馬金環(huán)

(昌邑市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，山東 昌邑261300)

急性胃出血患者早期血液CD4+CD25+T細(xì)胞及其細(xì)胞因子的變化

馬金環(huán)

(昌邑市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，山東 昌邑261300)

急性胃出血是消化內(nèi)科常見的急性疾病，主要由于胃部及十二指腸潰瘍、口服阿司匹林、胃癌、燒傷等原因引起的活動(dòng)性出血[1]。近年研究發(fā)現(xiàn)[2]，免疫系統(tǒng)紊亂會(huì)加重原發(fā)病灶病變程度，進(jìn)而加重出血的發(fā)生。CD4+CD25+T細(xì)胞是具有免疫增強(qiáng)及抑制的雙重T細(xì)胞，是一群能同時(shí)表達(dá)CD4及CD25分子的T細(xì)胞，能減輕過度免疫反應(yīng)，從而減輕對(duì)器官及組織的損害，但當(dāng)其水平過度升高時(shí)不僅不能有效抑制機(jī)體過強(qiáng)的炎癥反應(yīng)，反而會(huì)加重炎癥損傷，進(jìn)而加重患者病情[3,4]。本研究將探討急性胃出血患者早期血液CD4+CD25+T細(xì)胞及其細(xì)胞因子的變化及其與患者貧血程度的關(guān)系，旨在為急性胃出血患者早期診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)提供指導(dǎo)。

1 資料及方法

1.1 臨床資料

2014年6月至2015年6月收治急性胃出血患者38例，患者符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化內(nèi)科學(xué)會(huì)對(duì)急性胃出血的診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床表現(xiàn)為血壓下降、腹痛、嘔血、黑便等，患者均經(jīng)胃鏡檢查確診，男 18例，女20例，年齡18-68歲，平均(42.3±4.9)歲；另選取同期就診的35例經(jīng)胃鏡診斷為消化潰瘍但未發(fā)生出血的患者為潰瘍組，男 18例，女17例，年齡18-66歲，平均(41.9±5.2)歲；選取同期行常規(guī)身體檢查的30例健康體檢者為對(duì)照組，男 16例，女14例，年齡18-67歲，平均(42.2±4.9)歲，3組性別、年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 急性胃出血患者入院后禁食、禁水，同時(shí)留置胃管接引流觀察胃部?jī)?nèi)容物性狀，并從胃部注入止血藥物，同時(shí)給予保護(hù)胃黏膜、抑酸等治療，對(duì)于Hb<70 g/L的患者則輸注紅細(xì)胞直至恢復(fù)正常血壓水平。治療72 h后再次采集靜脈血測(cè)量相關(guān)指標(biāo)。

1.2.2 CD4+CD25+T細(xì)胞測(cè)定 潰瘍組及對(duì)照組于檢查當(dāng)天清晨8-9點(diǎn)空腹抽取靜脈血5 ml，急性胃出血組于入院當(dāng)天及治療第3 d后分別抽取靜脈血5 ml，加入肝素鈉抗凝后離心處理10 min，留取血漿，并置于-80℃中待測(cè)。取上述樣品恢復(fù)至常溫后，調(diào)整樣品濃度至2×106/ml，并將樣品接種在6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞于測(cè)定管中，采用PBS洗滌2次后，分別加入IL-17A-FTTC及IFN-γ-FTTC染色劑對(duì)細(xì)胞漿進(jìn)行染色，并采用美國(guó)貝克曼公司提供的Beckm Epics流式細(xì)胞儀測(cè)定外周血CD4+CD25+T細(xì)胞比例。

1.2.3 CD4+CD25+細(xì)胞因子測(cè)定 采用ELISA法測(cè)定3組IL-10、TGF-β水平，IL-10試劑盒由上海博研生物工程研究中心提供，TGF-β試劑盒由上海常斤生物科技有限公司提供，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.4 Hb、RBC水平測(cè)定 采用日本Sysnex公司提供的SYSMEX1000型全自動(dòng)化血液分析儀測(cè)定患者血紅蛋白含量(Hb)及紅細(xì)胞水平。

1.3 貧血判斷標(biāo)準(zhǔn)

血紅蛋白濃度(Hb)水平120-160 g/L為正常；90 g/L

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對(duì)比

急性胃出血組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著高于潰瘍組及對(duì)照組(P<0.05)，而Hb、RBC平顯著低于慢性胃潰瘍組及對(duì)照組(P<0.05)。潰瘍組與對(duì)照相比，CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

表1 三組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，aP<0.05；與胃潰瘍組相比，bP<0.05.

2.2 急性胃出血組患者治療前后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對(duì)比

急性胃潰瘍組治療后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平較治療前顯著下降，而Hb、RBC較治療前顯著升高(P<0.05)，見表2。

表2 急性胃出血組治療前后CD4+CD25+、IL-10、TGF-β、Hb、RBC水平對(duì)比

2.3 CD4+CD25+、IL-10、TGF-β與貧血程度的關(guān)系

與輕度及中度貧血組相比，重度貧血組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著升高(P<0.05)，見表3。

表3 CD4+CD25+、IL-10、TGF-β與貧血程度的關(guān)系

注：與輕度組相比，aP<0.05；與中度組相比，bP<0.05.

3 討論

CD4+CD25+是重要的輔助性T細(xì)胞，可分泌IL-10、TGF-β等重要細(xì)胞因子，同時(shí)具有免疫調(diào)節(jié)的重要作用。與免疫增強(qiáng)作用相比，CD4+CD25+T細(xì)胞往往起到重要的免疫抑制作用[5,6]。研究表明[7]，免疫細(xì)胞功能異常尤其是T細(xì)胞異常會(huì)引發(fā)胃腸道疾病并會(huì)導(dǎo)致消化道出血如炎癥性腸病、消化性潰瘍、惡性腫瘤等。有研究指出[8]，胃腸疾病患者腸細(xì)胞壁免疫性損傷是導(dǎo)致胃部大出血的重要原因，而其主要作用機(jī)制可能與CD4+CD25+T細(xì)胞不能有效抑制血管壁內(nèi)過強(qiáng)的炎癥反應(yīng)，從而加重胃腸血管壁內(nèi)膜損傷，并最終導(dǎo)致血管破裂有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，急性胃出血組患者外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著高于潰瘍組及對(duì)照組，而潰瘍組與對(duì)照組外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明在急性胃出血患者中存在免疫功能失調(diào)現(xiàn)象，CD4+CD25+比例上調(diào)、IL-10、TGF-β表達(dá)水平增多與胃出血發(fā)病有密切的關(guān)系。因此通過測(cè)定CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平有助于早期急性胃出血診斷，結(jié)果與Thanh等[9]一致。本研究發(fā)現(xiàn)，急性胃出血患者Hb、RBC水平顯著低于潰瘍組及對(duì)照組，從而提示急性胃出血患者容易由于失血過多而發(fā)生貧血。此外，本研究發(fā)現(xiàn)急性胃出血患者經(jīng)積極的治療后，外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著低于治療前，從而提示外周血CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平可作為急性胃出血患者預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)。與治療前相比，治療后患者Hb、RBC水平較明顯升高，這提示急性胃出血患者入院后經(jīng)止血、保護(hù)胃黏膜等措施治療后能有效減輕胃腸道黏膜免疫性損害，從而有效改善患者病情。本研究發(fā)現(xiàn)，與輕度及中度貧血組相比，重度貧血組CD4+CD25+、IL-10、TGF-β水平顯著升高，這提示急性胃出血患者免疫功能失調(diào)與貧血存在一定的關(guān)系，即CD4+CD25+T細(xì)胞水平越高，患者出血程度越重，Hb水平越低，其可能機(jī)制可能與CD4+CD25+T細(xì)胞表達(dá)水平過高會(huì)導(dǎo)致消化黏膜免疫屏障功能障礙，從而表現(xiàn)為黏膜下血管通透性升高，增加患者出血量[11,12]。

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