及時救治并記錄。

1.2.4 樣品檢測及結(jié)果判定

檢測樣品的抗體水平按照IDEXX豬瘟病毒抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。樣品阻斷率≥40%為陽性，≤30%為陰性，30%～40%為可疑。

2 試驗結(jié)果

2.1 免疫副反應(yīng)觀察

豬只免疫接種后均觀察72小時，所有豬只精神、食欲、體溫均正常，注射局部無不良反應(yīng)，說明A公司和B公司的疫苗均安全。

2.2 第一次豬瘟試驗結(jié)果

第一次豬瘟試驗是在原有防疫程序的基礎(chǔ)上對比了兩個不同廠家豬瘟疫苗的免疫效果。A組和B組仔豬豬瘟抗體平均阻斷率檢測結(jié)果以及離散度情況見表2。

表1 各組免疫程序、免疫劑量、采血時間

原有免疫程序是20日齡首免，檢測發(fā)現(xiàn)A組和B組18日齡時抗體阻斷率平均值在87%以上，抗體水平較高；免疫后抗體水平出現(xiàn)大幅度下降，35日齡時兩組的抗體阻斷率平均值降到了32%左右，且離散度均較高；58日齡（二免前）與35日齡抗體水平差異不明顯；60日齡（二免后）兩種疫苗免疫的抗體水平均有所提升，但提升幅度不大，后期均出現(xiàn)抗體水平下降情況；140日齡時抗體阻斷率平均值在49%左右，育肥后期到出欄前面臨抗體水平不能保護(hù)的局面。其中58日齡、80日齡、140日齡A組和B組的豬瘟抗體阻斷率差異均極顯著（＜0.01）。試驗表明：仔豬免疫程序設(shè)計不合理是導(dǎo)致仔豬免疫抗體水平上不去的主要原因；B組所用的B廠家疫苗效果優(yōu)于A組的A廠家疫苗，后期試驗選擇B廠家疫苗進(jìn)行。

表2 第一次豬瘟試驗A組、B組抗體平均阻斷率和離散度結(jié)果

2.3 第二次豬瘟試驗結(jié)果

第二次試驗與第一次試驗時間間隔半年，間隔期間母豬普防2次，使用的均是B廠家豬瘟疫苗。第二次試驗研究母源抗體消長規(guī)律，制定免疫程序。C組不免疫，D組是第一次試驗B組的重復(fù)試驗。C組和D組仔豬豬瘟抗體平均阻斷率檢測結(jié)果以及離散度情況見表3。由表3可知，D組和B組試驗結(jié)果近似：35日齡時抗體水平下降至平均阻斷率在可疑或者陰性范圍；二免前抗體阻斷率沒有升高，停留在35日齡的水平，二免后抗體水平開始出現(xiàn)上升趨勢。C組由于沒有免疫豬瘟疫苗，抗體水平在70日齡之前呈一直下降的狀態(tài)；同時發(fā)現(xiàn)28日齡時抗體平均阻斷率為79%，抗體水平過高，此時不適合免疫；35日齡抗體阻斷率平均值下降到50%，此時離散度比較高，35日齡抗體陽性率為43%（數(shù)據(jù)未顯示），比較符合首免日齡；42日齡時抗體阻斷率持續(xù)下降，降到可疑或者陰性范圍，離散度也在降低；56日齡和70日齡抗體阻斷率均在陰性范圍，抗體水平過低。綜合分析，35日齡時抗體水平符合首免日齡要求，因此首免日齡定為35日齡，同時與B廠家疫苗技術(shù)服務(wù)人員溝通，根據(jù)其他養(yǎng)殖場豬瘟免疫試驗數(shù)據(jù)分析，首免和二免間隔時間可仍定為40天，因此制定新的豬瘟免疫程序為：35日齡首免，75日齡二免，使用B廠家豬瘟疫苗。

該養(yǎng)殖場母豬豬瘟免疫常年采用3次/年的普防程序，0胎母豬占基礎(chǔ)母豬群的30%左右，母豬群胎次結(jié)構(gòu)合理。由于仔豬23日齡斷奶，因此A組、B組的18日齡抗體水平以及C組的21日齡抗體水平基本能反映出對應(yīng)母豬的抗體水平，而且A組和B組試驗前母豬免疫的是A廠家豬瘟疫苗，C組試驗前母豬免疫的是B廠家豬瘟疫苗，從檢測結(jié)果上看A廠家和B廠家豬瘟疫苗免疫母豬效果均比較理想，抗體阻斷率平均值均較高。

表3 第二次豬瘟試驗C組、D組抗體平均阻斷率和離散度結(jié)果

2.4 第三次豬瘟試驗結(jié)果

第三次試驗?zāi)康氖菍Ρ刃旅庖叱绦颍?5日齡首免、75日齡二免）與舊免疫程序（20日齡首免、60日齡二免），采用新免疫程序的E組和舊免疫程序的F組使用的均是B廠家豬瘟疫苗。E組和F組仔豬豬瘟抗體平均阻斷率檢測結(jié)果以及離散度情況見表4。

E組抗體水平明顯高于F組：33日齡時，E組沒有免疫，F(xiàn)組已經(jīng)首免，E組抗體水平高于F組；96日齡時兩組差異開始明顯，此時E組處于二免后21天，抗體水平較二免前的73日齡明顯提高，阻斷率平均上升13%；124日齡時E組抗體水平仍有小幅上升，但是F組抗體水平已經(jīng)出現(xiàn)下降，二者差距顯著；152日齡時E組抗體阻斷率平均值在56%，仍在保護(hù)水平以上，雖然出現(xiàn)下降趨勢，仍能保護(hù)育肥豬至出欄，而F組抗體水平持續(xù)下降，阻斷率降至35%，已經(jīng)不能對育肥豬產(chǎn)生抗體保護(hù)作用，在育肥豬出欄前豬瘟免疫抗體均不能達(dá)到保護(hù)水平。這說明，新免疫程序在該場試驗效果良好，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于舊免疫程序，該場應(yīng)采用新免疫程序。

表4 第三次豬瘟試驗E組、F組抗體平均阻斷率和離散度結(jié)果

4 討論

仔豬母源抗體絕大多數(shù)是從分娩母豬的初乳中獲得的，少部分是從常乳中獲得的。隨著仔豬日齡的增長，母源抗體滴度緩慢下降[5]。在非疫情期，母源抗體持續(xù)時間和滴度水平直接決定著仔豬豬瘟疫苗的首免時間，首免過早會出現(xiàn)A組、B組、D組以及F組的情況，疫苗抗原被仔豬體內(nèi)的高水平母源抗體中和，降低了仔豬本身的抗體水平；而首免過晚，保育仔豬會產(chǎn)生抗體空白期，增加了感染豬瘟野毒的風(fēng)險。

該試驗豬場多年來一直沿用20日齡首免、60日齡二免的免疫程序，免疫效果一直不理想。為探討該場合適的仔豬豬瘟免疫程序，設(shè)計了三次試驗，不僅對比了A廠家和B廠家的豬瘟疫苗、探討了母源抗體消長規(guī)律，同時制定了新的免疫程序。試驗結(jié)果表明：B廠家疫苗免疫效果優(yōu)于A廠家，因此選擇使用B廠家疫苗；35日齡時仔豬體內(nèi)的母源抗體下降到臨近保護(hù)狀態(tài)，是進(jìn)行首免的最佳時機(jī)，制定了35日齡首免、75日齡二免的新免疫程序，與舊免疫程序?qū)Ρ炔町愶@著，效果明顯較好。

造成豬免疫失敗的直接原因主要有三方面：免疫抑制性因素，主要包括免疫抑制性疾病以及霉菌毒素；疫苗因素，主要包括抗原含量、制備工藝、疫苗毒株；免疫程序不合理，主要包括首免日齡以及免疫頻率不合理。針對豬瘟免疫，因豬瘟屬于免疫抑制性疾病，豬場存在豬瘟野毒容易造成免疫失??；不同廠家豬瘟疫苗雖然毒株相同，但是制備工藝以及實(shí)際抗原含量仍有差異，實(shí)際選擇上仍需進(jìn)行免疫試驗，不能聽信疫苗生產(chǎn)廠家廣告宣傳[6]，本次試驗用的兩種疫苗均是由國內(nèi)知名疫苗廠家生產(chǎn)，免疫效果卻差異顯著；免疫程序不合理是造成豬瘟免疫失敗的關(guān)鍵因素，業(yè)內(nèi)專家學(xué)者關(guān)于豬瘟免疫程序的研究主要集中在首免日齡、免疫劑量、免疫程序上[7,8]。必須通過監(jiān)測母源抗體確定合理的首免日齡；關(guān)于免疫頻率方面，在參考疫苗廠家建議的基礎(chǔ)上以抗體檢測結(jié)果為評判標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)能夠保證育肥豬出欄前豬瘟抗體水平均能達(dá)到保護(hù)水平。

除了造成免疫失敗的直接原因，管理因素也是決定養(yǎng)殖場免疫成績好壞以及是否穩(wěn)定的間接原因。在防疫管理方面，養(yǎng)殖場應(yīng)制定免疫監(jiān)測計劃，定期對豬群的抗體水平檢測，連續(xù)2次抗體水平較差的項目需要引起關(guān)注，應(yīng)逐一排查抗體水平較差的原因，排查的先后順序為：管理（防疫員技術(shù)水平、防疫人員責(zé)任心、防疫程序的執(zhí)行情況）—豬場帶毒狀況、健康狀況—操作（防疫技巧）—疫苗質(zhì)量—免疫程序。根據(jù)排查結(jié)果修正疫病預(yù)防方案，必要時設(shè)計試驗，探討合理的免疫方案以及疫病預(yù)防方案。

對豬瘟抗體檢測的方法主要有：豬瘟正向間接血凝法、Dot-ELISA法、免疫金標(biāo)試紙檢測法、間接ELISA法、阻斷ELISA法等等。各種檢測方法對操作人員技術(shù)要求不一，檢測結(jié)果也有一定的差異性[9]。ELISA方法具有簡便、快捷、靈敏度高、重復(fù)性強(qiáng)、易操作等特點(diǎn)，是多數(shù)研究學(xué)者檢測豬瘟抗體的首選方法[10]，也是農(nóng)業(yè)部豬瘟疫病凈化要求中指定的檢測方法之一。養(yǎng)殖場根據(jù)免疫監(jiān)測計劃進(jìn)行抗體監(jiān)測，能夠及時掌握本場的免疫效果、評價疫苗、監(jiān)測淘汰免疫耐受豬只、輔助疫病凈化等?？贵w監(jiān)測在豬病防控中的作用日益突出。

[1]江春春,張任娜,賈亞偉,等.集約化豬場不同階段仔豬豬瘟抗體水平檢測與分析[J].豬業(yè)科學(xué),2014(12):96-97.

[2]王亞,袁彥.某規(guī)模化豬場7種重大疾病免疫抗體監(jiān)測及分析[J].養(yǎng)豬,2014(8):72-73.

[3]劉嫦,苗淑淑,高洪,等.云南省曲靖部分地區(qū)豬瘟病毒抗體水平調(diào)查[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2016(4):38-39.

[4]陳橙,杜德利,呂景福,等.母豬與仔豬豬瘟免疫程序的觀察與分析[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2016(5):30-31.

[5]呂仁洪,滕遠(yuǎn),石繼超.豬瘟免疫效果不佳的原因探討[J].中國豬業(yè),2005(3):37-38.

[6]盧紀(jì)和,李官兵,楊新新.五種豬瘟疫苗免疫效果的試驗報告[J].中國豬業(yè),2013(s2):130-132.

[7]陳耀,劉用玲.仔豬豬瘟母源抗體及免疫抗體監(jiān)測實(shí)驗研究[J].西昌學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版）,2012,26(1):19-22.

[8]梁桂燕,韋建華.規(guī)?；i場豬瘟超前免疫和非超前免疫效果實(shí)驗分析[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2016,32(1):193.

[9]劉勝宇,汪峰,胡元元.液相阻斷ELISA法與正向間接血凝（IHA）法檢測豬瘟抗體結(jié)果比較[J].養(yǎng)豬,2015(7):31-32.

[10]李琳,尹榮蘭,呂亞堅.應(yīng)用間接ELISA方法監(jiān)測規(guī)模化豬場豬瘟抗體水平的研究[J].吉林畜牧獸醫(yī),2015(5):25-26.

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1673-4645(2017)10-0056-04

2017-07-15

彭峰（1977-），高級畜牧師，現(xiàn)為河南省諸美種豬育種集團(tuán)有限公司總經(jīng)理，E-mail：707149529@qq.com