溫福欣

(丹東市林業(yè)科學研究院，遼寧丹東118000)

日本小菊組培技術(shù)的研究

溫福欣

(丹東市林業(yè)科學研究院，遼寧丹東118000)

以日本小菊花蕾為外植體，研究了外植體誘導、擴繁、生根、煉苗的最佳培養(yǎng)條件。結(jié)果表明，最佳消毒處理為75%酒精30s+0.1% HgCl26min，污染率低至3.8%；初代培養(yǎng)的最佳激素配比為MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L，萌發(fā)率達到88.2%，平均株高達2.4cm；增殖培養(yǎng)的最佳激素配比是MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.05mg/L，平均株高達2.8cm，增殖系數(shù)達9。生根培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.15mg/L，生根率達96.0%。

日本小菊；初代培養(yǎng)；增殖培養(yǎng)

日本小菊是菊花[Dendranthemamorifolium(Ramat. ) Tvzel.] 中的一類地被型矮生小菊，植株矮小，花色豐富、花多而密、矮生、花期長,色彩絢麗,開花熱烈,也是極好的盆栽觀賞花卉。本試驗以日本小菊花蕾為外植體進行離體培養(yǎng)試驗,目的在于探尋一種快速高效的繁殖新途徑。花型多樣，色彩繁多，在切花、園林、城市綠化等方面廣泛應用，深受人們喜愛。但宿根花卉的繁殖速度較慢，很難滿足市場需求，組織培養(yǎng)因具有繁殖率高、生長周期短以及培養(yǎng)條件可以人為控制等特點，能夠在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量的試管苗[1-2]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

春季取日本小菊尚未完全開放的花蕾。

1.2 消毒方法

將花蕾剪下放在自來水下沖洗30min，置于超凈工作臺上，采用75%酒精和0.1%HgCl2進行消毒處理，75%酒精處理30s，0.1%HgCl2處理分別為4、6、8、10 min，最后用無菌水沖洗5～7次。

1.3 培養(yǎng)方法

1.3.1 初代培養(yǎng)。花蕾消毒后, 根據(jù)花蕾大小將其切割成2半或4半，再接種于培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在無菌環(huán)境中將其接種于如表2所示的10種培養(yǎng)基中，每個處理3次重復，每個重復接種6瓶，1瓶接種2個，觀察腋芽萌發(fā)及生長情況。

1.3.2 增殖培養(yǎng)。待莖段腋芽伸長生長至4～5cm后，將其從基部剪下，剪成長約1.5cm左右的1芽1葉1段，分別轉(zhuǎn)接于如表3所示的9種培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，每個處理3次重復，每個重復接種6瓶，每瓶接種4～6個。

1.3.3 生根培養(yǎng)。將高度5cm以上的健壯植株剪取接入如表3所示的3種生根培養(yǎng)基中，每個處理3次重復，每個重復接種6瓶，每瓶接種2個。

1.3.4 煉苗移栽。移栽前，將生根后的試管苗培養(yǎng)瓶移入到大棚內(nèi)，先適應大棚內(nèi)光照和溫度，并逐漸打開培養(yǎng)瓶蓋，使其適應大棚內(nèi)濕度。3d 左右取出健壯的生根苗，用清水洗凈培養(yǎng)基，在溫室內(nèi)移栽到配好的基質(zhì)中。

1.3.5 培養(yǎng)條件。白天溫度25±1℃，夜間溫度20±1℃，光周期(光照/黑暗)14h/10h，光強2000～3000 lx。初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA、NAA、IBA，蔗糖30 g/L，瓊脂7.5g/L，pH值調(diào)至6.0，生根培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基，添加不同濃度的IBA和NAA，其它條件不變。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同滅菌處理對材料的影響

表1 不同處理外植體的滅菌表現(xiàn)

在接種后第7～9d，滅菌不徹底的外植體陸續(xù)出現(xiàn)污染現(xiàn)象。從表1可以看出，處理4污染率最小為0，處理3和處理2次之，污染率分別為2.5%和3.8%，但是處理3和處理4由于HgCl2處理時間稍長，出現(xiàn)了褐化現(xiàn)象，另外兩個處理無褐化現(xiàn)象，結(jié)合以上兩項指標發(fā)現(xiàn)處理2即75%酒精30s+0.1% HgCl26min污染率3.8%，無褐化現(xiàn)象，為最佳消毒方法。

2.2 外植體的誘導

外植體在芽誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)1周后基部開始膨大，第12d花藥部分變大變綠；約15d后花蕾陸續(xù)長出綠色小芽。誘導培養(yǎng)30d后觀察結(jié)果見表2。

表2 不同激素濃度外植體誘導的影響

從表2可以看出不同濃度的6-BA、NAA和IBA均能誘導花蕾萌發(fā)出芽苗，且萌發(fā)率在70%以上；6-BA、NAA激素組合較6-BA、IBA激素組合芽萌發(fā)較快，萌芽長勢較好，且芽苗較高、壯，其中6-BA1.5mg/L，NAA0.1 mg/L的誘導效果最好，萌發(fā)率達到88.2%，平均株高達2.4cm，所以最適宜日本小菊花蕾誘導的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5mg/L+NAA0.1mg/L。

2.3 繼代增殖

誘導培養(yǎng)30d后瓶內(nèi)產(chǎn)生大量叢生芽，待芽長至3～4cm剪出接入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)1周后，腋芽開始萌發(fā)，第30d觀察記錄生長情況，每個激素組合隨機抽取6瓶測量株高，計算增值系數(shù)，結(jié)果見表3。

表3 不同激素濃度對芽苗增殖的影響

由表3可以看出， 6-BA濃度低于0.5mg/L時，長勢較快，芽苗較壯，單株生長，無從生現(xiàn)象；6-BA濃度高于0.5mg/L時，植株長勢緩慢，芽苗較弱，葉小，易叢生；6-BA為0.5mg/L時，長勢較快，芽苗較壯，叢生芽較多，增值系數(shù)較高，其中6-BA0.5mg/L，NAA0.01 mg/L，平均株高2.8cm，增值系數(shù)達9，表現(xiàn)較好。綜上所述最適宜日本小菊增殖的培養(yǎng)基是MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA0.01 mg/L。

2.4 生根培養(yǎng)

當芽苗長至5cm時，剪出接入生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)一周后，芽苗基部陸續(xù)出現(xiàn)白色細長的根。20d后，每個處理隨機抽取6瓶測量根長、生根條數(shù)，統(tǒng)計根系生長情況見表4。

表4 不同處理對苗木根系生長情況的影響

由表4可以看出IBA濃度為0.15mg/L時生根率最高，達96.0%，平均根條數(shù)為8條，所以最適日本小菊生根的培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.15mg/L。

2.5 煉苗

煉苗移栽基質(zhì)為1∶4的珍珠巖和草炭土，將組培苗移栽至配好的基質(zhì)中，棚內(nèi)溫度控制在15～28℃，濕度控制在70%以上，定期澆施殺菌劑。15d后觀察記錄，移栽苗的成活情況，成活率為95%以上，且成活的日本小菊長勢良好。

3 結(jié)論與討論

以日本小菊花蕾為外植體，研究了外植體誘導、擴繁、生根、煉苗的最佳條件。結(jié)果表明，最佳消毒處理為75%酒精30s+0.1% HgCl26min，污染率低至3.8%；初代培養(yǎng)的最佳激素配比為MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L，萌發(fā)率達到88.2%，平均株高達2.4cm；增殖培養(yǎng)的最佳激素配比是MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.05mg/L，平均株高達2.8cm，增殖系數(shù)達9。生根培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.15mg/L，生根率達96.0%。

日本小菊具有抗性強、花色豐富、花量大，花期集中且時間長、株型矮且緊湊、管理粗放、適合露地栽植的特點，非常適于在當前水資源日益緊張的情況下作為城市美化和綠化的優(yōu)選素材[3-4]，本研究為日本小菊快速繁殖以滿足市場需求奠定了基礎(chǔ)。

圖2 芽苗生根培養(yǎng)(立面圖)(1/2MS+0.15mg/L IBA)

圖3 芽苗生根培養(yǎng)(底面圖)(1/2MS+0.15mg/L IBA)

[1]陳龍清. 日本早小菊的組織培養(yǎng)及玻璃苗防治[J].華中農(nóng)業(yè)大學學報，1995，14(3): 272-274.

[2]馮慧. 北京小菊組織培養(yǎng)和再生體研究[J]. 北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院學報，2006,20(3): 11-13.

[3]齊向英. 菊花組織培養(yǎng)研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2009 (5): 63-64.

[4]劉悅明. 日本小菊引種栽培試驗及推廣應用[J].廣東園林,1996 (4): 31-32.

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2017.04.016

S682.1+1

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溫福欣(1989-)，女，助理工程師，主要從事林業(yè)組培技術(shù)研究，E-mail：nmgnydx132@163.com。