黃曉慧，吳華健，華 耀，魏建忠，孫 裴，李 郁*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，安徽合肥 230036；2.合肥市動物疫病預(yù)防控制中心，安徽合肥 230061)

安徽部分地區(qū)規(guī)?；i場偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查

黃曉慧1,2，吳華健1，華 耀1，魏建忠1，孫 裴1，李 郁1*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，安徽合肥 230036；2.合肥市動物疫病預(yù)防控制中心，安徽合肥 230061)

為了解安徽地區(qū)不同規(guī)模豬場豬偽狂犬野毒(PRV-gE)的感染情況，為防控豬偽狂犬病(PR)提供科學(xué)依據(jù)，本調(diào)查應(yīng)用ELISA方法，對2012年8月～2015年12月來自224個不同規(guī)模豬場的11 855份血清樣品進行PRV-gE抗體檢測。結(jié)果顯示，血清樣品總陽性率為14.03%，2012年8月～2015年12月分別為2.76%、5.12%、11.61%、26.61%；育肥豬、哺乳仔豬、母豬、保育豬、后備母豬及公豬依次為31.02%、29.27%、27.46%、22.29%、22.22%、18.52%，皖北、皖南和江淮地區(qū)分別為28.59%、9.59%、6.49%。豬場總陽性率為41.96%，大型規(guī)模場、中等規(guī)模場、小型規(guī)模場及散養(yǎng)戶分別為4.74%、17.00%、23.15%，皖北、皖南和江淮地區(qū)分別為48.48%、35.71%、38.53%。結(jié)果表明，安徽地區(qū)豬群中PRV感染逐年上升，皖北地區(qū)樣品陽性率顯著高于其他地區(qū)，其中小型規(guī)模場及散養(yǎng)戶的感染尤為嚴(yán)重，育肥豬和種豬帶毒是偽狂犬病持續(xù)存在的重要原因，養(yǎng)殖方式、疫苗免疫、生物安全等因素均對PR的流行產(chǎn)生影響。

偽狂犬?。籔RV-gE；酶聯(lián)免疫吸附試驗；血清學(xué)調(diào)查

偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的一種高度接觸性傳染病。豬感染PRV的發(fā)病率和病死率及其發(fā)病的臨床癥狀取決于豬的年齡。懷孕母豬可發(fā)生流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎等一系列繁殖障礙癥狀，生產(chǎn)母豬出現(xiàn)返情、屢配不孕或不發(fā)情，公豬出現(xiàn)睪丸腫脹、萎縮、性功能下降，失去種用能力。本病對仔豬的危害最嚴(yán)重，表現(xiàn)為共濟失調(diào)、抽搐，甚至突然死亡，病死率高達80%～100%。本病對成年豬危害不嚴(yán)重，一般為隱性感染，病死率低，主要表現(xiàn)呼吸系統(tǒng)癥狀，若與豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬流感病毒及其他細(xì)菌或肺炎支原體等混合感染時，則出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病綜合征[1-2]。

疫苗免疫是防控PR的重要手段。目前豬場常用的PR疫苗主要是PRV-gE基因缺失苗，PRV-gE抗體檢測可準(zhǔn)確評價豬群的PRV野毒感染情況，兩者不失為PR凈化技術(shù)最為成熟的黃金組合[3]。自2011 年以來，蘇、魯、豫、皖、冀、浙、粵、湘等地PRV陽性率急劇升高，發(fā)生PR的豬場不斷增多[4-6]。了解在現(xiàn)有防疫控制體系下安徽地區(qū)不同規(guī)模豬場PRV野毒感染情況，為有效控制和凈化PR提供科學(xué)依據(jù)。本調(diào)查應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，于2012年8月～2015年12月，對安徽地區(qū)不同規(guī)模豬場進行了PRV野毒感染的血清流行病學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品 11 855份血清樣品來自安徽地區(qū)224個不同規(guī)模豬場不同生長階段豬。送檢豬場均免疫偽狂犬病基因缺失疫苗，樣品按照以下送檢地區(qū)、豬場規(guī)模及豬只生長階段進行歸類分析。

長江、淮河橫貫安徽省，可將全省劃分為皖北、江淮地區(qū)和皖南三大區(qū)域。皖北地區(qū)包括宿州、淮北、蚌埠、阜陽和亳州；江淮地區(qū)包括合肥、淮南、六安、滁州、巢湖和安慶；皖南地區(qū)包括池州、馬鞍山、銅陵、蕪湖、宣城和黃山。各地區(qū)送檢情況見表1。

自繁自養(yǎng)型基礎(chǔ)母豬數(shù)大于3 000頭為大型豬場，小于1 000頭為中型豬場，小于100頭為小型豬場，小于10頭為散養(yǎng)戶。

豬只生長劃分為六階段，即哺乳仔豬(1周齡～4周齡)、保育豬(4周齡～8周齡)、育肥豬(9周齡以上)、種公豬、后備母豬及生產(chǎn)母豬。

表1 安徽不同地區(qū)樣品送檢情況

1.1.2 檢測試劑 豬偽狂犬病病毒gE抗體ELISA檢測試劑盒，IDEXX公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 檢測步驟及判定標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進行。

1.2.2 統(tǒng)計分析 在對豬場結(jié)果判定和統(tǒng)計時，如果豬場有一個樣品為陽性，則判定該豬場為PRV感染陽性場。不同豬群PRV-gE抗體陽性率的比較采用單因素方差分析方法進行處理，統(tǒng)計分析使用SPSS 10.0軟件進行分析。

2 結(jié)果

2.1 不同時間PRV野毒抗體陽性情況

2012年8月～2012年12月、2013年和2014年的PRV-gE抗體陽性率分別2.76%、5.12%、11.61%，2015年P(guān)RV-gE抗體陽性率呈現(xiàn)大幅度上升，高達26.61%。2015年與2012年、2013年、2014年之間均差異極顯著(P<0.01)。2014年與2013年、2012年之間也均呈極顯著差異(P<0.01)(表2)。

表2 不同時間PRV-gE抗體陽性率

注：肩標(biāo)字母不同者表示差異極顯著(P<0.01)，肩標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P>0.05)。

Note:Values with different letters indicate extremely significant difference(P<0.01) ,and with same letters indicate no significant difference(P>0.05).

2.2 不同生長階段豬群PRV野毒抗體陽性情況

選取豬日齡明確的5 091份血清樣品PRV-gE抗體檢測結(jié)果進行分析。種公豬、母豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育豬和育肥豬的陽性率分別為18.52%(45/243)、27.46%(622 /2265) 、22.22%(76/342)、29.27%(180/615)、22.29%(144/646)和31.02%(304/ 980)。育肥豬、哺乳仔豬、母豬的抗體陽性率均與保育豬、后備母豬及公豬之間差異極顯著(P<0.01)，而育肥豬與母豬之間差異極顯著(P<0.01)，育肥豬與哺乳仔豬、母豬與哺乳仔豬之間差異不顯著(P>0.05)(表3)。

表3 不同生長階段豬群PRV-gE抗體陽性率

注：肩標(biāo)字母不同者表示差異極顯著(P<0.01)，肩標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P>0.05)。

Note:Values with different letters indicate extremely significant difference(P<0.01) ,and with same letters indicate no significant difference(P>0.05).

2.3 不同規(guī)模豬場PRV野毒抗體陽性情況

大型規(guī)模場PRV-gE抗體陽性率為4.74%，而中等規(guī)模場、小型規(guī)模場及散養(yǎng)戶的陽性率則分別高達17.00%和23.15%。大型規(guī)模場與中等規(guī)模場、小型規(guī)模場及散養(yǎng)戶之間均差異極顯著(P<0.01)，中等規(guī)模場與小型規(guī)模場及散養(yǎng)戶之間也呈現(xiàn)極顯著差異(P<0.01)(表4)。

表4 不同規(guī)模豬場PRV-gE抗體陽性率

注：肩標(biāo)字母不同者表示差異極顯著(P<0.01)，肩標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P>0.05)。

Note:Values with different letters indicate extremely significant difference(P<0.01) ,and with same letters indicate no significant difference(P>0.05).

2.4 不同區(qū)域豬場PRV野毒感染情況

安徽地區(qū)PRV-gE抗體豬場陽性率為41.96%，其中皖南、江淮地區(qū)、皖北的豬場陽性率分別為35.71%、38.53%、48.48%，不同區(qū)域豬場陽性率之間差異不顯著(P>0.05)。安徽地區(qū)PRV-gE抗體樣品陽性率為14.03%，其中皖南、江淮地區(qū)、皖北的樣品陽性率分別為9.59%、6.49%、28.59%，皖北與江淮地區(qū)、皖南之間均呈極顯著差異(P<0.01)，而皖南與江淮地區(qū)之間差異也顯著(P<0.01)(表5)。

表5 不同區(qū)域豬場PRV-gE抗體陽性率

注：N* 表示蕪湖、桐城、黃山、銅陵檢測豬場數(shù)量較少，其檢測豬場陽性率不具有統(tǒng)計學(xué)意義；* 表示送檢樣品數(shù)量少，其樣品陽性率不具有統(tǒng)計學(xué)意義。

Note:N * indicates the number of pig farms in Wuhu,Tongcheng,Huangshan and Tongling is less,the positive rate of pig farms is not statistically significant; * indicates that the number of samples is small and the positive rate of samples is not statistically significant.

3 討論

豬偽狂犬病仍是當(dāng)前威脅我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病之一。本調(diào)查受檢血清樣品來自安徽17個地市224個不同規(guī)模豬場不同階段豬群，時間跨度3年之多。從檢測結(jié)果來看，安徽地區(qū)豬群PRV感染的特征如下。

PRV感染呈現(xiàn)逐年上升趨勢，其中2014年和2015年P(guān)RV野毒感染抗體陽性率開始出現(xiàn)顯著性升高，2012年8月至2015年12月，安徽地區(qū)豬群中豬偽狂犬野毒感染壓力依然嚴(yán)峻。該趨勢與全國其他地區(qū)的監(jiān)測結(jié)果相一致[7-8]。PRV感染日趨嚴(yán)重的可能原因包括以下幾個方面：一是PRV新毒株的出現(xiàn)，現(xiàn)有疫苗免疫保護力下降。有研究報道稱2011年后PR疫情的新流行與PRV毒株抗原變異后毒力增強導(dǎo)致現(xiàn)有疫苗免疫產(chǎn)生的抗體的中和能力較經(jīng)典毒株差有關(guān)[9-11]。二是免疫抑制性疾病的干擾，有研究表明PCV2和PRRSV等單一或協(xié)同感染，會造成免疫抑制而引起PR疫苗免疫失敗或延遲[12]。三是多數(shù)豬場存在免疫強度不足，隨意減少免疫次數(shù)等免疫不合理現(xiàn)象，忽視仔豬及育肥豬的免疫。四是豬場盲目樂觀PR凈化結(jié)果，忽視生物安全和生產(chǎn)管理。

安徽地區(qū)不同生長階段的豬群均有PRV感染，但感染情況存在差異，感染率由高到低依次是育肥豬、哺乳仔豬、母豬、保育豬、后備母豬和種公豬。育肥豬的PRV-gE抗體陽性率最高，與國內(nèi)一些調(diào)查結(jié)果相一致[13-15]，其原因主要在于許多豬場只重視母豬的免疫而忽視仔豬的免疫，隨著母源抗體的消失，育肥豬后期缺乏保護力，容易感染PRV。感染的育肥豬進入后備豬群，后備種豬多又是從中挑選出來的，從而形成循環(huán)感染。因此，PRV在育肥豬群中的循環(huán)是PR擴散的危險因素，應(yīng)受到足夠的重視。其次，本研究中哺乳仔豬PRV-gE抗體陽性率高可能與母源gE抗體的存在有關(guān)。此外，本研究中成年豬雖感染率相對較低，但這卻是PR持續(xù)流行且難以根除的重要原因。因為成年豬，尤其是種豬的PRV感染常呈隱性狀態(tài)，可通過唾液、尿液、鼻分泌物、乳汁及精液等持續(xù)向外排毒，妊娠母豬感染PRV時還可通過垂直傳播侵入胎兒，感染的種豬及其所生仔豬長期帶毒。

安徽地區(qū)不同規(guī)模豬場的PRV野毒感染情況不盡相同，小型規(guī)模場及散養(yǎng)戶的感染率最高，其次是中等規(guī)模場，而大型規(guī)模場則相對較低。中小規(guī)模豬場PRV感染率較高的主要原因包括：①引種檢疫不嚴(yán)。中小型豬場引種后很少進行隔離觀察和野毒感染監(jiān)測，從而將帶毒豬直接引入；②免疫程序不合理。中小型豬場由于技術(shù)所限，往往不考慮本地或本場的實際情況盲目套用免疫程序，只重視種豬的免疫，忽略其他階段豬群的免疫；③生產(chǎn)水平低下。中小型豬場養(yǎng)殖環(huán)境差，飼養(yǎng)者飼養(yǎng)管理水平及生物安全防控意識均較薄弱。

安徽地區(qū)不同區(qū)域的豬場PRV感染率無明顯差異，但樣品PRV-gE抗體陽性率則存在顯著差異，皖北地區(qū)感染情況最嚴(yán)重，陽性率為28.59%，其次是皖南地區(qū)(9.59%)，江淮地區(qū)相對較低(6.49%)。不同區(qū)域豬場PRV野毒感染抗體陽性率的差異可能與各地域豬場送檢樣品的多少及樣品來源豬場有關(guān)，不同區(qū)域的不同規(guī)模豬場的生產(chǎn)水平、飼養(yǎng)管理模式和防疫措施均有所差異。此外，養(yǎng)豬密集區(qū)和豬只流動量大區(qū)域PRV感染幾率相對要高[16]。本調(diào)查中，皖北地區(qū)豬場PRV高感染率主要由于其屬于養(yǎng)豬相對集中區(qū)域，且中小型規(guī)模場多，其飼養(yǎng)管理及防疫水平均較差。

PR的成功防控與豬場的防疫檢測、生物安全、生產(chǎn)管理等多方面因素有關(guān)，但最根本的措施還是豬群PR的凈化，即PRV野毒抗體和抗原均為陰性。本調(diào)查結(jié)果充分表明，對安徽地區(qū)各養(yǎng)豬場來說，控制和凈化PR仍然是一項艱巨而富有挑戰(zhàn)性的工作，只有重視合理免疫、實時監(jiān)測、生物安全等綜合防控，才能最終實現(xiàn)PR的凈化，保障豬群的健康。

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Abstract:To understand and grasp the wild pseudorabies virus (PRV-gE) infection in different scale breeding pig farms in Anhui province,to provide scientific evidences for making effective measures to prevent and control of porcine pseudorabies,this survey used ELISA method,11855 serum samples from 224 different scale pig farms were detected for specific antibody against pseudorabies virus(PRV-gE) from August 2012 to December 2015 .The result of the survey demonstrated that the total positive rate of serum samples was 14.03%,from August 2012 to December 2015,the positive rates of the serum samples were 2.76%,5.12%,11.61% and 26.61%.The positive rates of the serum samples in fattening pigs,suckling piglets,sows,nursery pigs,replacement pigs and boars were 31.02%,29.27%,27.46%,22.29%,22.22% and 18.52%,respectively.The positive rates of serum samples in Southern Anhui,Changjiang-huaihe basin and Northern Anhui were 28.59%,9.59% and 6.49%.The total positive rate of the farms was 41.96%,the positive rates in large farms,medium farms,small farms were 4.74%,17.00% and 23.15%,and in Southern Anhui,Changjiang-huaihe basin and Northern Anhui were 48.48%,35.71% and 38.53%.The result revealed that the infection rate of PRV increased year by year in Anhui,the positive rate of samples in Northern Anhui was significantly higher than that in other regions,the infection in small farms was particularly serious,the fattening pigs and boars carrying virus are important reasons for the persistence of pseudorabies.Breeding methods,vaccine immunization,biosecurity and other factors all have impacts on the prevalence of PR.

Keywords:Pseudorabies; PRV-gE; ELISA; seroepidemiological survey

SerologicalInvestigationofPorcinePseudorabiesinPartofScaleSwineFarmsinAnhuiProvince

HUANG Xiao-hui1,2，WU Hua-jian1，HUA Yao1，WEI Jian-zhong1，SUN Pei1，LI Yu1

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei,Anhui,230036,China; 2.AnimalDiseasePreventionandControlCenterofHefei,Hefei,Anhui,230061,China)

S852.659.1;S858.28

B

1007-5038(2017)08-0126-05

2016-12-16

國家星火計劃重點項目(2014GA710002)；安徽省質(zhì)量工程項目(2013sxzx008)；安徽省生豬產(chǎn)業(yè)體系資金項目

黃曉慧(1986-)，女，安徽滁州人，碩士，主要從事動物疫病預(yù)防與控制工作。*