杜 蒙 王啟迪 王玉婷 安麗莎 曹小芳 邱 月 高 丹 郭昌龍＊馬 旭＊

1.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院（100730）；2.國家衛(wèi)生計生委科學(xué)技術(shù)研究所；3.中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院

rs2507800、rs4880、rs1799895單核苷酸多態(tài)性與中國東北地區(qū)漢族婦女子癇前期相關(guān)性研究

杜 蒙1，2王啟迪2王玉婷3安麗莎2曹小芳2邱 月1，2高 丹2郭昌龍2＊馬 旭1，2＊

1.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院（100730）；2.國家衛(wèi)生計生委科學(xué)技術(shù)研究所；3.中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院

目的：探討Ang－1rs2507800、SOD2rs4880及SOD3rs1799895多態(tài)性與中國東北地區(qū)漢族婦女子癇前期（PE）是否存在關(guān)聯(lián)。方法：采用飛行時間質(zhì)譜對181例PE患者（病例組）及203例健康孕婦（對照組）的上述3個位點進行分型，分型結(jié)果采用SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：病例組與對照組rs2507800、rs4880、rs1799895等位基因頻率和基因型頻率均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。對rs2507800、rs4880分別在顯性、隱性模型下進行分析，兩組仍無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論：rs2507800、rs4880、rs1799895多態(tài)性與PE不相關(guān)。

子癇前期；ANG－1基因；SOD2基因；SOD3基因；單核苷酸多態(tài)性

子癇前期（PE）發(fā)生于妊娠期20周后，以新發(fā)高血壓和蛋白尿為發(fā)病特征。PE被認為是一種胎盤源性疾病，發(fā)病機制目前尚不清楚，多數(shù)學(xué)者認為是由于滋養(yǎng)細胞侵入子宮肌層不足，螺旋動脈重塑障礙，導(dǎo)致胎盤缺血、缺氧，多種胎盤源性不良因子進入母體血液循環(huán)，引起系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)，造成血管內(nèi)皮損傷，引發(fā)各種臨床癥狀［13］。PE的病理過程涉及遺傳因素、免疫因素、生理因素及環(huán)境因素［4］，發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是母體全身彌漫性血管內(nèi)皮細胞的激活及損傷［5］。胎盤或母體血清中血管生成因子及抗血管生成因子的相對平衡對維持血管內(nèi)皮的正常十分重要［6］。有研究報道PE患者胎盤及血清中血管生成素1（Ang－1）的表達降低［7］，其次，位于Ang－1基因3＇－UTR miRNA－211靶位點的SNP位點rs2507800可影響該基因的表達［8］，并且rs2507800 TT基因型頻率在PE患者中降低，提示該位點與PE之間存在關(guān)聯(lián)［9］。超氧化物歧化酶（SODs）是機體內(nèi)的抗氧化酶類，參與體內(nèi)氧自由基的清除，可分為三類：SOD1、SOD2、SOD3［10］。多項研究表明PE患者較正常孕婦胎盤及血清中氧化應(yīng)激水平發(fā)生了明顯變化［1113］。rs4880位于SOD2線粒體定位序列，可影響酶的活性［1415］。該位點與中國漢族人群TD2M相關(guān)［16］，并且在羅馬尼亞人群中的rs4880與PE相關(guān)［17］。rs1799895是位于SOD3肝素結(jié)合域的多態(tài)位點，甘氨酸（Gly）取代精氨酸（Arg）時可改變SOD3的分布，使其從脈管組織轉(zhuǎn)移到細胞外液（如血漿）中［18］。SOD3基因多態(tài)性還與腦梗、原發(fā)性高血壓存在關(guān)聯(lián)［1920］?；谝陨涎芯浚狙芯繉ng－1rs2507800、SOD2rs4880及SOD3 rs1799895多態(tài)性與中國東北地區(qū)漢族妊娠期婦女PE的相關(guān)性進行了研究。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2012年10月－2013年6月在中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科住院治療的PE患者181例（病例組）及同期健康孕婦203例（對照組）為研究對象，均來自于中國東北地區(qū)（黑龍江、吉林、遼寧?。±M包括輕度PE患者97例，重度PE患者84例。所有研究對象均無酗酒、吸煙不良嗜好，無先天性疾病，無慢性高血壓、腎功不全及糖尿病史。本研究經(jīng)國家衛(wèi)生計生委科學(xué)技術(shù)研究所倫理委員會審查通過，均與研究對象簽訂知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取 抽取外周血于EDTA抗凝管中，暫存于－20℃，利用蛋白酶K－SDS－酚／氯仿法抽取基因組DNA，利用Nanodrop 2000測定DNA濃度及純度，－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 基因分型 根據(jù)rs2507800（Ang－1）、rs4880（SOD2）、rs1799895（SOD3）位點信息，采用Sequenom公司Assay Designer3.1軟件包設(shè)計擴增及延伸引物。應(yīng)用飛行時間質(zhì)譜對樣本進行基因分型［21］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS12.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗。各組基因型分布和等位基因頻率比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。通過計算比值比（OR）和95%置信區(qū)間（95%CI），評價相關(guān)性。哈迪－溫伯格平衡（HWE）檢驗利用OEGEHWE calculator計算，P＞0.05時滿足HWE。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較

病例組患者年齡、初產(chǎn)比率、收縮壓（1mmHg＝0.133kPa）、舒張壓、產(chǎn)次、分娩孕周與對照組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組研究對象臨床資料比較

2.2 rs2507800、rs4880、rs1799895位點分型結(jié)果

由分型結(jié)果可知rs2507800、rs4880、rs1799895在對照組和病例組中的分型成功率分別為89.7%、94.5%，89.2%、96.1%，94.1%、97.2%。對照組中3個位點的基因型分布滿足哈迪－溫伯格平衡（P＞0.05）。經(jīng)卡方檢驗，rs2507800、rs4880、rs1799895等位基因頻率及基因型頻率兩組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。對rs2507800及rs4880分別在顯性、隱性模型下進行分析，兩組仍無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），見表3。

表2 兩組rs2507800、rs4880、rs1799895位點的等位基因頻率和基因型頻率比較

表3 兩組rs2507800、rs4880位點的顯性及隱性遺傳模型分析

3 討論

本研究對Ang－1、SOD2、S0D3基因上的3個多態(tài)位點rs2507800、r4880、rs1799895與中國東北地區(qū)漢族婦女PE之間的關(guān)系進行了初步探討。結(jié)果表明在病例組和對照組中這3個位點的等位基因及基因型頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，說明在本研究人群中這3個位點與PE不相關(guān)。

PE的發(fā)生涉及遺傳、免疫、氧化應(yīng)激及環(huán)境等多種因素的相互作用。Ang－1是一種分泌型糖蛋白，與Ang－2、Ang－3、Ang－4同屬于血管生成素家族的成員，表達于血管重塑明顯的器官，如胎盤、子宮、卵巢等［22］。其受體為內(nèi)皮細胞特異性酪氨酸激酶受體Tie－2。Angs／Tie系統(tǒng)在調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞存活、血管成熟及穩(wěn)定方面發(fā)揮重要作用［23］。在小鼠模型中發(fā)現(xiàn)Ang－1或Tie－2基因純和缺失的小鼠在胚胎發(fā)育的第11天左右死亡；胚胎血管重塑缺陷；內(nèi)皮細胞與血管周圍細胞的聯(lián)系異常［24］。Ang－2基因過表達的小鼠與Ang－1或Tie－2基因缺失的小鼠有相似的表型，在出生前即死亡［25］，這說明Ang－1與Ang－2的作用方式不同［23］。Ang－1通過募集周圍內(nèi)皮細胞并與之作用來促進內(nèi)皮細胞重組，維持血管結(jié)構(gòu)的完整性，并且可以抑制血管內(nèi)皮屏障的激活，降低炎性介質(zhì)的轉(zhuǎn)移及滲漏。Ang－2作為Ang－1的拮抗劑與Tie－2結(jié)合發(fā)揮作用。Ang－2可以打破內(nèi)皮細胞與血管周圍細胞之間的聯(lián)系，促進細胞的凋亡及血管退化，并且可以促進內(nèi)皮細胞對炎癥因子的響應(yīng)能力［26］。在妊娠早期的胎盤中即有Ang－1、Ang－2的表達，隨著妊娠進展，Ang－1的表達呈增加趨勢而Ang－2及Tie－2的表達呈降低趨勢。有多項研究比較了PE患者與正常妊娠期婦女胎盤及血清中Ang－1、Ang－2及Tie－2的表達水平，但因樣本量較小等問題所得結(jié)果不一致［27］。Bi等［28］研究得知腎小球內(nèi)皮細胞中，Ang－2可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生及細胞凋亡，而Ang－1可通過Tie－2／ERK1／2－p38MAPK信號通路來降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對內(nèi)皮細胞的損傷。Chen等［8］證實了位于Ang－1基因3＇－UTR的多態(tài)位點rs2507800基因型TT可降低中風發(fā)生風險。Prabha等［9］證實了rs2507800基因型TT在PE患者中的頻率較正常對照組降低，這與本研究中得到結(jié)論不一致。

氧化應(yīng)激與PE的發(fā)病密切相關(guān)。氧化應(yīng)激可觸發(fā)白細胞、血小板在內(nèi)皮的黏附，以及細胞因子、抗血管生成因子的釋放［29］。正常情況下，體內(nèi)產(chǎn)生的過量的自由基可以由體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)清除。SODs可催化超氧陰離子為H2O2和H2O。超氧陰離子是其它活性氧生成的基礎(chǔ)［30］。另外，NO具有抗炎、抗凝、舒張血管的作用，而超氧陰離子可迅速滅活NO，形成更穩(wěn)定氧化能力更強的過氧亞硝基（ONOO－），氧自由基及硝基自由基會造成脂質(zhì)、DNA、蛋白質(zhì)過氧化，進而造成血管內(nèi)皮及線粒體功能紊亂［31］。所以，及時清除機體內(nèi)多余的超氧陰離子十分重要。PE患者較正常孕婦胎盤及血清中氧化應(yīng)激水平發(fā)生了明顯變化。Bakacak等［11］研究發(fā)現(xiàn)PE患者血清中氧化應(yīng)激標志物丙二醛（MDA）水平顯著增高而SOD活性顯著低于正常孕婦組。Yan等［12］在對中國漢族人群PE患者胎盤組織的研究也支持這一結(jié)論。另外，與上述結(jié)論不一致，Das等［13］測定了50例PE患者及50例健康孕婦胎盤及血清中氧化應(yīng)激水平指標TBARS、GSH含量及SOD活性，結(jié)果顯示胎盤及血清中TBARS、SOD活性PE組較對照組明顯升高，GSH含量在兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Zhang等［32］研究了抗氧化酶Cu／Zn－SOD、MnSOD、GSTM1、GSTT1多態(tài)性與PE的關(guān)系，胎盤組織中相應(yīng)的酶活性，并且測定了胎盤及母體血漿氧化應(yīng)激標志物8－異前列腺素水平，結(jié)果顯示胎盤Cu／Zn－SOD、MnSOD、GSTM1、GSTT1多態(tài)性與PE不相關(guān)且胎盤組織中各個酶活性較對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。Kim等［33］在韓國人群中研究了母體氧化應(yīng)激相關(guān)基因多態(tài)性與PE的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)rs4880與PE不相關(guān)。而一項在羅馬尼亞婦女中進行的研究顯示rs4880及rs1799895與PE相關(guān)［17］，這與在本人群中得到的結(jié)論不一致。

綜合上述各研究結(jié)果，ANG－1、SOD2、SOD3在PE發(fā)病過程中發(fā)揮著重要的作用，但它們的作用方式可能涉及多層次，而不僅僅受基因本身多態(tài)性的影響。本研究未發(fā)現(xiàn)ANG－1、SOD2、S0D3多態(tài)位點rs2507800、rs4880、rs1799895與中國東北地區(qū)漢族婦女PE之間存在相關(guān)性。不同研究結(jié)果的差異一方面可能是由于不同種族之間存在遺傳背景的差異，同種疾病可能與同一基因中不同的SNP位點關(guān)聯(lián)；另一方面可能是由于PE是一種異質(zhì)性很強的復(fù)雜疾病，發(fā)病涉及母體、胎盤、胎兒等眾多因素的相互作用，而基因的多態(tài)性可能在PE的發(fā)生過程中僅僅起到微弱的作用。因此，仍需要在大樣本，不同種族中研究ANG－1、SOD2、SOD3不同多態(tài)位點與PE的關(guān)系。

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［責任編輯：張 璐］

Study of the correlation between rs2507800，rs4880，rs1799895 and preeclampsia in Han Chinese women from northeastern China

DU Meng1，2，WANG Qidi2，WANG Yuting3，AN Lisha2，CAO Xiaofang2，QIU Yue1，2，GAO Dan2，GUO Changlong2＊，MA Xu1，2＊
1.Graduate School of Peking Union Medical College，Beijing，100730；2.National Research Institute for Family Planning；3.Shengjing Hospital of China Medical University.
＊

MA Xu，E，xumagroup＠163c.om；GUO Changlong，guochanglong723＠aliyunc.om

Objective：To explore whether ANG1rs2507800，SOD2rs4880and SOD3rs1799895associate with preeclampsia（PE）in Han Chinese women from northeastern China.Methods：The three single nucleotide polymorphisms in ANG1，SOD2and SOD3of 181pregnant women with PE and 203healthy pregnant women were genotyped by the Time of Flight Mass Spectrometry，and the results were analyzed by SPSS12.0.Results：There were no significant difference in allele frequency and genotypic distribution of the three SNPs between pregnant women with PE and healthy pregnant women（P＞0.05）.Significant differences were not observed in both dominant and recessive models for analyzing rs2507800and rs4880（P＞0.05）.Conclusion：rs2507800，rs4880and rs1799895are not associated with PE in Han Chinese women from northeastern China.

Preeclampsia；ANG 1gene；SOD2gene；SOD3gene；Single Nucleotide Polymorphisms

10.3969／j.issn.1004－8189.2017.04.003

2016－09－27

2016－11－09

＊通訊作者：guochanglong723＠aliyun.com