郭繪芳

（太原市太航醫(yī)院，山西太原030006）

國產(chǎn)化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測AFP的性能評價

Performance evaluation of domestic chemiluminescence immunoassay system for AFP

郭繪芳

（太原市太航醫(yī)院，山西太原030006）

目的：探討不同化學發(fā)光檢測系統(tǒng)測定甲胎蛋白（AFP）結(jié)果的可比性，探討不同檢測系統(tǒng)的臨床適用性。方法：依據(jù)美國臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）EP9-A2文件的規(guī)定，以羅氏cobas-e601電化學發(fā)光免疫分析儀檢測結(jié)果為參比系統(tǒng)（X），以邁瑞CL-2000i全自動化學發(fā)光免疫分析儀測試結(jié)果為待對比系統(tǒng)（Y），通過檢測AFP指標，對兩套系統(tǒng)結(jié)果進行對比分析和偏倚評估。結(jié)果：兩檢測系統(tǒng)對AFP的檢測結(jié)果具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)大于0.95；預期偏差均在可接受范圍內(nèi)，具有良好的一致性。結(jié)論：國產(chǎn)邁瑞CL-2000i全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測AFP能夠滿足臨床需要，可以推廣應(yīng)用。

甲胎蛋白；化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)；性能評價

甲胎蛋白（AFP）是一種糖蛋白，正常情況下低濃度AFP存在于成人體內(nèi)，是一種常見的腫瘤標志物［1］。對于原發(fā)性肝癌來說，70%～95%患者的AFP升高，所以AFP是早期診斷最敏感、最特異的指標，其需要較高特異性的確定試驗來完成相對低特異性的AFP檢測［2］。目前臨床試驗越來越重視AFP項目結(jié)果的準確性，實驗室大多采用國外的檢測系統(tǒng)，但其檢測成本高昂，如何利用高性價比的檢測系統(tǒng)更好地服務(wù)于臨床工作還需要不斷探討。

本次研究參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會（NCCLS）指南中EP9-A2文件要求分析評價，檢測指標AFP并對檢測結(jié)果進行驗證分析和偏倚評估，比較國產(chǎn)邁瑞CL-2000i全自動化學發(fā)光免疫分析儀與進口羅氏cobas-e601電化學發(fā)光免疫分析儀兩種檢測系統(tǒng)的優(yōu)良，探討不同檢測系統(tǒng)的臨床適用性。

1 材料與方法

1.1 樣本來源

樣本來源于本院健康體檢及腫瘤病患。采集樣本為受檢者當天新鮮血液，采集待凝集后完全分離血清，無溶血、脂血，分裝2份，在2 h內(nèi)完成操作。按照EP9－A2文件中方法對比實驗數(shù)據(jù)分布建議，其濃度選擇需涵蓋正常參考區(qū)間和異常高值，濃度控制在分析方法線性范圍內(nèi)。

1.2 分析系統(tǒng)

參比檢測系統(tǒng)（X）：羅氏cobas-e601電化學發(fā)光免疫分析儀，配套各項目檢測試劑、校準品和質(zhì)控品。對比檢測系統(tǒng)（Y）：邁瑞CL-2000i全自動化學發(fā)光免疫分析儀，配套各項目檢測試劑、校準品和質(zhì)控品。

1.3 檢測方法

1.3.1 精密度檢測 參考CLSI EP9－A2文件［6］檢測總精密度：取出質(zhì)控品（低值和高值）同時段內(nèi)在兩種分析系統(tǒng)進行指標檢測，連續(xù)檢測20 d。檢測其批內(nèi)精密度：取出質(zhì)控品（低值和高值）同時段內(nèi)在兩種分析系統(tǒng)進行指標檢測，每天測定2批，2批間隔時長超過2 h，每個檢測對象需重復檢測20次，測試結(jié)果滿足質(zhì)控靶值范圍需求。記錄總精密度和批內(nèi)精密度的均值、標準差和CV等統(tǒng)計指標。

1.3.2 比對試驗和線性回歸 收集新鮮病人血清，選擇均勻分布在測量范圍內(nèi)的樣本濃度，在2 h內(nèi)完成邁瑞系統(tǒng)和羅氏系統(tǒng)的檢測，受試樣本重復2次操作取均值。嚴格按照廠商說明書，在試驗前對各儀器進行全面維護和校準；嚴格執(zhí)行實驗室內(nèi)質(zhì)控，在可控時進行標本檢測。以羅氏cobas-e601電化學發(fā)光免疫分析儀檢測結(jié)果為參比系統(tǒng)（X），以邁瑞CL-2000i全自動化學發(fā)光免疫分析儀測試結(jié)果為待對比系統(tǒng)（Y），進行統(tǒng)計分析得到線性回歸方程以及相關(guān)系數(shù)。

1.3.3 離群值檢測 方法內(nèi)和方法間進行離群值的檢查，按照EP9－A2文件要求操作。方法內(nèi)離群值：根據(jù)每臺系統(tǒng)上的樣本雙份測定結(jié)果，計算平均值和絕對差值，以平均絕對差值的4倍為界限，超出界值定義為離群值。方法間離群值：根據(jù)方法間成對測定結(jié)果，計算平均值和絕對差值，以平均絕對差值的4倍為界限，超出界值定義為離群值。允許從分析數(shù)據(jù)中刪除2.5%的離群值，若離群值超過2.5%則需檢查原因并重新采集數(shù)據(jù)。

1.3.4 X測定范圍的檢驗 計算相關(guān)系數(shù)來粗略判斷取值范圍是否合適。當（或）認為取值范圍適當，斜率和截距通過線性回歸方程得出。如果相關(guān)系數(shù)不滿足上述條件，則需要加大樣本量來擴大數(shù)據(jù)濃度分布范圍。

1.3.5 偏倚評估及可接受性能判斷 偏倚評估中涉及與可接受性能判斷之間相應(yīng)的預期偏倚和相對偏倚，是由研究給定的醫(yī)學決定水平濃度代入回歸方程得出。鑒于不同檢測系統(tǒng)間比對的有關(guān)臨床可接受性能的統(tǒng)一判斷標準在國際上還沒有共識，我們按照澳大利亞室間質(zhì)評標準的靶值± 20%的診斷標準［3］，判斷不同檢測系統(tǒng)的測定結(jié)果是否具有可比性，其偏倚是否可接受。

1.3.6 一致性評價 邁瑞系統(tǒng)和羅氏系統(tǒng)分別使用系統(tǒng)各自的參考范圍來確定陰性和陽性，統(tǒng)計其對應(yīng)的陽性和陰性一致率、總一致率等流行病學指標，假設(shè)檢驗使用McNemar配對卡方檢驗，對兩種方法臨床測定結(jié)果進行一致性評價。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 19.0，對試驗數(shù)據(jù)進行回歸與相關(guān)性分析，得出線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，其一致性比較采用Kappa值進行描述。當R＞0.90，可認為兩種檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果相關(guān)性良好。

2 結(jié)果

2.1 精密度評價

比對試驗數(shù)據(jù)真實可靠，AFP在兩種檢測系統(tǒng)的總精密度和批內(nèi)精密度測定結(jié)果均滿足本實驗室對精密度評價的要求。國產(chǎn)邁瑞CL-2000儀器性能表現(xiàn)良好，與羅氏水平相當。結(jié)果見表1。

表1 甲胎蛋白（AFP）在兩種檢測系統(tǒng)的精密度測定結(jié)果 （%）

2.2 離群值檢驗

在兩臺系統(tǒng)顯示的甲胎蛋白（AFP）測值，方法內(nèi)和方法間測定結(jié)果均無出現(xiàn)離群點，其絕對差值和相對差值均在平均絕對差值的4倍范圍內(nèi)。

2.3 回歸分析與相關(guān)性分析

回歸方程為：Y=1.138X+0.233 6，相關(guān)系數(shù)為0.993 2，大于0.975，取值范圍合適。

2.4 偏倚評估

與之間對應(yīng)的預期偏倚和相對偏倚均在允許偏倚之內(nèi)，偏倚可被接受，試驗方法正確度的性能得到驗證。結(jié)果見表2。

表2 甲胎蛋白（AFP）在兩種檢測系統(tǒng)的偏倚評估

2.5 一致率比較

將羅氏和邁瑞系統(tǒng)同時測定270例樣本，計算兩個檢測系統(tǒng)結(jié)果的一致率并對測定結(jié)果差異的顯著性進行McNemar配對卡方檢驗；統(tǒng)計得出陰性一致率為99.17%、陽性一致率為98.67%以及總一致率為98.89%。McNemar配對卡方檢驗表明，按水平，差異無統(tǒng)計學意義，可認為兩種方法臨床測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表3。

表3 甲胎蛋白（AFP）在兩種檢測系統(tǒng)的一致率比較

3 討論

甲胎蛋白在正常人體內(nèi)劑量很低，一般小于20 ng/mL，當AFP一直超過400 ng/mL時，被作為判斷肝癌的檢測指標。目前實驗室用放射免疫法、酶聯(lián)免疫法和化學發(fā)光法等方法對AFP這類腫瘤標志物進行檢測，而近些年化學發(fā)光免疫分析在其中逐漸得到更多重視［4］。目前在臨床實驗室內(nèi)采用的檢測系統(tǒng)中進口系統(tǒng)所占比重巨大，雖然其各項性能優(yōu)異，但這些儀器與對應(yīng)進口試劑配套，必須相互使用缺一不可，導致耗材成本高昂，不可避免產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟負擔，并不利于在國內(nèi)的普及和推廣。所以值得我們關(guān)注的課題是同一份樣本在進口和國產(chǎn)的不同發(fā)光免疫系統(tǒng)測定的結(jié)果是否存在差異，是否有可比性。

與進口羅氏分析系統(tǒng)比對結(jié)果顯示，兩套檢測系統(tǒng)的比對試驗數(shù)據(jù)真實可靠，數(shù)據(jù)分布均勻通過離群值檢測。從精密度評價結(jié)果來看符合腫瘤標志物臨床應(yīng)用的指導原則中對精密度的基本要求，檢測指標的總精密度和批內(nèi)精密度的CV均不超過10%。在評價低、中、高濃度水平的AFP的預期偏差均在可接受范圍內(nèi)，偏倚是可接受的。我們的研究結(jié)果表明兩檢測系統(tǒng)對AFP的檢測結(jié)果具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)大于0.95；測定甲胎蛋白陽性樣品一致率98.67%，陰性樣品符合率99.17%，總符合率達98.89%，羅氏和邁瑞系統(tǒng)檢測結(jié)果的一致性強度結(jié)果滿足條件。

研究顯示對于AFP，國產(chǎn)電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已具備與進口產(chǎn)品競爭市場的水平，機器性能穩(wěn)定精準表現(xiàn)良好，能夠滿足臨床上對腫瘤標志物的監(jiān)測需要。國產(chǎn)儀器經(jīng)過自我的創(chuàng)新，在吸收國外先進儀器的精華同時，嚴格把控質(zhì)量提高服務(wù)，在醫(yī)療檢測儀器中逐漸擁有一席之地。此外與進口儀器和試劑相比，鑒于其成本低廉，對基層醫(yī)院病人檢測以及健康人群的體檢普查等項目更適合推廣使用［5］。因此，國產(chǎn)化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)的甲胎蛋白項目在臨床實驗室檢測中前景光明。

［1］常彬霞，辛紹杰.甲胎蛋白及其臨床應(yīng)用研究進展［J］.世界華人消化雜志，2010（6）：576-580.

［2］戴志文，蔡祥霞，楊湘越，等.甲胎蛋白化學發(fā)光免疫定量檢測試劑的研制與臨床應(yīng)用［J］.實驗與檢驗醫(yī)學，2014（2）：121-123.

［3］陳巖松，陳燕，胡敏華，等.羅氏Modular E170與Cobase e601電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測血清甲胎蛋白的比對分析［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2012（16）：1 974-1 976.

［4］肖勤，林金明.化學發(fā)光免疫分析方法的應(yīng)用研究進展［J］.分析化學，2015（6）：929-938.

［5］薛恒，饒冬東，陳登鍇，等.國產(chǎn)洪誠免疫分析系統(tǒng)與雅培ARTITECT i2000SR分析系統(tǒng)對腫瘤標志物檢測結(jié)果的比較分析［J］.中國當代醫(yī)藥，2012（31）：92-94.

（編輯：翟春濤）

R735.7

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1671-0258（2017）04-0057-03

郭繪芳，副主任檢驗師，E-mail：13303518716@163.com