劉 韜，薛 丹，范 葉，高必達，周 倩*

（1湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院植物病蟲害生物與防控湖南省重點實驗室／植物疾病控制與利用湖南省高校重點實驗室，長沙410128；2沅江市植保植檢站，湖南沅江413100；3湖南省水稻研究所，長沙410125；4長沙市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，湖南長沙410003）

湖南省水稻推廣品種種子寄藏真菌檢測

劉 韜1，2，薛 丹3，范 葉4，高必達1，周 倩1*

（1湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院植物病蟲害生物與防控湖南省重點實驗室／植物疾病控制與利用湖南省高校重點實驗室，長沙410128；2沅江市植保植檢站，湖南沅江413100；3湖南省水稻研究所，長沙410125；4長沙市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測中心，湖南長沙410003）

為明確湖南省目前水稻推廣品種種子攜帶真菌情況，本試驗通過保濕培養(yǎng)結(jié)合鏡檢的方法對150個湖南推廣的品種種子帶菌情況進行了調(diào)查。結(jié)果表明：常規(guī)稻種子中帶菌率最低的是‘黃華占’，僅0.18%，帶菌率最高的是‘湘早秈17號’，為6.35%；兩系雜交稻種子中‘八兩優(yōu)18’和‘奧兩優(yōu)69’帶菌率最低，均為0.27%，‘株兩優(yōu)819’帶菌率最高，為7.13%；三系雜交稻種子‘益優(yōu)701’、‘金優(yōu)463’和‘中優(yōu)177’均不帶菌，‘珞優(yōu)8號’品種帶菌率最高達11.65%。從種子帶菌部位來看，穎殼帶菌率遠遠高于米粒。檢出的種子攜帶的寄生菌有胡麻斑菌、鞘腐菌、黑粉菌、彎孢霉、鐮刀菌、黑孢霉，未檢出稻瘟病菌；檢出的種子攜帶的腐生菌有毛霉、曲霉、青霉、鏈格孢等。這些種子攜帶的真菌有可能作為病害的初侵染來源或在水稻育秧期間造成爛秧。

水稻；種子；真菌；檢測

湖南被稱為“水稻第一省”，其水稻生產(chǎn)在保障國家糧食安全方面的作用舉足輕重?！八炯杏怼笔呛咸剿鞒鰜淼囊豁椞岣咚締萎a(chǎn)的技術(shù)［1］。然而，早稻播種時氣溫低，濕度大，稻種帶菌很容易造成爛種爛秧［2，3］，對集中育秧造成影響，給水稻生產(chǎn)造成巨大損失［4，5］。此外，稻種帶菌還能使稻谷在貯藏期間品質(zhì)變壞，失去種用、食用以及工業(yè)用價值，尤其是黃曲霉（Aspergillus flavus）能產(chǎn)生黃曲霉毒素B1，對人畜健康危害極大［6，7］。近年來，水稻上出現(xiàn)的一些新病害，如穗腐病和葉鞘黑斑病等的發(fā)生可能也與水稻種子帶菌有關(guān)［8，9］，但這些次要的真菌并不在種子質(zhì)檢部門的檢測范圍內(nèi)。因此，開展水稻種子真菌區(qū)系的研究可為集中育秧環(huán)節(jié)消毒處理種子提供科學(xué)依據(jù)。

Agarwal等［10］曾使用瓊脂平皿檢驗法和吸水紙保濕檢驗法，對18個印度主栽水稻品種進行種子帶菌檢測研究。國內(nèi)四川、黑龍江等不同研究單位也曾對部分地區(qū)水稻種子樣品進行檢測，結(jié)果表明水稻種子寄藏真菌多達20多種，種子攜帶的真菌除少數(shù)寄生種類外，多數(shù)為腐生性真菌［11～17］。近年來在湖南省推廣的水稻品種多達150～200個，為了明確這些水稻種子帶菌情況，筆者調(diào)查了我省150個水稻推廣品種種子寄藏真菌的種類及其優(yōu)勢種群，以為種子檢驗處理和水稻病害防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試水稻品種分別來自于湖南省農(nóng)產(chǎn)品檢測中心、常德市農(nóng)科所和新化縣農(nóng)業(yè)局，共計150個。試驗在湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院植物病蟲害生物與防控湖南省重點實驗室與植物疾病控制與利用湖南省高校重點實驗室，于2013年3月至2014年5月進行。

1.2 試驗方法

（1）保濕培養(yǎng)。取潔凈的有蓋保鮮盒，底部鋪放一層至數(shù)層無菌脫脂棉或濾紙，加滅菌水使其充分濕潤，瀝去多余水分，放入1000粒左右的水稻種子，使其均勻分布于保鮮盒中，蓋上盒蓋后置于27℃恒溫培養(yǎng)箱中，3 d后鏡檢，對霉菌種類和長霉稻谷的數(shù)量進行統(tǒng)計。稻粒黑粉病直接鏡檢。

（2）顯微鏡觀察。用鑷子挑取谷粒中長出的菌絲，制成臨時裝片，置于顯微鏡下觀察，記錄形態(tài)特征并拍照。統(tǒng)計每個品種長霉或變色粒的數(shù)量和病原菌種類。

2 結(jié)果與分析

2.1 種子帶菌情況

150個水稻品種的種子保濕培養(yǎng)和鏡檢后，霉菌數(shù)量和病原菌種類統(tǒng)計情況見表1。其中，常規(guī)稻種子中帶菌率最低的為‘黃華占’，僅0.18%，帶菌率最高的是‘湘早秈17號’，為6.35%；兩系雜交稻種子中‘八兩優(yōu)18’和‘奧兩優(yōu)69’帶菌率最低，均為0.27%，‘株兩優(yōu)819’帶菌率最高，為7.13%；三系雜交稻種子‘益優(yōu)701’、‘金優(yōu)463’和‘中優(yōu)177’均不帶菌，‘珞優(yōu)8號’帶菌率最高達11.65%。檢出的水稻生長期的寄生菌主要有鐮刀菌（Fusarium）、鞘腐菌（Sarocladium）、胡麻斑菌（Helminthosporium）、稻粒黑粉菌（Neovossia）、彎孢霉（Curvularia）、黑孢霉（Melanosporin）。未檢出稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）。檢出的種子儲藏期腐生真菌主要有曲霉（Aspergillus）、青霉菌（Penicillium）、鏈格孢（Alternaria）、毛霉（Mucor）、毛錐孢霉（Trichoconis）等。鏡檢觀察到的幾種重要病原真菌的孢子如圖1。

表1 湖南推廣水稻品種主要真菌攜帶情況

（續(xù)表1）

圖1 水稻種子上檢測出的幾種重要病原真菌

2.2 種子不同部位帶菌情況

對150個水稻品種種子的穎殼和米粒分別進行保濕培養(yǎng)后，可以看出，所有品種穎殼的帶菌率均遠遠高于米粒的帶菌率（表2）。通過觀察得出變色粒以黑色居多，穎殼變黑率為26.35%，米粒變黑率為12.70%。另有白霉、青霉、黃霉和紅霉等，還有未變色的谷粒保濕后鏡檢觀察到鞘腐菌等真菌。

表2 水稻種子不同部位帶菌檢測結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗對湖南省150個水稻推廣品種進行了種子帶菌檢測，發(fā)現(xiàn)除‘中優(yōu)177’、‘益優(yōu)701’和‘金優(yōu)463’這3個三系雜交稻品種外，其余147個品種的種子均檢出了真菌，且類型和來源不同的品種之間的種子寄藏真菌種類存在差異。常規(guī)稻品種中‘黃華占’帶菌率最低（0.18%），‘湘早秈17號’帶菌率最高（6.35%）；兩系雜交稻中‘奧兩優(yōu)69’‘八兩優(yōu)18’帶菌率最低（0.27%），‘株兩優(yōu)819’帶菌率最高（7.13%）；三系雜交稻以‘珞優(yōu)8號’帶菌率最高，為11.65%。研究中涉及的供試稻種攜帶的寄生性真菌主要有鐮刀菌、鞘腐菌、胡麻斑菌、稻粒黑粉菌、彎孢霉、黑孢霉，種子儲藏期腐生真菌主要有曲霉、青霉菌、鏈格孢、毛霉、毛錐孢霉等。檢測結(jié)果可以說明湖南省主要推廣水稻品種的種子帶菌率以及所帶菌種，這為水稻集中育秧環(huán)節(jié)種子檢驗處理和水稻病害防治提供了科學(xué)依據(jù)和參考。

4 討論

本研究對湖南省推廣的150個水稻品種種子攜帶的真菌種類和帶菌率進行了檢測與統(tǒng)計，結(jié)果表明，寄藏真菌的種類與前人報道的中國水稻種子上常見真菌種類基本一致［11～18］，攜帶的寄生性優(yōu)勢菌群有胡麻斑菌、黑粉菌、彎孢霉、鐮刀菌、黑孢霉。這些真菌是否為水稻生產(chǎn)中潛在的種傳病害病原菌還需要開展進一步的研究。攜帶的腐生性優(yōu)勢菌群有曲霉、毛霉、鏈格孢、青霉菌、毛錐孢霉等，且檢出率較高，尤其是曲霉。這些真菌在種子貯藏階段如環(huán)境條件適宜，極容易造成種子霉變爛種，尤其是在當(dāng)前湖南省大力推廣溫室集中育秧的形勢下，稻種帶菌造成爛秧的影響可能更甚［19，20］。筆者曾在2010年2月底從桃江縣送檢的育秧盤上發(fā)現(xiàn)死秧土壤表土覆蓋有一層毛霉，這是一個值得注意的現(xiàn)象。所以，水稻集中育秧品種的選擇和育秧過程中水稻種子的消毒處理和預(yù)防保護藥劑選擇應(yīng)予以高度重視。

此次檢測中，重要的水稻致病真菌檢出率低（胡麻斑病菌）甚至未檢出（稻瘟病菌）。這說明所檢測品種的制種基地對上述2種病害的防控得力或者該類病害在制種基地發(fā)生頻率低。由于檢測的批次數(shù)量有限，不排除其他未檢測的批次有攜帶的可能。

［1］ 許靖波，鐘武云.積極培育專業(yè)化育秧主體深層次推進水稻集中育秧［J］.湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（22）：5-8.

［2］ Tripathi SK，Jain AK.Seedmycoflora of rice and their influence on germination and seedling vigour［J］.Jnkw Research Journal，2005，39（2）：116-118.

［3］ Utobo EB，Ogbodo EN，Nwogbaga AC.Seedborne mycoflora associated with rice and their influence on growth at Abakaliki，Southeast Agro-Ecology，Nigeria［J］.Libyan Agriculture Research Center Journal International，2011（2）：79-84.

［4］ Duraisway VS，Mariappa V.Rice grain discoloration［J］. International Rice Research Newsletter，1983，8（3）：9-10.

［5］ 臺蓮梅，鄭 雯，閆鳳云，等.水稻種子真菌種群研究［J］.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報，2003，15（1）：31-33.

［6］ Ora N，F(xiàn)aruq AN，Islam MMT，et al.Detection and identification of seed borne pathogens from some cultivated hybrid rice varieties in Bangladesh［J］.Middle East Journal of Scientific Research，2011，10（4）：482-488.

［7］ 柴榮耀，金敏忠，張慶生.變色稻谷寄藏的真菌種類及其致病性研究［J］.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報，1991（2）：61-64.

［8］ 黃世文，王 玲，劉連盟，等.水稻穗腐病病原分離、鑒定及生物學(xué)特性［J］.中國水稻科學(xué)，2012，26（3）：341-350.

［9］ 黃 微，夏 花，高必達.水稻新病害葉鞘黑斑病的病原鑒定［J］.植物病理學(xué)報，2014，44（3）：225-231.

［10］Agarwal VK.Seed-borne Fungi and Virus of Some Important Crops［M］.Pontnagar（Nainital），India：University Press，1981，16-45.

［11］Agarwal VK，Singh OV.Relative percentage incidence of seed-borne fungi associated with different varieties of rice seeds［J］.Seed Research，1974（2）：23-25.

［12］程志明.水稻種子真菌區(qū)系研究［J］.黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，1993（6）：25-27.

［13］李小林，谷安宇，張馨宇，等.水稻種子寄藏真菌的3種檢測方法對比研究［J］.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2011，16（6）：43-51.

［14］梁力哲，Kaare Moller.中國水稻種子上常見寄生性真菌的檢驗識別［J］.植物保護，1989（2）：42-44.

［15］羅 寬，戴良英，黎定軍，等.雜交稻種子帶菌及?；顒┨幚砼c生活力的關(guān)系［J］.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2002，28（4）：317-319.

［16］羅 軍，李小林，朱建軍，等.不同水稻品種種子帶菌檢測及藥劑消毒處理效果［J］.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2000，5（5）：42-47.

［17］劉西莉，李健強，張 龍.水稻種子寄藏的2種柱鏈孢菌檢測與鑒定［J］.植物病理學(xué)報，2002，32（1）：93 -94.

［18］馬炳田，王玲霞，李仕貴，等.四川省雜交水稻種子寄藏真菌研究［J］.種子，2008，27（1）：1-5.

［19］周守建.水稻旱育秧黃苗死苗原因及應(yīng)對措施［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（3）：172-172.

［20］王新華，孫 紅.水稻機插秧黃苗死苗原因分析及防治方法［J］.北方水稻，2009，39（4）：48-49.

Detection of Seed-born Fungiof Commercial Rice Varieties in Hunan

LIU Tao1，2，XUE Dan3，F(xiàn)AN Ye4，GAO Bida1，ZHOU Qian1*
（1 Hunan Provincial Key Laboratory for Biology and Control of Plant Diseases and Insect Pests，Hunan University Key Laboratory for Control and Utilization of Plant Diseases，College of Plant Protection，Hunan Agricultural University，Changsha，Hunan 410128，China；2 Yuanjiang Plant Quarantine and Plant Protection Station，Yuanjiang，Hunan 413100，China；3 Rice Research Institute of Hunan Academy of Agricultural Sciences，Changsha，Hunan 410125，China；4 Changsha Quality Monitoring Center of Agricultural Products，Changsha，Hunan 410003，China）

In order to clarify the fungus-carrying status of commercial rice seed in Hunan province，150 commercial rice cultivars（cvs.）were investigated with themethod ofmoisturizing culture combined andmicroscopic examination.Results showed thatamong the conventional rice cvs.，the fungus-carrying rate of‘Huanghuazhan’was the lowest（0.18%）and‘Xiangzaoxian 17’was the highest（6.35%）.Among the two-line hybrid rice cvs.，the fungus-carrying rate of‘Baliangyou 18’and‘Aoliangyou 69’were the lowest（0.27%），and the‘Zhuliangyou 819’was the highest（7.13%）. Among the three-line hybrid rice cvs.，fungus were not detected in‘Yiyou 701’，‘Jinyou 463’and‘Zhongyou 177’，and fungus-carrying rate of‘Luoyou 8’was the highest（11.65%）.Contamination of seed huskswasmuch higher than that of kernels.Pathogenic fungi，such as Helminthosporium，Sarocladium，Neovossia，Curvularia，F(xiàn)usarium and Melanosporin were detected，but rice blast fungus Pyricularia griseawas not found.Storage stage fungisuch as Mucor，Aspergillus，Penicillium and Alternaria were also found.These fungi carried on rice seeds could act as primary source of infection andcause disease or cause seedlings rot.

rice；seed；fungus；detection

S435.111.1

A

1001-5280（2017）05-0533-05

10.16848／j.cnki.issn.1001-5280.2017.05.18

2017-07-03

劉 韜（1985-），男，碩士研究生，助理農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)作物病蟲害監(jiān)測與防治工作，Email：273398157＠qq.com。*通信作者：周倩，副教授，博士，研究方向為植物病理學(xué)，Email：zhouqian2617＠hunau.edu.cn。

國家科技支撐計劃項目（2012BAD15B04-1）。