陳 斌程馨緣魏丹霞△陳 鵬顧力華楊 暉

（1.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室，云南 昆明 650500；3.昆明醫(yī)科大學生物醫(yī)學工程研究中心，云南 昆明 650500）

桑芪首烏片對自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用和腎素-血管緊張素系統(tǒng)的影響*

陳 斌1程馨緣1魏丹霞1△陳 鵬2顧力華1楊 暉3

（1.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650500；2.昆明醫(yī)科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室，云南 昆明 650500；3.昆明醫(yī)科大學生物醫(yī)學工程研究中心，云南 昆明 650500）

目的 觀察桑芪首烏片對高血壓大鼠的降壓作用并探討其機制。方法 SHR大鼠60只，隨機分為低、中、高3個劑量實驗組，卡托普利組、復(fù)方丹參組和空白對照組，每組10只。同時10只SD大鼠為正常對照組。采用無創(chuàng)尾動脈血壓測量系統(tǒng)監(jiān)測受試后24 h、7 d、14 d、21 d、35 d和給藥結(jié)束1周測量血壓，同時測定給藥后7 d、14 d、35 d及停藥后7 d血漿BK、AngⅠ、AngⅡ水平變化情況。結(jié)果 各給藥組收縮壓與正常對照組與空白對照組差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但各組之間比較差異無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。給藥后，各觀察組血漿AngⅠ、AngⅡ水平明顯低于空白對照組（P<0.05）。給藥后，各觀察組BK水平明顯高于空白對照組（P<0.05）。結(jié)論 本研究表明，桑芪首烏片可明顯降低SHR大鼠血漿AngⅠ、AngⅡ水平，上調(diào)SHR大鼠血漿BK水平，提示桑芪首烏片作用有可能通過抑制腎素轉(zhuǎn)化AngⅠ，拮抗機體ACE的活性，減少AngⅡ的生成而發(fā)揮作用，對RAS的作用具有多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點的綜合影響。

桑芪首烏片 高血壓 腎素血管緊張素系統(tǒng) 動物實驗

高血壓是多種心、腦血管疾病的重要病因和危險因素，其發(fā)展易導(dǎo)致重要臟器如心、腦、腎的器質(zhì)病變和功能損害。因發(fā)病機理至今尚未詳盡，故尋求有效的防治手段仍是高血壓研究的核心。中藥復(fù)方制劑降壓具有平穩(wěn)降壓、改善癥狀、保護靶器官、減少危險事件、提高生活質(zhì)量、預(yù)防并發(fā)癥、聯(lián)用西藥減量減毒增效等多種有效綜合、協(xié)同增效的作用［1-2］。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）在高血壓病的發(fā)生發(fā)展中密切相關(guān)，是高血壓研究的重要環(huán)節(jié)。云南省名譽名中醫(yī)陸家龍主任醫(yī)師長期從事心腦血管疾病的中醫(yī)臨床工作，其潛心研究的經(jīng)驗方“桑芪首烏湯”具有滋補肝腎、平抑肝陽、活血通絡(luò)的作用［3-4］。本實驗在臨床行之有效的經(jīng)驗方基礎(chǔ)上經(jīng)整理優(yōu)化形成固定劑型——桑芪首烏片 （專利號201610148818.7），觀察其降壓作用和對RAS的影響，以進一步探討桑芪首烏片降壓機制和拓展防治高血壓病新藥物?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 健康12周齡親代自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）60只，體質(zhì)量（174.2±12.52）g。由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供 （合格證號：0048303）；健康12周齡SD大鼠10只，體質(zhì)量（305.8±15.7）g，由昆明醫(yī)科大學實驗動物學部提供（合格證號：0021916）。

1.2 藥物與試劑 桑芪首烏片由桑寄生、黃芪、制首烏、鉤藤、天麻、三七等組成，中藥原材料購于云南白藥集團股份有限公司（批號：2013002134），經(jīng)昆明市中醫(yī)醫(yī)院制劑科加工成浸膏，每克相當于生藥材5.8 g；卡托普利，中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn) （批號12050482）；復(fù)方丹參片，廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產(chǎn)（批號D3A021）。大鼠AngⅠELISA試劑盒，上海研盟生物科技有限公司（批號YMR31183）；大鼠BK ELISA試劑盒，上海研盟生物科技有限公司（批號AME21074）；大鼠AngⅡELISA試劑盒，上海研盟生物科技有限公司，批號EK-R30950。

1.3 分組與給藥 經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，SHR大鼠隨機分為桑芪首烏片高、中、低劑量組，卡托普利組，復(fù)方丹參片組和空白對照組，各10只；同時10只SD大鼠為正常對照組。連續(xù)給藥5周。

1.4 血壓測定 主要實驗儀器有大鼠尾動脈血壓測定儀，BL-420F生物機能實驗系統(tǒng)。采用無創(chuàng)尾動脈血壓測量系統(tǒng)，先以40℃溫水給大鼠尾巴預(yù)熱，保持溫度使尾動脈擴張，實驗方法和步驟按大鼠尾動脈血壓測定儀的操作說明進行，以每次連續(xù)測6個數(shù)據(jù)，取其平均值作為血壓測定值。于實驗前，連續(xù)給藥14 d、35 d和停藥7 d測量血壓。

1.5 血漿血管緊張素Ⅰ、緩激肽、血管緊張素Ⅱ測定酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測定血漿中AngⅠ、BK、AngⅡ。實驗嚴格按照試劑盒所提供的說明書中步驟進行操作。于受試品后7 d、14 d、35 d鼠尾靜脈采血，分離血漿后保存待用；停藥7 d后處死，在下腔靜脈采血。

1.6 統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示。各組間比較采用單因素方差分析。如果方差齊采用LSD法。若方差不齊采用Tamhane′s T2統(tǒng)計方法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 桑芪首烏片對SHR大鼠血壓的影響 見表1。實驗前，各組SHR大鼠收縮壓均高于SD正常對照組（P<0.05）；在整個給藥期間，各組SHR大鼠收縮壓與SD正常對照組比較，均明顯升高（P<0.05）；給藥14 d、35 d和停藥后1周，桑芪首烏片低、中、高劑量組，卡托普利組，復(fù)方丹參片組均較SHR空白對照組降低（P< 0.05）；但各組之間比較差異無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。

表1 各組不同時期SHR大鼠收縮壓值比較（mmHg，±s）

表1 各組不同時期SHR大鼠收縮壓值比較（mmHg，±s）

與空白對照組比較，*P＜0.05；與正常對照組比較，△P＜0.05。下同。

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2.2 桑芪首烏片對血管緊張素Ⅰ的影響 見表2。給藥第7日，與SD大鼠比較，SHR各模型組血漿AngⅠ均顯著升高（P<0.05），但SHR大鼠各模型組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；給藥第14、35日，與空白對照組比較，卡托普利組、復(fù)方丹參片組、桑芪首烏片中、高劑量組均能明顯降低血漿AngⅠ水平（P<0.05）；停藥7 d后，桑芪首烏片中、高劑量組仍可降低血漿AngⅠ水平（P<0.05）。

表2 各組不同時期SHR大鼠血漿血管緊張素Ⅰ水平比較（pg/mL，±s）

表2 各組不同時期SHR大鼠血漿血管緊張素Ⅰ水平比較（pg/mL，±s）

組別 n空白對照組 10卡托普利組 10復(fù)方丹參片組 10給藥7 d 給藥14 d 給藥35 d 停藥7 d 24.97±1.61 25.53±1.97 25.07±2.36 27.31±2.69 24.81±2.75 24.30±2.23*23.48±2.06*26.09±2.34 24.85±2.28 24.41±1.87*23.81±2.59*26.11±2.92桑芪首烏片低劑量組 10 25.10±2.36 24.91±2.37 24.66±2.92 25.99±2.74桑芪首烏片中劑量組 10 24.69±3.02 24.06±2.12*23.86±2.56*25.44±1.88*桑芪首烏片高劑量組 10 24.32±1.45 23.67±2.10*23.27±1.97*25.14±2.17*正常對照組 10 20.22±1.76*19.94±1.86*20.41±2.06*20.08±1.15*

2.3 桑芪首烏片對緩激肽的影響 見表3。給藥第7日，與SD正常對照組比較，SHR模型各組血漿BK水平均降低（P<0.05），但SHR空白對照組比較，桑芪首烏片高劑量組血漿BK水平升高 （P<0.05）；給藥第14、35日，與空白對照組比較，卡托普利組、復(fù)方丹參片組、桑芪首烏片低、中、高劑量組均顯示出較高的血漿BK水平（P<0.05）；停藥7 d后，各組血漿BK水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

表3 各組不同時期SHR大鼠血漿緩活激肽水平比較（pg/mL，±s）

表3 各組不同時期SHR大鼠血漿緩活激肽水平比較（pg/mL，±s）

組別 n空白對照組 10卡托普利組 10復(fù)方丹參片組 10給藥7 d 給藥14 d 給藥35 d 停藥7 d 65.22±5.38 65.43±7.57 64.37±5.92 59.52±5.63 66.11±5.96 69.38±6.44*70.56±7.63*61.15±5.53 65.91±4.61 69.51±6.38*70.85±7.03*61.18±4.04桑芪首烏片低劑量組 10 64.91±4.42 67.45±5.73*67.94±6.41*60.63±5.99桑芪首烏片中劑量組 10 66.83±6.49 71.10±3.93*71.79±7.21*59.53±5.61桑芪首烏片高劑量組 10 67.39±7.54*72.18±6.59*72.98±5.91*59.53±5.12正常對照組 10 87.57±6.60*87.79±6.75*88.04±6.99*90.60±8.30

2.4 桑芪首烏片對大鼠血漿血管緊張素Ⅱ的影響見表4。給藥第7日，與SD正常對照組比較，SHR模型各組血漿AngⅡ明顯升高（P<0.05），而SHR大鼠各模型組之間差異無統(tǒng)計學意義 （P>0.05）；給藥第14日、35日，與空白空白組比較，卡托普利組、復(fù)方丹參片組、桑芪首烏片中、高劑量組血漿AngⅡ水平明顯降低（P<0.05）；停藥7 d后，桑芪首烏片中、高劑量組血漿AngⅡ水平仍較低（P<0.05）。

表4 各組不同時期SHR大鼠血漿血管緊張素Ⅱ水平比較（pg/mL，±s）

表4 各組不同時期SHR大鼠血漿血管緊張素Ⅱ水平比較（pg/mL，±s）

組別 n空白對照組 10卡托普利組 10復(fù)方丹參片組 10給藥7 d 給藥14 d 給藥35 d 停藥7 d 1328.64±107.78 1346.56±109.60 1316.97±118.24 1289.20±108.24 1301.86±129.11 1282.70±105.17*1211.17±83.33*1264.82±129.84 1295.18±116.15 1266.05±100.22*1180.31±84.85*1257.72±98.64桑芪首烏片低劑量組 10 1310.33±108.36 1304.10±107.92 1266.52±108.76 1248.29±105.98桑芪首烏片中劑量組 10 1299.57±120.26 1280.53±84.09*1206.96±101.84*1224.24±113.93*桑芪首烏片高劑量組 10 1287.93±120.38 1245.18±112.53*1124.69±107.28*1206.26±100.34*正常對照組 10 733.04±70.11*742.19±62.03*734.39±74.59*782.03±68.57*

3 討 論

RAS系統(tǒng)過度激活是導(dǎo)致高血壓病的一個非常重要的途徑，故抑制RAS系統(tǒng)過度激活是防治高血壓病的一種重要手段。腎素作用于血管緊張素原使血管緊張素原轉(zhuǎn)變成AngⅠ。AngⅠ在血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的作用下形成AngⅡ，AngⅡ具有很高的生物活性，包括收縮血管、升高血壓、促進心肌肥大、成纖維細胞和血管平滑肌細胞增殖等作用，最終造成心血管組織細胞的損傷，導(dǎo)致動脈粥樣硬化、高血壓和心力衰竭等多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展［5-6］。緩激肽是激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)（KKS）中的一種重要的活性物質(zhì)，通過體內(nèi)存在兩種酶降解緩激肽：激肽酶Ⅰ和激肽酶Ⅱ降解為失活片段，ACE即是激肽酶Ⅱ［7］。緩激肽具有舒張血管、調(diào)節(jié)血壓、參與心肌保護等多種生物效應(yīng)，在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的保護作用，在高血壓治療中，可能具有重要的臨床價值［8］。

云南省榮譽名中醫(yī)陸家龍主任醫(yī)師認為中醫(yī)藥治療高血壓病的思路應(yīng)遵循兩個原則：一是方藥能夠切合中醫(yī)學辨證論治的思路，二是方劑的現(xiàn)代藥理能夠作用于高血壓病的病理機制。其潛心研究的經(jīng)驗方“桑芪首烏湯”主要由桑寄生、黃芪、制首烏、鉤藤、天麻、三七等中藥組成。立法滋補肝腎、平肝息風、活血通絡(luò)［9-10］。其中桑寄生主要成分為廣寄生苷（即蒿蓄苷）、槲皮素等。新鮮葉的提取物對麻醉兔、犬靜脈注射有明顯降低血壓的作用［11］。黃芪降壓有效成分是γ0氨基丁酸及黃芪甲苷［12］，其機制可能與擴張血管、抑制RAS、激肽釋放與Ca2+內(nèi)流有關(guān)，且在降壓的過程可以改善SHR的壓力反射敏感性［13］。何首烏為蓼科植物何首烏的干燥塊根，二苯乙烯苷（TSG）是何首烏的主要成分之一，在心血管疾病治療顯示中良好的前景［14-15］。TSG本身不具有降壓效應(yīng)，但能抑制大鼠血清和主動脈中NOx（nitrate/nitrite）含量的減少，保持一氧化氮生物活性的功能，同時阻止血管內(nèi)膜重構(gòu)，提高乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮依賴性舒張［16］。鉤藤、天麻有清熱平肝，潛陽息風之功。實驗表明，天麻與鉤藤聯(lián)用，可以阻斷RASS，拮抗交感神經(jīng)系統(tǒng)活性，能有效降低血壓，改善臨床癥狀和生存質(zhì)量，顯著降低心腦血管終點事件，且兩者有效成分降壓作用可協(xié)同增效［17-19］。三七提取物具有一定的降壓作用，主要可能是直接擴張血管，其次可能是抑制血管運動中樞所致［20-21］，但目前尚需深入研究。桑芪首烏片以制首烏配伍桑寄生通補肝腎，陰陽平調(diào)，其特點是根基得固而無動風傷陰之慮。黃芪與三七共奏益氣活血通絡(luò)之功，天麻、鉤藤相伍為用，平抑肝陽。在該處方經(jīng)過了30余年的臨床觀察，具有改善癥狀快、療效持續(xù)平穩(wěn)、安全、價低等優(yōu)點，受到廣大患者的認可。

本研究表明，桑芪首烏片可明顯降低SHR大鼠血漿AngⅠ、AngⅡ水平，上調(diào)SHR大鼠血漿BK水平，推測桑芪首烏片作用有可能通過抑制腎素轉(zhuǎn)化AngⅠ，拮抗機體ACE的活性，減少AngⅡ的生成而發(fā)揮作用，提示桑芪首烏片對RAS的作用可能與多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點的綜合影響有關(guān)。其對RAS的具體作用機制和靶點尚需進一步探索。

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Effects of Sangqi Shouwu Decoction on Blood Pressure and Renin Angiotensin System in Spontaneously Hypertensive Rats

CHEN Bin，CHENG Xinyuan，WEI Danxia，et al. Kunming Hospital of TCM，Yunnan，Kunming 650500，China.

Objective：To study the antihypertensive effect of Sangqi Shouwu Decoction on hypertensive rats and its mechanism.Methods：60 SHR rats were randomly divided into low，medium and high three dose groups，captopril group and Fufang Dashen group and blank control group，10 in each group.At the same time，10 SD rats were in the normal control group.Noninvasive caudal artery BPMS was used to monitor blood pressure，as well as the change of BK，AngⅠand AngⅡ，in 24 h and on 7 d，14 d，21 d and 35 d after treatment.Results：After treatment，the systolic blood pressure of each adminstration groups was statistically significant compared with the normal contral group and the blank control group（P<0.05），but there was no statistically significant difference between the remaining groups（P>0.05）.After administration，the levels of Ang I and AngⅡin other groups were obviously lower than those in the blank control group（P<0.05），and the difference was statistically significant. After administration，the levels of BK in other groups were obviously higher than that of the SHR control group（P<0.05），and the difference was statistically significant.Conclusion：This study shows that Sangqi Shouwu Decoction can significantly reduce the levels of AngⅠand AngⅡin plasma of SHR rats and up-regulate the plasma BK level in SHR rats，suggesting that the effect of Sangqi Shouwu Decoction may inhibit the expression of AngⅠ，ACE activity，reduce the formation of AngⅡand play a role in the RAS has been a multi-channel，multilink，multi-target integrated effects.

Sangqi Shouwu Decoction；Hypertension；Renin angiotensin system；Animal experiment

R285.5

A

1004-745X（2017）08-1326-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.08.004

2017-05-31）

云南省社會發(fā)展科技計劃—中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)（云南）基地建設(shè)項目［云南民族藥名方（桑芪首烏方）成藥性評價，2012CG031］；云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃（青年項目）（2012FD098）

△通信作者（電子郵箱：1216508769＠qq.com）