王思思

（湖北省云夢縣人民醫(yī)院檢檢驗科，湖北 孝感 432500）

免疫檢測技術(shù)及其研究進展

王思思

（湖北省云夢縣人民醫(yī)院檢檢驗科，湖北 孝感 432500）

最近幾年免疫檢測技術(shù)已在現(xiàn)代生命科學(xué)、食品科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)以及生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。由于免疫檢測技術(shù)的優(yōu)點很多如簡便、靈敏度高及特異性強等等，它是根據(jù)抗體與抗原反應(yīng)的原理，定量定性分析待測物的一種檢測方法?；诖吮疚闹攸c對近幾年應(yīng)用廣泛的免疫學(xué)檢測方法的特點、原理以及應(yīng)用做了分析，并做了比較，希望可以為免疫檢測技術(shù)的有關(guān)的科研工作者提供參考和借鑒作用，在促進免疫檢測技術(shù)的快速發(fā)展的路上助一臂之力。

免疫學(xué)檢測技術(shù)；酶標(biāo)記；熒光素標(biāo)記；放射免疫

1 免疫檢測技術(shù)相關(guān)概述

早在1959年由于美國的物理學(xué)家Mallow和Berson就通過放射免疫檢測技術(shù)（Radioimmunoassay，RIA）在血清中檢測出了一些胰島素，就此在分析化學(xué)界引入了免疫檢測技術(shù)。

免疫檢測技術(shù)是根據(jù)分析試劑以一種或多種抗體，定量或者定性檢測分析的方法。最為關(guān)鍵的特點就是通過抗體與抗體反應(yīng)之間相互作用，具有靈敏性與特異性的特點。近幾年免疫檢測技術(shù)應(yīng)用最廣泛的主要包括：免疫熒光技術(shù)（im-munofluorescence assay，IFA），免疫層析技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked im-munosorbent assay，ELISA），免疫傳感器（im-munosensor），分子印跡技術(shù)（mo-lecularimprinting technique，MIT）等等。

2 免疫熒光技術(shù)

免疫熒光技術(shù)即被稱為熒光抗體技術(shù)，基于生物化學(xué)、免疫學(xué)以及顯微鏡技術(shù)建立了免疫熒光技術(shù)，它在標(biāo)記免疫技術(shù)中是發(fā)展最早的一種技術(shù)。免疫熒光技術(shù)主要包括兩種方法分別是：通過現(xiàn)有已知的熒光抗原標(biāo)記物檢查或示蹤對應(yīng)的抗體的方法即熒光抗原法；熒光抗體法就是利用熒光抗體檢查或者示蹤對應(yīng)的抗原法，這也是最為常見廣泛利用的方法。免疫熒光組織（或細胞）化學(xué)技術(shù)就是要利用免疫熒光技術(shù)通過顯示，進一步檢查細胞或組織內(nèi)的半抗原物質(zhì)或者抗原的方法。

伴隨著免疫熒光技術(shù)應(yīng)用的廣泛性，其在微生物學(xué)領(lǐng)域免疫熒光技術(shù)發(fā)揮了重要的作用，根據(jù)參考已經(jīng)有人利用免疫熒光技術(shù)對沙門氏菌、李斯特氏菌以及葡萄球菌等細菌進行了快速檢測。此外，此技術(shù)已經(jīng)涉及到環(huán)境科學(xué)、免疫學(xué)以及現(xiàn)代分子生物學(xué)等眾多領(lǐng)域。

3 免疫層析技術(shù)

免疫層析技術(shù)，在20世紀(jì)90年代已經(jīng)是免疫分析技術(shù)中發(fā)展最快的技術(shù)?；诿庖邔W(xué)原理以及層析技術(shù)，檢測樣品在纖維膜上活動，通過毛細作用就在非常短的時間內(nèi)，顯示出特殊顏色，并分析顏色的的技術(shù)。

簡要介紹其中一種技術(shù)，熒光微球免疫層析技術(shù)。熒光微球免疫層析技術(shù)原理，通過熒光微球表面的官能團羧基和抗體表面的熒光信號，相互反應(yīng)就生成穩(wěn)定物質(zhì)的技術(shù)，非常新的可以定量分析的免疫層析技術(shù)。熒光微球產(chǎn)生的產(chǎn)物具有眾多優(yōu)點，如分散均勻、持續(xù)發(fā)光、可操作性極高以及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等等，理論上免疫層析技術(shù)的局限性降低，因此熒光微球免疫技術(shù)通常在檢測食品違禁成分中有了快速的發(fā)展。

4 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，在20世紀(jì)70年代末，ELISA是對病毒、細菌抗原以及抗體進行檢測。單克隆抗體技術(shù)在研制出不同類型的抗原、抗體復(fù)合物及高純度抗體后，有了廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域，最終推進了免疫分析法的應(yīng)用。

酶聯(lián)免疫吸附法，就是基于抗原抗體的有效結(jié)合，經(jīng)過免疫反應(yīng)特異性和酶高效催化下，對樣品進行檢測的應(yīng)用型技術(shù)，具有特異性強、操作簡便、靈敏度高以及檢測成本低的特點，可集中處理大容量的樣品。這種方法在獸藥與飼料的常用藥物檢測中經(jīng)常被使用。雖然酶聯(lián)免疫吸附法存在多方面優(yōu)點，但仍然有需要改進的地方。

5 電化學(xué)免疫傳感器

免疫傳感器中研究最早，比較成熟的一種檢測技術(shù)就是電化學(xué)免疫傳感器。它的原理就是通過結(jié)合免疫檢測技術(shù)與電化學(xué)技術(shù)，根據(jù)反應(yīng)通過電化學(xué)信號對物質(zhì)的濃度進行檢測，分析測定分析物的方法。是由基本電極（換能器）以及抗原、抗體（分子的識別物質(zhì)）組成的。

簡單介紹一種類型，電流型免疫傳感器。電流型免疫傳感器就是在恒壓下對抗原抗體特異性反應(yīng)中電流進行測定的一種免疫檢測方法。主要包括酶標(biāo)記型以及非酶標(biāo)記性兩種類型。

6 分子印跡技術(shù)

分子印跡技術(shù)系統(tǒng)是通過人工合成分子識別的，具有分子識別的功能的體系很多，如化學(xué)識別體系（如冠醚、環(huán)糊精等）以及生物識別系統(tǒng)（如酶、抗體和受體）。分子印跡技術(shù)也就是免疫學(xué)中的抗原與抗體進行特異性反應(yīng)識別的過程，即通過客體和薄膜接受體間作用，制備出分子印跡聚合物（MIP），進一步分子精確識別的技術(shù)。在制備分子印跡聚合物時，最關(guān)鍵的就是對應(yīng)模板分子選擇與制備所需要的功能單體以及交聯(lián)劑等物質(zhì)。評估印跡效率時，測定印跡高聚物的色譜可以實現(xiàn)分析客體化合物的選擇性以及鍵合強度。

總而言之，目前大部分的免疫檢測技術(shù)處于研究和發(fā)展階段，如果想要免疫檢測技術(shù)得到更廣泛的應(yīng)用，我們要努力研究提高操作的經(jīng)濟性、簡便性、免疫檢測技術(shù)的精確度、穩(wěn)定性等方面，促進免疫檢測技術(shù)的發(fā)展。

[1] 張 奇,李培武,陳小媚,周海燕,印南日,甘冬生.黃曲霉毒素免疫檢測技術(shù)研究進展[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全,2013,03:42-46.

[2] 王小環(huán),楊蓮如,趙林立,吳紹強.免疫熒光檢測技術(shù)及其在寄生蟲檢測中的應(yīng)用進展[J].中國畜牧獸醫(yī),2012,03:81-84.

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ISSN.2095-8242.2017.045.8905.01

本文編輯：趙小龍