樊新艷

(濮陽(yáng)市紅十字中心血站檢驗(yàn)科， 河南 濮陽(yáng) 457000)

血清學(xué)與核酸檢測(cè)在無(wú)償獻(xiàn)血血液傳染性疾病篩查中作用分析

樊新艷

(濮陽(yáng)市紅十字中心血站檢驗(yàn)科， 河南 濮陽(yáng) 457000)

目的 分析血清學(xué)與核酸檢測(cè)在獻(xiàn)血者血液傳染疾病篩查中的作用。方法 21 325份無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)HBsAg、HCV抗體、HIV抗體，ELISA雙試劑檢測(cè)蒼白球螺旋體(TP)抗體，并使用核酸檢測(cè)技術(shù)(NAT)對(duì)HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，分析上述檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 21 325份血液標(biāo)本中，血清學(xué)檢測(cè)HBsAg(+)50份，陽(yáng)性率為0.16%；HCV抗體(+)24份，陽(yáng)性率0.08%；HIV抗體(+)15份，陽(yáng)性率0.05%；NAT陽(yáng)性檢測(cè)率0.16%(35份)。其中NAT(+)HBsAg(+)檢測(cè)18份，NAT(+)HCV抗體(+)檢測(cè)6份，NAT(+)HIV抗體(+)檢測(cè)4份。結(jié)論 在“2遍ELISA+1遍NAT”模式下(除TP抗體)，ELISA和NAT檢測(cè)可以相互補(bǔ)充，不能互相替換單獨(dú)運(yùn)用，聯(lián)合檢測(cè)可保證血液安全。

血液傳染性疾??；血清學(xué)檢測(cè)；核酸檢測(cè)；血液篩查

輸血在臨床上應(yīng)用越來(lái)越廣泛，臨床對(duì)血液進(jìn)行傳染疾病篩查尤為重要。多年來(lái)，臨床血液中心普遍采用血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行疾病篩查，即檢測(cè)相應(yīng)病毒的抗體，除乙肝病毒(HBV)可使用乙肝表面抗原(HBsAg)檢測(cè)，其它病毒檢測(cè)均可采用血清學(xué)檢測(cè)[1]。隨著醫(yī)學(xué)發(fā)展，該方法的靈敏度及特異度不斷上升，但當(dāng)獻(xiàn)血者處于疾病感染的“窗口期”、病毒變異、免疫沉默及其他相關(guān)因素仍可導(dǎo)致輸血后發(fā)生感染。核酸檢測(cè)技術(shù)(nucleic acid detection technotogy，NAT)可直接檢測(cè)病原體核酸，大大縮短窗口期，保證血液安全[2]。本研究以21 325份血液標(biāo)本為研究對(duì)象，分析血清學(xué)與NAT技術(shù)在血液傳染疾病篩查的作用，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選擇2016年6月—2016年10月濮陽(yáng)市血液中心收集的無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本21 325份。

1.2 試劑與儀器 首先選用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，HBsAg試劑(法國(guó)伯樂(lè)、廈門英科新創(chuàng))，丙型肝炎病毒(HCV)抗體試劑(珠海麗珠試劑公司、北京萬(wàn)泰)，人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體試劑(珠海麗珠試劑公司、法國(guó)伯樂(lè))，TP抗體試劑(北京萬(wàn)泰、廈門英科新創(chuàng))，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑(深圳邁瑞)，所有試劑均經(jīng)過(guò)批檢并在有效期內(nèi)使用。NAT檢測(cè)采用EDTA K2抗凝BD管離心，選用乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒(1+2型)核酸檢測(cè)試劑進(jìn)行HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA三聯(lián)8樣混合核酸檢測(cè)，蘇州華益美試劑盒及對(duì)照試劑盒支持同時(shí)混樣、拆分檢測(cè)。儀器包括澳斯邦FAME全自動(dòng)酶免檢測(cè)儀、愛(ài)康全自動(dòng)酶免檢測(cè)儀、邁瑞B(yǎng)S-480全自動(dòng)生化儀、澳斯邦STAR全自動(dòng)加樣儀、澳斯邦全自動(dòng)核酸分離純化提取儀、AB7500擴(kuò)增檢測(cè)儀。

1.3 檢測(cè)方法 HBsAg、HCV抗體、HIV抗體、TP抗體均采用ELISA法，用兩種不同廠家生產(chǎn)的試劑先后進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，兩種試劑均有反應(yīng)，則報(bào)告該樣本血清學(xué)檢測(cè)雙試劑陽(yáng)性，任一試劑陽(yáng)性則用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試結(jié)果均為陽(yáng)性或單孔陽(yáng)性則報(bào)告該樣本血清學(xué)檢測(cè)單試劑陽(yáng)性，雙試劑檢測(cè)均為陰性則報(bào)告該樣本血清學(xué)檢測(cè)陰性；ALT采用速率法檢測(cè)，>50 U/L則為不合格；NAT檢測(cè)三聯(lián)8樣混合檢測(cè)，混樣標(biāo)本為陽(yáng)性時(shí)則對(duì)每份標(biāo)本進(jìn)行單檢，單檢為陽(yáng)性則判斷不合格。

2 結(jié)果

2.1 HBV、HCV、HIV血清學(xué)及NAT檢測(cè)結(jié)果 21 325份血液標(biāo)本經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果陰性21 173份，HBsAg(+)50份，陽(yáng)性率為0.16%；HCV抗體(+)24份，陽(yáng)性率0.08%，HIV抗體(+)15份，陽(yáng)性率0.05%。除去合并TP陽(yáng)性或ALT異常未參與檢測(cè)，49份HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本中，NAT(+)18份，陽(yáng)性率36.73%；21份HCV抗體(+)標(biāo)本中，NAT(+)6份，陽(yáng)性率28.57%；13份HIV抗體(+)標(biāo)本中，NAT(+)4份，陽(yáng)性率30.76%。其中21 173份血清學(xué)檢測(cè)陰性標(biāo)本行NAT檢測(cè)，顯示35個(gè)混合檢測(cè)模式(minipool)為陽(yáng)性，拆分檢測(cè)陽(yáng)性18個(gè)pool，拆分陽(yáng)性率51.43%。

2.2 血清學(xué)檢測(cè)與NAT檢測(cè)結(jié)果比較 混合樣本不同酶聯(lián)值(S/CO值)分布及NAT陽(yáng)性數(shù)值，見(jiàn)表1-3。

表1 HBsAg S/CO值與NAT結(jié)果比較

注：5.01-6.001 1例合并TP抗體陽(yáng)性未進(jìn)行NAT比較。

表2 HCV抗體 S/CO值與NAT結(jié)果比較

注：0.95-10.002 1例合并TP抗體陽(yáng)性、>15.001 2例合并ALT異常均未進(jìn)行NAT。

表3 HIV抗體 S/CO值與NAT結(jié)果比較

注：0.95-10.002 1例合并TP抗體陽(yáng)性、15.01-20.001 1例合并TP抗體陽(yáng)性未進(jìn)行NAT檢測(cè)。

3 討論

本研究根據(jù)2012年出版的《血站技術(shù)操作規(guī)程》，使用的檢測(cè)方式是“2遍ELISA+1遍NAT”，不包括TP抗體檢測(cè)。張峰等[3]通過(guò)對(duì)33 736人份血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，其中HBsAg(+)NAT(+)符合率60.5%，HCV抗體(+)NAT(+)符合率11.2%，HIV抗體(+)NAT(+)符合率30.3%，該研究依次是42.86%、28.57%、30.3%、30.76%，結(jié)果類似，但存在一定的差異，分析原因是該研究在進(jìn)行ELISA與NAT比較中剔除了不同S/CO值合并TP抗體(+)標(biāo)本，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響，但整體影響不大，說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)具有一定的可信度。 朱紹汶等[4]研究者報(bào)道南京地區(qū)的無(wú)償獻(xiàn)血中，HCV-RNA(+)39.45%，美國(guó)[5]報(bào)道為73.9%，該研究為28.57%，分析原因有以下幾種種，一是區(qū)域、環(huán)境因素，二是HCV抗體試劑檢測(cè)靈敏度過(guò)高出現(xiàn)假陽(yáng)性情況，三是獻(xiàn)血者感染過(guò)HCV，但病毒并不進(jìn)行復(fù)制，患者無(wú)癥狀，此外，還可能與檢測(cè)技術(shù)相關(guān)，核酸擴(kuò)增技術(shù)至少擴(kuò)增兩個(gè)保守基因才有可能檢測(cè)出基因突變的病原體[6]，血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果、S/CO值與NAT之間的相關(guān)性仍是醫(yī)學(xué)難題。該研究結(jié)果還顯示，HBsAg(-)、HCV抗體(-)及HIV抗體(-)中，陽(yáng)性pool 35份，有效拆分率為51.43%，劉胡敏等[7]報(bào)道有效拆分率為48.38%，劉麗等[8]報(bào)道為73.1%，均證明NAT可有效提高血液安全性。

綜上，本研究沒(méi)有分析因病毒載量低或假陽(yáng)性的情況，存在一定的誤差，但整體研究具有一定的可靠性，充分證實(shí)血清學(xué)與核酸檢查兩種技術(shù)均具有一定的重要性，其中核酸檢查較血清學(xué)檢測(cè)具有更高的靈敏度。

[1] 于志軍,鄧雪蓮,高慧卉,等.血清學(xué)檢測(cè)與核酸檢測(cè)在獻(xiàn)血者血液篩查中的相關(guān)性研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,21(5):532-534.

[2] 馮秋霞,許雷,楊忠思,等.青島地區(qū)核酸檢測(cè)在血液篩查中的應(yīng)用研究[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(7):632-634.

[3] 張鋒,張瓊,林碧,等.血清學(xué)聯(lián)合核酸檢測(cè)在獻(xiàn)血者血液篩查中的互補(bǔ)性[J].中國(guó)艾滋病性病,2016,22(3):197-199.

[4] 朱紹汶,陳顯,王金花,等.2011—2012年南京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群丙型肝炎病毒感染情況分析[J].臨床血液學(xué)雜志:輸血與檢驗(yàn),2013,26(10):718-720.

[5] Egli A,Binet I,Binggeli S,et al.Cytomegalovirus-specific T-cell responses and viral replication in kidney transplant recipients[J].Journal of Translational Medicine,2008,6(1):1507.

[6] 蔡麗娜,陳寶安.核酸擴(kuò)增技術(shù)(NAT)在獻(xiàn)血者血液初篩中的應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2014,22(4):1171-1177.

[7] 劉胡敏,陶傳敏,高加良,等. ELISA結(jié)合核酸檢測(cè)技術(shù)對(duì)獻(xiàn)血者作血液篩查結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(5):456-458.

[8] 劉麗,楊忠思,單玉.血液檢測(cè)新模式在無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用分析[J].中國(guó)輸血雜志,2015,28(3):304-306.

[責(zé)任編輯：張亞光]

2016-12-23

樊新艷(1985-)，女，河南省長(zhǎng)垣縣人，本科，主管技師，從事檢驗(yàn)工作。

R 446.1

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1008-9276(2017)05-0496-02