王春蓮

(廣西賀州市婦幼保健院，廣西 賀州 542800)

優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷的羊水細(xì)胞培養(yǎng)分析

王春蓮

(廣西賀州市婦幼保健院，廣西 賀州 542800)

目的探究羊水細(xì)胞培養(yǎng)，在優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷的意義。方法選取我院2015年1月至2016年1月進(jìn)行優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷的962例孕婦，962例孕婦在產(chǎn)前診斷時，疑有胎兒染色體異常的情況，對孕婦實行羊水細(xì)胞培養(yǎng)的方式，來進(jìn)行產(chǎn)前的診斷，對孕婦的胎兒的染色體異常進(jìn)行分析，分析主要核型。結(jié)果962例孕婦的羊水細(xì)胞培養(yǎng)，出現(xiàn)19例異常染色體核型，其中18三體1例， 21三體7例，結(jié)構(gòu)異常5例，性染色體異常6例。結(jié)論羊水細(xì)胞培養(yǎng)對于優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷有重要的意義，能夠有效地發(fā)揮作用，判斷胎兒染色體異常的核型，是孕婦選擇是否終止妊娠的重要依據(jù)。

優(yōu)生咨詢；產(chǎn)前診斷；羊水細(xì)胞培養(yǎng)

我國每年出生的，染色體異常的新生兒有很多，對孩子和家庭帶來許多負(fù)面影響，主要原因是沒有進(jìn)行產(chǎn)前診斷。優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷的主要目的，是為導(dǎo)致畸胎的因素，或者可能出現(xiàn)的遺傳病等疾病提供依據(jù)，從而使孕婦和家屬進(jìn)行選擇，是否終止妊娠[1]。產(chǎn)前診斷在發(fā)達(dá)國家是臨床產(chǎn)科的重要一部分。隨著我國優(yōu)生意識的提高，對產(chǎn)前篩查，產(chǎn)前診斷的要求也越來越高。目前在優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷中，最常用的方式是羊水細(xì)胞培養(yǎng)。采用羊水細(xì)胞培養(yǎng)的方式，可以對孕婦的染色體核型進(jìn)行有效分析，判斷胎兒的異常情況。但是這種方式也有一些負(fù)面作用。雖然羊水穿刺檢查具有一定的創(chuàng)傷性，但無創(chuàng)傷的方式還不夠成熟，應(yīng)用廣泛并且經(jīng)濟可行、發(fā)展成熟的還是羊水細(xì)胞培養(yǎng)[2]。羊水細(xì)胞檢查能夠?qū)μ旱南忍旎巍⑷旧w病、血液系統(tǒng)遺傳病、先天代謝異常等進(jìn)行診斷。為探究羊水細(xì)胞培養(yǎng)，在優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷的意義，選取我院例孕婦進(jìn)行研究，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年1月至2016年1月進(jìn)行優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷的962例孕婦。孕婦明確研究目的，簽署知情同意書，并同意進(jìn)行羊膜腔穿刺。962例孕婦年齡17歲到46歲之間，平均年齡27.3±3.6歲，孕周16周到25周之間，平均孕周20.1±0.5周。其中有高齡孕婦136例，有服藥史孕婦11例，不良孕產(chǎn)史孕婦有102例，經(jīng)過彩超檢查顯示胎兒畸形的有42例，唐氏征篩查高風(fēng)險的有678例。962例孕婦全部進(jìn)行羊水標(biāo)本的采集和細(xì)胞培養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 在B超的引導(dǎo)下，臨床醫(yī)生對孕婦進(jìn)行羊膜腔穿刺。孕婦在抽取羊水前排空膀胱，并采取側(cè)臥的姿勢，使用無菌注射器，避開胎頭、胎體、胎盤，先抽取孕婦羊水1毫升到2毫升，并棄去。再使用2支無菌注射器，每只10毫升，一共抽取20毫升后，送到實驗室進(jìn)行檢驗。孕婦的穿刺針口要使用無菌紗布覆蓋，避免出現(xiàn)感染的問題。孕婦需要臥床休息兩小時后才能離開，在兩天內(nèi)禁止性生活，并且一周內(nèi)活動要適度。在超凈臺上，孕婦的羊水標(biāo)本裝到兩支無菌離心管中，羊水每分鐘1200轉(zhuǎn)，離心十分鐘吸棄上清。然后留取大約0.5毫升的羊水和細(xì)胞沉淀物，混勻之后分別接種，使用斜面培養(yǎng)管，里面盛有2毫升的羊水完全培養(yǎng)液。接著使用培養(yǎng)箱，在里面靜止培養(yǎng)六天。經(jīng)過顯微鏡觀察，有散在的，或者成堆的梭形細(xì)胞在貼壁生長，換液，并在隔天對細(xì)胞的生長情況進(jìn)行觀察。如果細(xì)胞增殖比較旺盛，可以在分裂細(xì)胞多的時候收獲。如果細(xì)胞的增殖情況不同步，在見到七個到九個大克隆就可以傳代，第二天通過顯微鏡觀察，如果細(xì)胞密度合適，抓住重要時機進(jìn)行收獲。

1.2.2 加入秋水仙素，濃度是25μg/ml，滴入一滴，繼續(xù)培養(yǎng)三小時到四小時，然后收獲細(xì)胞。在離心管中倒入培養(yǎng)液，加入大約0.2毫升的胰酶-EDTA消化液。加入大約2毫升的氯化鈉溶液，放入恒溫箱中，溫度37℃。三到五分鐘后，通過顯微鏡觀察，細(xì)胞已經(jīng)脫落。用離心管吸入液體，使用生理鹽水沖洗瓶壁，溫度37℃，也用離心管吸入。液體每分鐘1200轉(zhuǎn)，離心十分鐘，棄掉上面清液，大約留取0.5毫升。然后用手輕輕彈管底，加入1毫升的低滲液，由氯化鉀和拘櫞酸納組成。低滲六分鐘后，加入固定液，由冰乙酸和甲醇組成，滴完后混勻，靜止六分鐘后，液體每分鐘1200轉(zhuǎn)離心十分鐘，棄上清。加入4毫升的固定液混勻，固定25分鐘后，同樣離心十分鐘，棄上清。繼續(xù)加入4毫升的固定液，再次離心、固定，棄上清。觀察沉淀的細(xì)胞有多少，再加入新的固定液，使用合適的滴片濃度，吹勻后，采用濕冰片進(jìn)行制片。放入烤箱烤片，溫度75℃，時間三小時。用胰酶消化，吉姆薩染色液染色，分析G顯帶。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 使用顯微鏡，常規(guī)計數(shù)，分析G顯帶核型。使用染色體核型分析軟件，采集分析核型，如果有數(shù)目異常的，記數(shù)中期分裂相。變異染色體再做N顯帶和C顯帶。

2 結(jié)果

對962例孕婦進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng)，出現(xiàn)19例異常染色體核型，其中其中18三體1例， 21三體7例，結(jié)構(gòu)異常5例，性染色體異常6例。見表1

表1 羊水細(xì)胞培養(yǎng)異常染色體核型的類型(n/%)

3 討論

有關(guān)資料顯示，我國每年大約有30萬到40萬的缺陷兒出生，其中因為遺傳因素引起的在25%左右。常見的遺傳因素，是染色體異常，目前還沒有有效的方式進(jìn)行治療，因此要做好預(yù)防工作。臨床一般采用羊水細(xì)胞培養(yǎng)的方式，分析染色體核型，進(jìn)行優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷。主要針對有不良孕產(chǎn)史孕婦、高齡孕婦、高風(fēng)險孕婦、或者夫婦一方有染色體異常、B超發(fā)現(xiàn)胎兒異常孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷，為孕婦和家屬提供參考依據(jù)，避免染色體異常的胎兒出生。在本次調(diào)查研究中，出現(xiàn)的19例異常染色體核型，其中18三體1例， 21三體7例，結(jié)構(gòu)異常5例，性染色體異常6例。在檢測中，預(yù)防三體綜合征是優(yōu)生咨詢的重點，即13三體、18三體和21三體。21三體又稱唐氏綜合征，它是一種比較常見的染色體病，產(chǎn)兒主要的癥狀是智力低下。通常發(fā)病率是0.01%～0.02%。大約有四分之三的孕婦會選擇自發(fā)流產(chǎn)，如果胎兒出生，基本上沒有自理的能力，有的患兒可以活到成年，家庭將會背負(fù)巨大的精神壓力和經(jīng)濟壓力。在B超檢測中，只有1例孕婦顯示出異常，其他21三體胎兒，都是通過羊水細(xì)胞培養(yǎng)檢測出來的。不少孕婦存在僥幸心理，B超檢測后，可能不愿意進(jìn)行產(chǎn)前羊水或者臍血的診斷，胎兒出生后很可能確診為21三體，影響胎兒和家庭的正常生活[3]。通常認(rèn)為，母親生育年齡越高，三體的發(fā)生率也會隨之增高，隨著現(xiàn)代生活方式的變化，三體異常有逐漸年輕化的趨向。

3.1 常染色體結(jié)構(gòu)異常，通常是雙親遺傳的。在本次檢測中，21三體的比率最高，達(dá)到了36.84%，它一般只是遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移，沒有丟失，所以表型顯示正常。基本上所有的染色體都會出現(xiàn)倒位，9號染色體的頻率最高。如果羊水檢測出倒位、易位、羅氏易位染色體異常的情況，需要夫妻雙方進(jìn)行染色體檢查。有一方的染色體異常，那么下一代染色體異常的風(fēng)險就會比較高[4]。夫妻雙方的染色體檢查如果和胎兒一致，可以繼續(xù)妊娠，但是如果核型不一致，可能原因是生殖細(xì)胞新生突變。如果孕婦不同意終止妊娠，需要進(jìn)一步診斷，減少畸形兒的出生。

3.2 性染色體異常主要是其X或者Y的結(jié)構(gòu)、數(shù)目出現(xiàn)異常，本次檢測出兩例，2例核型47，XXY。這種核型的胎兒，長大后有自理能力，通常不會影響正常的生活，父母可以自行選擇。另外4例核型45，XO，這種核型胎兒在宮內(nèi)存活率比較低，容易流產(chǎn)。存活后，胎兒可能身材矮小，發(fā)育不全，智力比一般人低，大致正常[5]。長大后也會有生活生理能力，需要父母進(jìn)行選擇。

綜上所述，羊水細(xì)胞培養(yǎng)對于優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷有重要的意義，能夠有效地判斷胎兒染色體異常的核型，是孕婦選擇是否終止妊娠的重要依據(jù)。要提高孕婦優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷的認(rèn)識，做好孕婦的產(chǎn)前宣傳工作，使孕婦能夠了解產(chǎn)前診斷的重要性，了解如果沒有有效的產(chǎn)前診斷，可能發(fā)生的危害。從而使孕婦能夠自覺接受檢查，配合檢查，進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng)檢測，及時查出是否有異常情況，避免出現(xiàn)漏診，保證達(dá)到優(yōu)生的目的。

[1] 羅小金, 胡亮, 楊艷,等. 615例產(chǎn)前診斷羊水染色體異常與多態(tài)性核型分析[J]. 中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2015(5):37-39.

[2]李玉. 孕中期孕婦B超引導(dǎo)下羊水細(xì)胞染色體產(chǎn)前診斷安全性探討[J]. 中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2014(11).

[3]肖雪, 錢源, 楊智麗. 513例孕婦羊水產(chǎn)前診斷結(jié)果分析[J]. 中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2015(1):29-29.

[4]初云霞, 賀方華. 有產(chǎn)前診斷指征的孕中期孕婦進(jìn)行羊水細(xì)胞染色體核型分析的意義[J]. 中國婦幼保健, 2015, 30(22):3856-3858.

[5]劉慈, 劉學(xué)軍, 辛虹,等. 羊水細(xì)胞培養(yǎng)用于染色體病產(chǎn)前診斷分析[J]. 河北醫(yī)藥, 2014(8):1132-1134.

10.3969/j.issn.2095-9559.2017.05.077

2095—9559(2017)05—3443—02

2016-10-17