吉爾格力 ， 許正茂 ， 劉夢(mèng)麗 ， 喬格拉森 ， 巴音查汗

(1. 新疆巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院 ， 新疆 庫(kù)爾勒 841000 ； 2. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 ， 新疆 烏魯木齊 830052)

巴州部分地區(qū)牦牛黃牛新孢子蟲病循環(huán)抗體檢測(cè)

吉爾格力1， 許正茂2， 劉夢(mèng)麗2， 喬格拉森1， 巴音查汗2

(1. 新疆巴音郭楞職業(yè)技術(shù)學(xué)院 ， 新疆 庫(kù)爾勒 841000 ； 2. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 ， 新疆 烏魯木齊 830052)

新孢子蟲病(Neosporiasis)是由犬新孢子蟲(Neosporacaninum)寄生在牛、羊、馬、犬、鹿等多種宿主動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的一種原蟲病。已知犬、郊狼、狐貍等是犬新孢子蟲的終末宿主兼中間宿主；奶牛、黃牛、牦牛、馬、羊、鹿等多種哺乳動(dòng)物均是其中間宿主[1]。新孢子蟲病對(duì)牛的危害尤為嚴(yán)重，主要引起母畜流產(chǎn)、死胎和產(chǎn)弱胎、新生胎兒運(yùn)動(dòng)神經(jīng)障礙等疾病，該病可通過垂直傳播和水平傳播。新孢子蟲病已經(jīng)在世界范圍內(nèi)廣泛傳播，美國(guó)、澳大利亞、新西蘭、比利時(shí)、日本、韓國(guó)等70多個(gè)國(guó)家和地區(qū)均有發(fā)生，我國(guó)內(nèi)蒙古、新疆、青海、河南、河北、吉林、北京等地區(qū)都有報(bào)道[1～5]。本病一年四季均可發(fā)生，引起的流產(chǎn)呈散發(fā)性或地方性流行，患病母畜可反復(fù)發(fā)生流產(chǎn)[6]。目前，尚無有效藥物和疫苗來防治本病，所以，對(duì)該病的快速檢測(cè)、監(jiān)控是防控該病的重要手段。近來地方上發(fā)現(xiàn)牦牛、黃牛有流產(chǎn)，故本試驗(yàn)應(yīng)用由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲實(shí)驗(yàn)室已研制的 “新孢子蟲rELISA抗體檢測(cè)試劑盒”，對(duì)巴州和靜縣巴音布魯克高山牧場(chǎng)的牦牛血清樣品和庫(kù)爾勒舍飼黃牛血清樣品進(jìn)行新孢子蟲抗體rELISA檢測(cè)，以便分析其流產(chǎn)病因，為當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖牛業(yè)的健康發(fā)展提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 抗原與標(biāo)準(zhǔn)血清 新孢子蟲病rELISA抗體檢測(cè)試劑盒由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲實(shí)驗(yàn)室研發(fā)；新孢子蟲標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清由新孢子蟲病IDEXX試劑盒篩選后保存于寄生蟲實(shí)驗(yàn)室。

1.2 樣品來源 采自新疆巴州庫(kù)爾勒舍飼黃牛血清樣品200份，和靜縣巴音布魯克高山牧場(chǎng)的牦牛血清440份，共計(jì)640份。

采血時(shí)均頸靜脈采血(尾靜脈采血)，置于低溫保存箱送回實(shí)驗(yàn)室，普通管擺成斜面，室溫下自然析出血清后，收集血清，-20 ℃保存待檢。

1.3 主要試劑與儀器 嚴(yán)格按照試劑盒說明書保存和使用試劑、新孢子蟲病IDEXX試劑盒，購(gòu)自北京愛德士元亨生物科技有限公司；KHB ST-36型全自動(dòng)酶標(biāo)儀，購(gòu)自上海三科儀器有限公司；SPX-70 L生化培養(yǎng)箱，購(gòu)自北京宏信恒測(cè)科技有限公司。

1.4 檢測(cè)方法 參考陳亮等[7]建立的新孢子蟲病rELISA檢測(cè)方法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，對(duì)440份牦牛血清和200份黃牛血清進(jìn)行檢測(cè)。從4 ℃冰箱中取出新孢子蟲試劑盒，置于室溫下恢復(fù)至室溫，設(shè)置2個(gè)陽(yáng)性孔、2個(gè)陰性孔和2個(gè)空白對(duì)照。最后放入酶標(biāo)儀讀數(shù)，在OD450/630 nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值。

1.5 判定方法 以陽(yáng)性血清孔OD450/630nm平均值和陰性血清孔OD450/630nm平均值為判斷標(biāo)準(zhǔn)。若待檢血清OD值大于陽(yáng)性血清平均值則可判定為陽(yáng)性，若待檢血清OD值小于陰性血清平均值則可判定為陰性，介于兩平均值之間則為疑似陽(yáng)性，需重新檢測(cè)，倘若重新檢測(cè)仍為疑似陽(yáng)性則判定為陽(yáng)性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 天然牧場(chǎng)牦牛新孢子蟲感染情況 天然牧場(chǎng)牦牛新孢子蟲血清抗體陽(yáng)性率為4.09%(18/440)，0～2歲牦?？贵w陽(yáng)性率為3.47%；3～6歲牦?？贵w陽(yáng)性率為4.69%；大于6歲牦?？贵w陽(yáng)性率為3.61%。各個(gè)年齡段新孢子蟲抗體陽(yáng)性率無顯著差異(P>0.05)。

表1 天然牧場(chǎng)牦牛血清新孢子蟲抗體陽(yáng)性情況

2.2 舍飼黃牛新孢子蟲感染情況 舍飼黃牛新孢子蟲血清抗體陽(yáng)性率為13.50%(27/200)，0～2歲黃?？贵w陽(yáng)性率為14.29%；3～6歲黃?？贵w陽(yáng)性率為12.32%；大于6歲黃?？贵w陽(yáng)性率為13.50%。各個(gè)年齡段新孢子蟲抗體陽(yáng)性率無顯著差異(P>0.05)。

表2 地方舍飼黃牛血清新孢子蟲抗體陽(yáng)性情況

3 討論

巴音布魯克草原海拔約2 500m，典型的高山草原，這里所養(yǎng)殖的草食家畜主要以放牧為主；庫(kù)爾勒屬暖溫帶大陸性干旱氣候，海拔約950 m，是周圍圈養(yǎng)了高產(chǎn)奶牛、土種黃牛等。由表1和表2可知，庫(kù)爾勒舍飼黃牛新孢子蟲血清抗體陽(yáng)性率(13.50%)高于和靜縣巴音布魯克鎮(zhèn)牦牛(4.09%)，原因可能是天然牧場(chǎng)放牧牦牛密度低、較分散，不易于本病的傳播；而舍飼黃牛密度高，接觸犬(城里養(yǎng)犬越來越多)等宿主動(dòng)物的幾率大，犬排出的糞便污染飼草和水源，造成感染率較高。此次感染率明顯高于閆雙等[8]檢測(cè)的292份牦牛血清新孢子蟲抗體7.00%(19/292)的陽(yáng)性率。世界上已有30多個(gè)國(guó)家報(bào)道了新孢子蟲病的流行，但在不同國(guó)家和地區(qū)以及同一國(guó)家和地區(qū)的不同牛場(chǎng)新孢子蟲抗體陽(yáng)性率存在很大差異，同一牛場(chǎng)在不同時(shí)間的檢測(cè)結(jié)果也不同[9]。因此，為了減少母畜流產(chǎn)所導(dǎo)致的損失，要加強(qiáng)該病的檢測(cè)、監(jiān)控，還需進(jìn)行綜合防治。

[1] 劉群，李博，齊長(zhǎng)明，等． 奶牛新孢子蟲病血清學(xué)檢測(cè)初報(bào)[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志，2003，39(2)：8-9．

[2] 沈莉萍，劉佩紅，徐鋒，等．上海地區(qū)奶牛犬新孢子蟲病血清學(xué)抗體檢測(cè)[J]．中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲病，2006，14(2)：14-16．

[3] 晁萬鼎，馬利青，李文昌，等．青海省格爾木市乳牛新孢子蟲病的血清學(xué)調(diào)查[J]．中國(guó)獸醫(yī)科技，2005，35(12)：1 012-1 014．

[4] 鄒世穎，何倩妮，王小蕾，等．我國(guó)北方六省市牛新孢子蟲病血清學(xué)調(diào)查[J]．中國(guó)獸醫(yī)雜志，2012，47(2)：54-55．

[5] 李男禮，張守發(fā)，李積旭，等．吉林省白山地區(qū)牛新孢子蟲病流行病學(xué)調(diào)查[J．畜牧與獸醫(yī)，2015，47(5)：117-118．

[6] 皮泉，陳善忠，洪尼寧．貴州省牛傳染性鼻氣管炎、副結(jié)核病和新孢子蟲病血清學(xué)調(diào)查[J]．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35(10)：129-132．

[7] 陳亮，閆雙，劉啟生，等．新孢子蟲和弓形蟲ELISA及western blot檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]．中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，34(7)：558-562．

[8] 閆雙，陳千林，郭慶勇，等．用重組抗原與商品化試劑盒對(duì)比檢測(cè)牦牛的新孢子蟲與弓形蟲感染[J]．中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2013，21(1)：71-74．

[9] 于晉海，劉群，夏兆飛. 牛新孢子蟲病和弓形蟲病的流行病學(xué)調(diào)查[J]．中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2006，36(3)：247-251．

S852.7

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0529-6005(2017)08-0040-02

2016-09-14

自治區(qū)科技成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)資金項(xiàng)目(201454129)；巴州科學(xué)技術(shù)研究(星火)計(jì)劃項(xiàng)目(201403)

吉爾格力(1967-)，男(蒙古族)，副教授，本科，從事獸醫(yī)臨床教學(xué)工作，E-mail：448418620@qq.com

巴音查汗，E-mail：bynch@hotmail.com