陳 露，張曉萌，林秋婕，陳贊民

（海南省藥品檢驗(yàn)所，海南 ?？?570216）

指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的研究進(jìn)展

陳 露，張曉萌，林秋婕，陳贊民

（海南省藥品檢驗(yàn)所，海南 ?？?570216）

中藥指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的運(yùn)用越來越廣泛。文章概述了中藥指紋圖譜的概念、特點(diǎn)，并對(duì)近兩年來光譜、色譜、核磁共振、X-射線衍射等技術(shù)在中藥指紋圖譜中的運(yùn)用進(jìn)行了綜述，為中藥質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。

指紋圖譜；中藥；質(zhì)量控制；研究進(jìn)展

中藥作為一個(gè)復(fù)雜體系，包含多種成分，目前我國現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要是通過性狀鑒別、顯微鑒別和理化鑒別來確定真?zhèn)?，并以藥物中幾種化學(xué)成分為指標(biāo)來進(jìn)行含量測定，不能反映藥物的整體特征。中藥指紋圖譜是從中藥物質(zhì)基礎(chǔ)的角度出發(fā)，運(yùn)用現(xiàn)代分析測試技術(shù)，得到的能夠表征中藥材或中成藥特征的光譜圖或色譜圖等結(jié)果。中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，基本反映了中藥材或中成藥的化學(xué)成分和含量分布情況，可以用來作為鑒別中藥真?zhèn)蝺?yōu)劣的依據(jù)。

中藥指紋圖譜具有整體、宏觀和模糊分析等特點(diǎn)，作為中藥質(zhì)量控制的一種手段正日益受到人們的重視，2000年8月國家藥品監(jiān)督管理局頒布了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》，正式要求已注冊(cè)的中藥注射劑須進(jìn)行指紋圖譜研究和納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文主要對(duì)近兩年來各種分離分析技術(shù)在中藥指紋圖譜中的應(yīng)用進(jìn)行總結(jié)，并對(duì)其發(fā)展方向進(jìn)行展望，為中藥質(zhì)量控制及中藥產(chǎn)業(yè)的國際化和現(xiàn)代化提供思路和參考依據(jù)。

1 紫外光譜指紋圖譜

紫外光譜法是中藥及其制劑質(zhì)量分析中常用的一種方法，具有靈敏性高、精密度好和操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。彭雪晶等采用一階導(dǎo)數(shù)分光光度法測定樣品中的總裂環(huán)烯醚萜的含量，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地黃管秦艽的紫外指紋圖譜具有指紋特性，結(jié)合主成分分析可以區(qū)分不同產(chǎn)地黃管秦艽樣品[1]。

2 紅外光譜指紋圖譜

紅外光譜技術(shù)以其整體、無損及快速等優(yōu)點(diǎn)在中藥復(fù)雜體系鑒定及質(zhì)量評(píng)價(jià)中應(yīng)用廣泛。楊波等采用傅里葉變換紅外光譜分析方法，采集黨參藥材及水提物的紅外光譜并進(jìn)行雙指標(biāo)序列分析，發(fā)現(xiàn)7個(gè)產(chǎn)地黨參藥材的紅外圖譜有12個(gè)共有峰，主要對(duì)應(yīng)黨參中的多糖、黨參苷、內(nèi)酯類等成分。所得到的黨參及其提取物的紅外光譜分析結(jié)果具有獨(dú)特而穩(wěn)定的特征，可以作為其質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別的根據(jù)[2]。

3 拉曼光譜指紋圖譜

激光拉曼光譜為光與物質(zhì)分子非彈性碰撞后與入射光之間發(fā)生的能量轉(zhuǎn)換而產(chǎn)生的散射光譜，測試樣品方法快速簡便。董晶晶等采用共聚焦顯微拉曼光譜儀獲得中藥姜黃的拉曼光譜。譜圖中200～1800 cm-1特征峰可作為姜黃拉曼光譜的指紋區(qū)域。通過解析粗略判定姜黃中可能含有碳水化合物、姜黃素類化合物、β-谷甾醇、脂肪酸等成分，與已知的姜黃化學(xué)成分研究結(jié)果相符[3]。

4 光譜成像指紋圖譜

光譜成像技術(shù)是一種將光譜分析技術(shù)與光學(xué)成像技術(shù)結(jié)合而成的新型成像技術(shù)，測試樣品無損耗，為貴細(xì)中藥材特別是瀕危中藥材的鑒定提供了一條新的思路。秦海燕等掃描采集了14種不同市售來源的龍齒的光譜圖像，從成像光譜立方體中提取特征光譜構(gòu)建其指紋圖譜。采用標(biāo)準(zhǔn)歐氏距離等聚類分析方法解析龍齒指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)真品龍齒在650～900 nm的檢測波段具有相同的變化趨勢，與偽品或摻偽品中檢測到的光譜曲線存在明顯差異[4]。

5 薄層色譜指紋圖譜

薄層色譜可以簡便快速、直觀形象地提供分離成分的可見或熒光圖像，常用于中藥各種成分的鑒別。邵艷華等采用高效薄層色譜法建立了由9個(gè)特征斑點(diǎn)構(gòu)成的砂仁揮發(fā)油類成分的高效薄層色譜指紋圖譜共有模式，指認(rèn)出主要成分乙酸龍腦酯，發(fā)現(xiàn)不同存放時(shí)間及不同產(chǎn)地的砂仁藥材質(zhì)量參差不齊，常見砂仁混偽品間質(zhì)量差別顯著，砂仁及姜科其他近緣種常用藥用植物揮發(fā)油類成分的化學(xué)組成亦差異明顯[5]。

6 液相色譜指紋圖譜

液相色譜法具有簡便準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，檢測器種類多等特點(diǎn)，是構(gòu)建指紋圖譜的重要方法之一。姚超等采用超高效液相可變波長法，建立了梔子不同產(chǎn)地的指紋圖譜，確定23個(gè)共有峰，指認(rèn)4個(gè)共有峰，通過相似度評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)浙江產(chǎn)地梔子樣品質(zhì)量差異較小，而其余產(chǎn)地梔子樣品相似度均低于0.99[6]。

7 毛細(xì)管電泳指紋圖譜

毛細(xì)管電泳技術(shù)主要是根據(jù)化合物在毛細(xì)管中淌度和分配行為的不同對(duì)樣品進(jìn)行分離，該方法前處理簡單，柱效高。閆新豪采用高純水為溶劑回流提取待測冬蟲夏草的有效成分，以18～8 mmmol/L硼砂-磷酸氫二鈉混合溶液為分離緩沖溶液，選擇18.0 kV分離電壓和265 nm檢測波長對(duì)不同產(chǎn)地的冬蟲夏草進(jìn)行指紋圖譜采集，發(fā)現(xiàn)各樣品的HPCE指紋圖譜在特征峰數(shù)目、峰面積方面存在很多差異[7]。

8 氣相色譜指紋圖譜

氣相色譜法主要用于揮發(fā)性成分的定性定量分析。黃欣佩等模擬沉香熏燒的使用過程，以22批經(jīng)《中國藥典》及前期研究方法驗(yàn)證為天然沉香的沉香樣品為材料，應(yīng)用靜態(tài)頂空進(jìn)樣-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)構(gòu)建指紋圖譜。實(shí)驗(yàn)表明，18個(gè)共有峰組成的香氣成分指紋圖譜能表達(dá)天然沉香的共有品質(zhì)并區(qū)分不同產(chǎn)地的天然沉香[8]。

9 電化學(xué)指紋圖譜

電化學(xué)指紋圖譜是根據(jù)中藥材中所有成分對(duì)振蕩體系的綜合影響獲得的指紋圖譜，是一種通用、經(jīng)濟(jì)、簡便、易行和有效的鑒別中藥的方法。陳龍梗等利用以丙二酸作為耗散物的Belousov-Zhabotinski（B-Z）振蕩體系，考察反應(yīng)溫度、藥材加入量等影響因素，建立了石菖蒲的電化學(xué)指紋圖譜。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的石菖蒲指紋圖譜的振蕩曲線和特征參數(shù)的不同，可能是由于所含化學(xué)成分及各成分相對(duì)含量不同引起的化學(xué)振蕩反應(yīng)出現(xiàn)差別，可作為鑒別不同產(chǎn)地的石菖蒲藥材的依據(jù)[9]。

10 核磁共振指紋圖譜

與傳統(tǒng)的液相指紋圖譜相比，核磁共振分析技術(shù)對(duì)在色譜柱上無保留、UV靈敏度差的特征成分更有優(yōu)勢。王亞男等以氘代甲醇-氘代重水混合溶劑提取藥材，在溫度298 K，觀測頻率600.25 MHz條件下采集1H-NMR譜，數(shù)據(jù)經(jīng)分段積分處理后，分別進(jìn)行相似度分析、層序聚類分析和OPLS-DA分析。結(jié)果表明，桑皮苷A作為桑白皮的活性成分在四種市售藥材中含量遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)藥材，顯示四種市售藥材質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)藥材存在較大差距[10]。

11 X-射線衍射指紋圖譜

X-射線衍射指紋圖譜是指采用X射線照射晶體物質(zhì)時(shí)，晶體由于衍射產(chǎn)生的能反映各自組分特征的圖譜。謝建鋒等采用X-射線衍射技術(shù)分析7個(gè)產(chǎn)地的生、煅赤石脂，建立了11批樣品的X-射線衍射指紋圖譜及共有模式，確定13個(gè)共有峰。樣品指紋圖譜輪廓基本一致，相似度好，但不同產(chǎn)地、批次樣品指紋圖譜的峰數(shù)及峰強(qiáng)有所不同，即其組成和含有量有一定差異。炮制前后其指紋圖譜變化明顯，可能與化學(xué)成分和物相變化有關(guān)[11]。

隨著世界各國對(duì)天然藥物的研究不斷深入，指紋圖譜技術(shù)已經(jīng)成為國際公認(rèn)的控制天然藥物和中藥質(zhì)量最有效的方法和手段。將中藥化學(xué)指紋圖譜和中藥有效組分指紋圖譜結(jié)合起來，加強(qiáng)譜效學(xué)研究，建立中藥有效成分群的整體性的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，是中藥質(zhì)量控制的重要發(fā)展趨勢之一。以云計(jì)算、大數(shù)據(jù)為代表的數(shù)據(jù)處理技術(shù)快速發(fā)展，利用指紋圖譜研究累積的大量研究數(shù)據(jù)和資料，建立一個(gè)統(tǒng)一規(guī)范的中藥指紋圖譜數(shù)據(jù)庫可以為中藥日常檢驗(yàn)、分析工工作提供參考和指導(dǎo)?？傊?，中藥指紋圖譜技術(shù)的不斷發(fā)展和完善將為建立完備的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供有力的技術(shù)支持，為中藥走向國際市場、推進(jìn)中藥現(xiàn)代化事業(yè)的發(fā)展提供重要的推動(dòng)力。

[1] 彭雪晶,羅 倩,汪 潔,等.甘肅不同產(chǎn)地黃管秦艽的紫外光譜結(jié)合主成分分析鑒別[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2016,27(12):2926-2928.

[2] 楊 波,張娟娟,孫勝杰,等.不同產(chǎn)地黨參藥材及其水提物的紅外光譜特征分析[J].藥物分析雜志,2017,37(3):438-443.

[3] 董晶晶,戚雪勇,戈延茹.激光拉曼光譜快速測定中藥姜黃[J].海峽藥學(xué),2016,28(12):55-58.

[4] 秦海燕,孟慶霞,張春椿,等.光譜成像技術(shù)快速鑒別真?zhèn)锡堼X的研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2017,32(6):2689-2691.

[5] 邵艷華,劉美廷,楊一帆,等.砂仁及其近緣藥用植物的高效薄層色譜指紋圖譜研究[J].中國藥學(xué)雜志,2017,52(3):188-192.

[6] 姚 超,辛 華,陸兔林,等.不同產(chǎn)地梔子的超高效液相色譜指紋圖譜及模式識(shí)別研究[J].中國藥學(xué)雜志,2017,52(1):63-67.

[7] 閆新豪.不同產(chǎn)地冬蟲夏草HPCE的指紋圖譜分析[J].當(dāng)代化工,2017,46(5):814-820.

[8] 黃欣佩,樊云飛,陳曉東,等.天然沉香香氣成分的SHS-GC-MS指紋圖譜研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2015,31(6):737-744.

[9] 陳龍梗,李歡歡,朱 林,等.不同產(chǎn)地石菖蒲的電化學(xué)指紋圖譜研究[J].化學(xué)世界,2017,5:288-293.

[10] 王亞男,孫 偉,賀文義,等.基于1H-NMR指紋圖譜的四批市售桑白皮藥材質(zhì)量分析[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2017,34(1):62-70.

[11] 謝建鋒,李穎晨,王 穎,等.赤石脂X-射線衍射指紋圖譜[J].中成藥,2017,39(3):648-651.

R284.1

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ISSN.2095-8242.2017.045.8909.02

海南省自然科學(xué)基金（項(xiàng)目編號(hào)：311047）

陳露（1981-），女，博士，副主任中藥師，研究方向：藥物質(zhì)量評(píng)價(jià)與研究

本文編輯：吳 衛(wèi)