朱鐵梁， 楊 波， 郭一沙， 姬艷蘇， 李曉燕

(中國人民武裝警察部隊后勤學院附屬醫(yī)院藥劑科， 天津 300162)

黃連素對高脂血癥大鼠降血脂及抗氧化作用*

朱鐵梁△， 楊 波， 郭一沙， 姬艷蘇， 李曉燕

(中國人民武裝警察部隊后勤學院附屬醫(yī)院藥劑科， 天津 300162)

目的研究黃連素對高脂血癥大鼠的降脂作用和抑制肝臟脂質(zhì)過氧化的作用。方法隨機抽取10只大鼠作為對照組,其余大鼠制作大鼠高血脂模型。成模大鼠隨機分為模型組,黃連素低、中、高劑量組和血脂康組,每組10只。各給藥組大鼠每天一次給予相應藥物灌胃,連續(xù)30 d。觀察黃連素對高脂血癥大鼠血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的影響和肝組織二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(DGAT)，羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)，膽固醇7α-羥化酶(CYP7A)，肝臟甘油三脂脂肪酶(HTGL)以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)與谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性的影響。結(jié)果與正常組比較，高脂血癥組大鼠的肝臟系數(shù)、TC、TG、LDL-C、DGAT、HMG-CoA和MDA顯著升高(P<0.01)，HDL-C、CYP7A、HTGL、SOD和GSH-Px顯著降低(P<0.01)。與高脂血癥組比較，黃連素中、高劑量組和血脂康組大鼠肝臟系數(shù)、TC、TG、LDL-C、DGAT、HMG-CoA和MDA明顯減低(P<0.01)，HDL-C、CYP7A、HTGL、SOD和GSH-Px顯著升高(P<0.01)；黃連素低劑量組TC、TG、LDL-C、DGAT、HMG-CoA和MDA含量顯著降低(P<0.05；P<0.01), CYP7A和HTGL顯著升高(P<0.01)。結(jié)論黃連素可降低高血脂大鼠的血脂水平，抑制肝臟脂質(zhì)過氧化過程，減少肝臟損傷。

黃連素；高血脂；抗氧化；大鼠

高脂血癥是動脈粥樣硬化、脂肪肝等心腦血管疾病主要的危險因素，嚴重影響人們的身心健康[1]。據(jù)統(tǒng)計全球每年有3 000萬人死于高脂血癥引起的相關(guān)疾病，且人數(shù)呈逐年增長趨勢[2]。高脂飲食是高脂血癥的重要形成因素，調(diào)節(jié)血脂代謝紊亂是治療高脂血癥，降低心腦血管疾病發(fā)生率的重要途徑[3]。人體自由基自穩(wěn)態(tài)平衡性下降，自身免疫功能降低，也是高脂血癥形成的重要因素[4]。黃連素又名小檗堿，是一種黃連屬植物的生物堿，含小檗堿5%～8%，以往主要用于清熱、解毒，治療腸道感染，其降脂作用是目前臨床研究的熱點之一，但其對于大鼠高脂血癥的治療作用未見報道。本文研究黃連素對高脂血癥大鼠的調(diào)節(jié)血脂作用以及抗氧化作用，為其臨床應用提供一定的科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

60只SPF級健康SD大鼠，雄性，體質(zhì)量(140±10)g，用普通飼料適應性喂養(yǎng)1周，自由飲水。隨后將60只SD大鼠按體重隨機分為正常組10只和高血脂造模組50只。

1.2 試劑與儀器

血脂康膠囊(國藥準字Z10950029，主要成分為紅曲，產(chǎn)品批號：20160315)產(chǎn)自北京北大維信生物科技有限公司。黃連素(產(chǎn)品批號：S27J6K1)，購自上海源葉生物公司。

總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、丙二醛(malondiadehyde，MDA)含量測定試劑盒和超氧化物歧化酶(superxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活性測定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。UNICO 7200分光光度計，購自上海尤尼柯儀器有限公司；離心機購自SCJLOGEX公司。

1.3 造模

參考相關(guān)文獻[5]，高血脂造模組大鼠喂養(yǎng)高脂飼料1周后稱重，割尾取血測定大鼠血清膽固醇含量，以膽固醇含量≥5 mmol/L為確認模型成功的標準[5]。根據(jù)大鼠血清膽固醇含量，參照大鼠體重，將高血脂造模組50只大鼠分為模型對照組、血脂康組和黃連素低、中、高劑量組，每組10只。血脂康組(200 mg/kg)和黃連素低、中、高劑量組(分別為 100，200，300 mg/kg)分別灌胃給藥10 ml/kg；正常組和模型對照組給予等量的生理鹽水，每天1次，連續(xù)30 d，期間正常組喂養(yǎng)普通飼料，其余各組繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料。高脂飼料配方為：78.8%基礎飼料，1%膽固醇、10%蛋黃粉、10%豬油、0.2%膽酸鈉。高脂飼料由實驗動物中心加工。

1.4 血清脂質(zhì)

大鼠連續(xù)灌胃給藥30 d后，以2%戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈采血6 ml，肝素抗凝，3 000 r/min離心10 min，取上清液用于測定大鼠膽固醇、甘油三脂、極低密度脂蛋白和極高密度脂蛋白含量。

1.5 肝臟生化指標測定

大鼠采血后取出全部肝臟并稱重，計算肝臟系數(shù)，肝臟系數(shù)=肝臟濕質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)。剪取一定質(zhì)量的肝左葉組織，按肝質(zhì)量與生理鹽水體積比1:9的比例加入生理鹽水制成肝臟勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清液用于測定肝組織二脂酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶(diacylgycerol acyltransferase, DGAT)、3羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A, HMG-CoA)、甘油三酯脂肪酶(hepatic triglyceride lipase, HTGL)、膽固醇7α-羥化酶(cholesterol 7α-hydroxylase, CYP7A)、SOD、GSH-Px活性和MDA含量。

1.6 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 黃連素對大鼠體重和肝臟系數(shù)的影響

與正常組比較，高脂血癥組大鼠的肝臟系數(shù)明顯升高(P<0.01)；與高脂血癥組比較，黃連素低、中、高劑量組和血脂康組大鼠肝臟系數(shù)明顯減低(P<0.01,表1)。

GroupWeight(g) Livercoefficient(mg/g)Normal307．5±16．131．9±2．7Model318．2±17．256．8±6．1??Xuezhikang305．0±6．837．6±3．0##Lower317．7±19．749．3±3．3##△△Intermediate311．6±13．945．4±4．2##△△▲▲High312．6±9．638．9±1．3##△▲▲○○

**P<0.01vsnormal group;##P<0.01vsmodel group;△P<0.05,△△P<0.01vsXuezhikang group;▲▲P<0.01vslow group;○○P<0.01vsmiddle group

2.2 黃連素對大鼠血清血脂的影響

與正常組比較，高脂血癥組大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量顯著升高(P<0.01)，HDL-C顯著降低(P<0.05)。與高脂血癥組比較，黃連素中、高劑量組和血脂康組大鼠TC、TG和LDL-C含量顯著降低(P<0.01)，HDL-C含量顯著升高(P<0.01)；黃連素低劑量組大鼠TC、TG和LDL-C含量顯著降低(P<0.05；P<0.01，表2)。

2.3 黃連素對大鼠肝組織關(guān)鍵酶的影響

與正常組比較，高脂血癥組大鼠肝臟DGAT和HMG-CoA的活性均顯著升高(P<0.01)，HTGL和CYP7A的活性則顯著降低(P<0.01)。與高脂血癥組比較，黃連素低、中、高劑量組和血脂康組大鼠肝臟DGAT和HMG-CoA的活性顯著降低(P<0.01)，HTGL和CYP7A的活性顯著升高(P<0.01,P<0.05，表3)。

Tab. 2 Effects of the Traditional Chinese Medicine berberine on TC, TG, HDL-C and LDL-C(mmol/L, ±s， n=10)

TC: Total cholesterol; TG: Triglyceride; HDL: High density lipoprotein; LDL: Low density lipoprotein

**P<0.01vsnormal group;##P<0.01vsmodel group;△P<0.05,△△P<0.01vsXuezhikang group;▲▲P<0.01vslow group;○○P<0.01vsmiddle group

Tab. 3 Effects of the Traditional Chinese Medicine berberine on DGAT, HMG-CoA, HTGL and CYP7A(±s， n=10)

DGAT: Diacylgycerol acyltransferase; HMG-CoA: 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A; HTGL: Hepatic triglyceride lipase; CYP7A: Cholesterol 7α-hydroxylase

**P<0.01vsnormal group;##P<0.01vsmodel group;△P<0.05,△△P<0.01vsXuezhikang group;▲P<0.05,▲▲P<0.01vslow group

2.4黃連素對高脂血癥大鼠肝組織SOD、MDA和GSH-Px的影響

與正常組比較，高脂血癥組大鼠SOD和GSH-Px含量顯著降低(P<0.01)，MDA顯著升高(P<0.01)。與高脂血癥組比較，黃連素中、高劑量組和血脂康組大鼠SOD和GSH-Px含量顯著升高(P<0.01)，MDA含量顯著降低(P<0.01)；黃連素低劑量組大鼠MDA含量顯著降低(P<0.01,表4)。

GroupSOD(U·mgprot?1)MDA(nmol·mgprot?1)GSH?Px(U·mgprot?1)Normal285．9±13．51．396±0．160513±18Model255．1±12．9??3．021±0．310??450±19??Xuezhikang277．2±13．7##1．779±0．168##477±13##Low266．1±13．32．421±0．200##△△459±17△Middle275．5±12．6##1．799±0．183##▲▲471±12##▲▲High282．2±14．1##1．777±0．131##▲▲○○487±13##▲▲○○

SOD: Superoxide dismutase; MDA: Malondialdehyde; GSH-Px: Glutathione peroxidase

**P<0.01vsnormal group;##P<0.01vsmodel group;△P<0.05,△△P<0.01vsXuezhikang group;▲▲P<0.01vslow group;○○P<0.01vsmiddle group

3 討論

隨著人們生活水平的不斷提高，高脂血癥逐步成為影響人類身心健康的重要因素。大量資料證明，高脂血癥是冠心病、心肌梗死、心臟猝死、腦卒中等重大心腦血管疾病發(fā)病的根本病因。高脂血癥主要是由于脂質(zhì)代謝紊亂、脂蛋白分子結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化，引起紅細胞、單核細胞、血小板等增加，導致全血黏度增高、血流速度減慢。對高脂血癥的早期合理的治療能夠有效地防止或推遲人類心腦血管疾病的發(fā)生，有效地提高人類的生活質(zhì)量。西藥治療高脂血癥效果顯著、快捷，但是毒副作用大，主要表現(xiàn)在惡心、腹脹、腹瀉、血糖升高和肝功能損害等方面。目前公認的、最有效的兩類降脂藥物是以促進TG代謝為主的貝特類藥物和以促進膽固醇代謝為主的他汀類藥物，兩者都有一定的肝腎毒性。因此，尋找預防和治療高脂血癥安全、有效的藥物具有十分重要的意義。在防治高脂血癥方面，中藥有其獨特的優(yōu)勢，尤其是毒副作用較小。

血栓形成是高脂血癥導致心腦血管疾病的主要危險因素。低密度脂蛋白進入血管內(nèi)壁促使TC、TG沉積，促成血管粥樣斑塊的形成，粥樣斑塊和凝血系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)的各種因子共同促進血栓的形成[6]。HDL-C可促進細胞中膽固醇向外轉(zhuǎn)運，對心臟具有保護作用。近年研究發(fā)現(xiàn)[7-10]，膽固醇和低密度脂蛋白升高是高脂血癥發(fā)生發(fā)展的重要因素，有效恢復血清中過高的膽固醇及低密度脂蛋白水平有助于高脂血癥及其相關(guān)疾病的防治。實驗結(jié)果表明，高脂血癥大鼠血清TG、TC和LDL-C含量顯著升高，HDL-C含量顯著降低，表明高脂血癥大鼠有脂質(zhì)過氧化損害的參與。高脂血癥大鼠在灌胃給予黃連素4周后，TG、TC、LDL-C含量顯著降低，HDL-C含量顯著升高。實驗結(jié)果表明灌胃給予黃連素能夠抑制膽固醇的合成，促進膽固醇的轉(zhuǎn)運和清除，降低LDL-C含量和升高HDL-C的含量。

HMG-CoA還原酶催化3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A生成二羥甲基戊酸，在血脂的調(diào)節(jié)方面起到非常重要的作用。DGAT催化二酰甘油合成TG，是TG合成的限速酶。HTGL是肝臟合成的，能夠水解中間密度脂蛋白和高密度脂蛋白中的TG和磷脂乳糜微粒，具有清除乳糜微粒殘骸形成低密度脂蛋白和逆向轉(zhuǎn)運TG的重要作用[11]。CYP7A是合成膽汁酸的限速酶，膽汁酸的表達量和活性對膽汁酸的合成起關(guān)鍵作用。

高脂血癥大鼠氧自由基大量增加，由此引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應產(chǎn)生大量的MDA，MDA為機體脂質(zhì)過氧化反應最重要的降解產(chǎn)物之一，對細胞膜具有一定的損傷作用，能夠干擾脂肪酸的氧化降解，使脂肪在肝中蓄積，檢測大鼠血清中MDA含量，可以反應動物體內(nèi)細胞膜受到氧自由基破壞的程度。SOD和GSH-Px構(gòu)成動物體內(nèi)重要抗氧化酶系統(tǒng)，能夠?qū)怪|(zhì)過氧化反應及其中間代謝產(chǎn)物對機體的危害，是清除氧自由基重要的酶，其水平能夠很好地反映體內(nèi)抗氧化酶的活性及其清除氧自由基的能力，因此本實驗同時選擇SOD作為反映機體抗氧化功能的指標。實驗結(jié)果顯示，高脂血癥大鼠SOD和GSH-Px顯著降低，MDA顯著升高，結(jié)果表明高脂血癥大鼠體內(nèi)抗氧化能力下降，機體有脂質(zhì)過氧化損傷。黃連素灌胃治療后，可顯著降低高脂血癥大鼠肝組織中MDA的含量，升高SOD、GSH-Px的活性，糾正高脂血癥大鼠體內(nèi)自由基代謝紊亂，從而恢復機體氧化及抗氧化系統(tǒng)的動態(tài)平衡，減少高血脂所致大鼠脂質(zhì)過氧化損傷的危害，發(fā)揮保肝的作用。

綜上所述，黃連素可有效抑制高脂血癥大鼠肝臟指數(shù)，通過降低DGAT和HMG-CoA的活性，升高HTGL和CYP7A的活性調(diào)節(jié)血脂平衡，同時可以降低肝組織中MDA的含量，升高SOD、GSH-Px的活性，糾正高脂血癥大鼠體內(nèi)自由基代謝紊亂，恢復機體氧化及抗氧化系統(tǒng)的動態(tài)平衡。黃連素治療高脂血癥大鼠的療效與血脂康相當，為開發(fā)創(chuàng)新降脂保肝藥物提供了新的選擇。

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EffectsoftheTraditionalChineseMedicineberberineonantiatheroscloresisandantioxidantactivitiesinhyperlipoidemicmodelrats

ZHU Tie-liang， YANG Bo， GUO Yi-sha， JI Yan-su， LI Xiao-yan

(Department of Pharmacy Office, Affiliated Hospital of Logistics College of Chinese People’s Armed Police Force, Tianjin 300162, China)

Objective: To investigate the effects of the Traditional Chinese Medicine berberine on blood lipid and antioxidation ability in hyperlipoidemic model rats.MethodsTen rats were randomly chosen as control group, and other rats were used to establish hyperllipemia rat models. Successfully molding rats were randomly divided into model group, berberine low dose group(100 mg/kg), medium dose group(200 mg/kg), high dose group(300 mg/kg), and xuezhikang group(200 mg/kg), 10 rats in each group. Each rat received gavage per day continually for 30 days. Diacylgycerol acyltransferase (DGAT), 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A (HMG-CoA), hepatic triglycerides lipase (HTGL), cholesterol 7a-hydroxylase (CYP7A), triglyceride (TG), total cholesterol (TC), low density lipoprotein (LDL), high-density lipoprotein (HDL), malondialdehyde (MDA), glutathion peroxidase (GSH-Px) and superoxide dismutase (SOD) levels were monitored.ResultsThe Traditional Chinese Medicine berberine could obviously decrease the liver coefficient and the contents of TC, TG, LDL-C and increase the serum content of HDL-C in hyperlipoidemia rats. The Traditional Chinese Medicine berberine decrease the levels of MDA, DGAT, HMG-CoA and increase the activities of HTGL, CYP7A, SOD and GSH-Px in liver tissue.ConclusionThe Traditional Chinese Medicine berberine could decrease the blood lipid level and prevent the lipid peroxidation damage in hyperlidemia rats.

the Traditional Chinese Medicine berberine; hyperlipidemia; antioxidant action; rat

R285.5

A

1000-6834(2017)04-369-04

2017-01-05

2017-05-12

△

Tel： (022)60578717； E-mail： 1799587168@qq.com

10.12047/j.cjap.5546.2017.089