駱成玉 王 萌 葛沙沙 崔智淼

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)?fù)興醫(yī)院乳腺微創(chuàng)中心，北京 100038)

·臨床研究·

乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃對(duì)外周血ICAM-1、CD44表達(dá)的影響及其意義*

駱成玉**王 萌 葛沙沙 崔智淼

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)?fù)興醫(yī)院乳腺微創(chuàng)中心，北京 100038)

目的探討乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃治療乳腺癌的腫瘤學(xué)安全性。方法2013年4月～2014年4月，將我院收治的52例乳腺癌患者按患者意愿分成乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃組(乳腔鏡組，26例)和常規(guī)腋窩淋巴結(jié)清掃組(常規(guī)組，26例)。術(shù)前、術(shù)后1天、術(shù)后3天、術(shù)后5天抽取靜脈血，應(yīng)用ELISA法分析2組細(xì)胞間黏附分子1(ICAM-1)及CD44的表達(dá)水平。結(jié)果乳腔鏡組與常規(guī)組術(shù)前、術(shù)后1天、術(shù)后3天、術(shù)后5天靜脈血ICAM-1及CD44水平均無(wú)明顯差異(P>0.05)。結(jié)論乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)與常規(guī)清掃手術(shù)一樣，沒(méi)有增加外周血ICAM-1、CD44的表達(dá)，具有一定的腫瘤學(xué)安全性。

乳腺癌； 血液播散； 乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃； 細(xì)胞間黏附分子1； CD44

在乳腺癌手術(shù)中，腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)的徹底性已被廣泛認(rèn)可，但腋窩脂肪溶解抽吸是否使得腫瘤細(xì)胞入血從而增加術(shù)后血循環(huán)微轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)的問(wèn)題仍存在爭(zhēng)議。診斷腫瘤的血循環(huán)微轉(zhuǎn)移尚無(wú)直接證據(jù)。現(xiàn)有研究顯示，細(xì)胞間黏附分子(intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1)和CD44等細(xì)胞表面黏附分子對(duì)細(xì)胞間的相互作用具有重要意義，通過(guò)與其配體結(jié)合介導(dǎo)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附并降低自然殺傷細(xì)胞的活性，增加腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移功能，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。其在外周血中的表達(dá)可以為腫瘤的轉(zhuǎn)移或預(yù)后提供有效的預(yù)測(cè)信息，可以用來(lái)監(jiān)測(cè)腫瘤分期和疾病分級(jí)，評(píng)價(jià)各種治療方法的有效性[1～4]。腫瘤患者血清ICAM-1及CD44水平與腫瘤存在及治療反應(yīng)有關(guān)，提示其可作為疾病監(jiān)測(cè)的標(biāo)志物，是一種檢測(cè)腫瘤存在及轉(zhuǎn)移的非創(chuàng)傷性方法，在評(píng)價(jià)乳腺癌術(shù)后癌細(xì)胞有無(wú)血循環(huán)微轉(zhuǎn)移方面具有重要作用[5～7]。本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，通過(guò)測(cè)定乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)(mastoscopic axillary lymph node dissection，MALND)和常規(guī)腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)(conventional axillary lymph node dissection，CALND)的術(shù)前、術(shù)后1天、術(shù)后3天、術(shù)后5天血ICAM-1及CD44的表達(dá)水平，探討MALND對(duì)乳腺癌血行轉(zhuǎn)移的可能影響。

1 臨床資料與方法

1.1 一般資料

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批(2013HY第018號(hào))，所有入組者均被詳細(xì)告知研究細(xì)節(jié)并簽署書(shū)面知情同意書(shū)。納入標(biāo)準(zhǔn)：病理確診乳腺癌，年齡<80歲，腋窩淋巴結(jié)經(jīng)術(shù)前臨床觸診、彩超檢查陽(yáng)性或術(shù)前病理明確轉(zhuǎn)移。排除標(biāo)準(zhǔn)：有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的Ⅳ期，合并其他部位惡性腫瘤病史，已存在引起患側(cè)上肢水腫的疾病，既往有患側(cè)腋窩手術(shù)史。2013年4月～2014年4月，在充分溝通的基礎(chǔ)上，以患者意愿為主要參照行乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃(乳腔鏡組)和常規(guī)腋窩淋巴結(jié)清掃(常規(guī)組)各26例，2組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 手術(shù)方法 2組手術(shù)均為同一組醫(yī)師實(shí)施。

常規(guī)組：按照傳統(tǒng)開(kāi)放手術(shù)方式完成CALND和乳腺癌改良根治術(shù)。

乳腔鏡組[6]：先行腋窩脂肪溶解抽吸MALND，再行乳腺癌改良根治術(shù)。MALND主要步驟：固定體位以充分暴露術(shù)區(qū)；配制脂肪溶解液并注入腋區(qū)；溶脂起效后行腋窩脂肪抽吸；建立腋窩氣腔以制造手術(shù)操作空間；行腋窩淋巴結(jié)清掃。

1.2.2 樣本的采集、處理、保存和測(cè)定 術(shù)前、術(shù)后1天、術(shù)后3天、術(shù)后5天采集外周靜脈血約5 ml，肝素抗凝，離心后取上清液置于-80 ℃冰箱保存，統(tǒng)一檢測(cè)。ELISA步驟：向孔內(nèi)加入100 μl生物素標(biāo)記的抗ICAM-1或CD44抗體，室溫下放置30 min；洗滌4次；加入100 μl辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素抗體，用黏性紙張貼在板子上，室溫下放置30 min；洗滌4次；加入100 μl四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物反應(yīng)液，室溫下放置10～20 min；加入100 μl終止液。溶液顏色應(yīng)該從藍(lán)色變成黃色。輕輕拍板子，保證孔內(nèi)液體充分混勻，在30 min內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，波長(zhǎng)為450 nm，630 nm波長(zhǎng)OD值為參照， 分別得到ICAM-1、CD44的濃度和其對(duì)應(yīng)OD值，結(jié)果見(jiàn)表2，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相應(yīng)的稀釋樣品的值，ICAM-1乘80，CD44乘20，從而得到各自的蛋白濃度。

表2 ICAM-1和CD44樣品濃度-OD對(duì)應(yīng)表

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2組術(shù)前、術(shù)后1天、術(shù)后3天、術(shù)后5天ICAM-1和CD44水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 2組ICAM-1和CD44水平比較 ng/ml

3 討論

MALND在保證腋窩淋巴結(jié)清掃效果的前提下，進(jìn)一步降低手術(shù)并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，術(shù)后能夠獲得較好的上肢功能，因瘢痕創(chuàng)傷小而具有較佳的胸部及腋窩視覺(jué)效果，以及由此產(chǎn)生的乳房功能效果[8～11]，在乳腺癌外科治療中的地位也逐漸提升，但目前對(duì)MALND腫瘤學(xué)安全性的研究尚不多。

ICAM-1是作用較強(qiáng)的黏附分子之一，屬免疫球蛋白超家族，其特異性抗體為存在于淋巴細(xì)胞表面的淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1(lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1)，在正常細(xì)胞不表達(dá)或僅有微量表達(dá)，在乳腺癌組織中高表達(dá)。ICAM-1促進(jìn)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附可能是誘導(dǎo)血管生成的起始事件[12]。ICAM-1與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)，主要起異嗜黏附作用，且實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移與腫瘤中表達(dá)水平有關(guān)。何軍等[13]觀察到有轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中ICAM-1水平明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者ICAM-1水平明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性者。鄭輝等[14]觀察到ICAM-1及LFA-1與乳腺癌的淋巴道轉(zhuǎn)移有關(guān)，并且通過(guò)兩者的協(xié)同作用促進(jìn)乳腺癌的淋巴道轉(zhuǎn)移，ICAM-1表達(dá)水平與乳腺癌的淋巴道轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，可作為數(shù)據(jù)指標(biāo)預(yù)測(cè)和治療乳腺癌的淋巴轉(zhuǎn)移，其作用機(jī)制與增加癌細(xì)胞之間排斥、促進(jìn)癌細(xì)胞與淋巴細(xì)胞之間黏附有關(guān)。CD44即Hermes抗原，是廣泛表達(dá)于細(xì)胞表面的一類(lèi)單鏈糖蛋白，參與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及細(xì)胞內(nèi)外的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，介導(dǎo)淋巴細(xì)胞與毛細(xì)血管后微靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，通過(guò)與細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白結(jié)合而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，或與透明質(zhì)酸結(jié)合形成降解物而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞滋養(yǎng)血管的生長(zhǎng)，在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移中起重要作用。研究證實(shí)乳腺癌轉(zhuǎn)移者CD44高表達(dá)，不同病理類(lèi)型的乳腺癌組織間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但CD44高表達(dá)與乳腺癌的總生存期和無(wú)病生存期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的緊密聯(lián)系[15，16]。焦偉等[17]觀察到乳腺癌組織中CD44陽(yáng)性表型細(xì)胞比例決定腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度。包俊杰等[18]觀察到CD44陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。人乳腺癌細(xì)胞株的研究證實(shí)，CD44參與乳腺癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、黏附和浸潤(rùn)，從而促進(jìn)轉(zhuǎn)移[19]。吳磊等[20]的研究顯示，沉默CD44表達(dá)可有效抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力。因此，ICAM-1和CD44等細(xì)胞表面黏附分子對(duì)細(xì)胞間的相互黏附等具有重要作用，對(duì)于判斷轉(zhuǎn)移具有指導(dǎo)和預(yù)測(cè)意義。

本研究應(yīng)用ELISA法測(cè)定接受乳腔鏡和常規(guī)腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)的乳腺癌患者術(shù)前、術(shù)后1～5天血ICAM-1及CD44的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，2組血ICAM-1及CD44的表達(dá)水平在各時(shí)點(diǎn)均無(wú)明顯差異。2組術(shù)后ICAM-1及CD44的表達(dá)水平均較術(shù)前下降，是手術(shù)解決了腫瘤負(fù)荷的正?，F(xiàn)象，側(cè)面反映了ICAM-1及CD44的表達(dá)水平對(duì)腫瘤的預(yù)測(cè)及指導(dǎo)作用。因此，我們認(rèn)為MALND對(duì)癌細(xì)胞血循環(huán)微轉(zhuǎn)移無(wú)影響，進(jìn)一步證明乳腺癌MALND在腫瘤學(xué)方面的安全性。

1 駱成玉.腔鏡技術(shù)在乳腺癌治療應(yīng)用及評(píng)價(jià).中國(guó)實(shí)用外科雜志，2015，35(7)：721-723.

2 姜 軍.乳腺腔鏡外科的發(fā)展及前景.中國(guó)微創(chuàng)外科雜志，2004，4(4)：273-275.

3 Ross JS,Slodkowska EA.Circulating and disseminated tumor cells in the management of breast cancer. Am J Clin Pathol,2009,132(2):237-245.

4 Kwon KM,Chung TW,Kwak CH,et al.Disialyl GD2 ganglioside suppresses ICAM-1-mediated invasiveness in human breast cancer MDA-MB231 cells.Int J Biol Sci,2017,13(3):265-275.

5 Zhang KE,Ge SJ,Lin XY,et al.Intercellular adhesion molecule 1 is a sensitive and diagnostically useful immunohistochemical marker of papillary thyroid cancer (PTC) and of PTC-like nuclear alterations in Hashimoto’s thyroiditis.Oncol Let,2016,11(3):1722-1730.

6 孫 剛,余佩武,錢(qián) 鋒,等.腹腔鏡胃癌手術(shù)對(duì)腹腔沖洗液中可溶性ICAM-1、CD44v6表達(dá)的影響及其意義.解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2009,34(4):458-460.

7 Hsemann Y,Geigl JB,Schubert F,et al.Systemic spread an early step in breast cancer.Cancer Cell,2008,13(1):58-68.

8 駱成玉.乳腺腫瘤微創(chuàng)功能治療若干問(wèn)題.中國(guó)微創(chuàng)外科雜志，2011，11(12)：1057-1060.

9 丁波泥,李小榮,陳道瑾,等.乳腺癌乳腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)與常規(guī)手術(shù)的比較.中國(guó)微創(chuàng)外科雜志,2010,10(12):1063-1065.

10 朱 江,康 驊,海 濤,等.腔鏡腋窩淋巴結(jié)清掃與傳統(tǒng)腋窩淋巴結(jié)清掃對(duì)保乳手術(shù)美容效果影響的比較.中國(guó)微創(chuàng)外科雜志,2014,14(6):498-502.

11 駱成玉.微創(chuàng)時(shí)代的乳腺外科——理想與現(xiàn)實(shí)的抉擇.中國(guó)微創(chuàng)外科雜志，2014,14(2):97-101.

12 聶芳菲,楊清默,夏有辰,等.半導(dǎo)體激光局部照射對(duì)SD大鼠缺血皮瓣愈合時(shí)ICAM-1和MCP-1表達(dá)的影響.中國(guó)微創(chuàng)外科雜志,2017,17(2):166-170.

13 何 軍,楊樹(shù)才,張雅芳，等.ICAM-1/LFA-1在乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移中表達(dá)的研究.醫(yī)學(xué)研究雜志,2008,37(1):34-37.

14 鄭 輝,潘 輯.人乳腺癌組織中ICAM-1、LFA-1和VEGFR-3的表達(dá)與癌淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.醫(yī)學(xué)研究雜志,2009,38(1):75-79.

15 張佳楠,吳昌平,蔣敬庭,等.乳腺癌患者CD44表達(dá)對(duì)生存預(yù)后影響的Meta分析.中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù),2016,11(2):181-184.

16 郝慧婷,彭士云,趙 婷,等.乳腺癌患者外周血淋巴細(xì)胞中CD44表達(dá)的臨床意義.實(shí)用癌癥雜志,2012,27(2):129-130.

17 焦 偉,王人顥.CD44、CD24和PCNA與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系研究.徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,36(6):396-399.

18 包俊杰,吳誠(chéng)義.E-cadherin、N-cadherin與CD44+/CD24-/low表型在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性及其意義.中國(guó)癌癥雜志,2010,20(8):596-601.

19 黃 鶯.鑒別簇44與乳腺癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述,2012,18(17):2785-2787.

20 吳 磊,惠 慧,董 楠,等.沉默CD44表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖與侵襲的影響.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2015,23(14):1967-1970.

EffectsandSignificanceofMastoscopicAxillaryNodeDissectiononExpressionofICAM-1andCD44inPeripheralBlood

LuoChengyu,WangMeng,GeShasha,etal.

BreastMinimallyInvasiveCenter,AffiliatedFuxingHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100038,China

Correspondingauthor:LuoChengyu,E-mail:luochengyu@163.com

ObjectiveTo investigate the oncologic safety of mastoscopic axillary lymph node dissection (MALND).MethodsA total of 52 patients with breast cancer were divided into two groups depending on patient’s choice: the MALND group (mastoscopic axillary lymph node dissection,n=26) and CALND group (conventional axillary lymph node dissection,n=26). The blood samples of the two groups were examined at preoperation and the 1st, 3rd, and 5thday after operation to analyze and compare the expressions of intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) and CD44.ResultsThere were no statistical differences in serum levels of ICAM-1 and CD44 between the two groups at preoperation and the 1st, 3rd, and 5thday after operation (P>0.05).ConclusionsAs compared with CALND, MALND does not increase the expression of ICAM-1 and CD44 in peripheral blood. MALND is oncologically safe.

Breast cancer; Blood dissemination; Mastoscopic axillary lymph node dissection; Intercellular adhesion molecule 1; CD44

A

：1009-6604(2017)09-0769-03

10.3969/j.issn.1009-6604.2017.09.001

2017-03-11)

(

2017-05-15)

(責(zé)任編輯：王惠群)

北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)“首都臨床特色應(yīng)用研究”(項(xiàng)目編號(hào):Z131107002213145)

**通訊作者，E-mail：luochengyu@163.com