杜江，張秀鵬，趙環(huán)宇，王恩華

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室，沈陽(yáng) 110122

TM EM 131L在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

杜江*，張秀鵬，趙環(huán)宇，王恩華

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理教研室，沈陽(yáng) 110122

目的探討transmembrane 131-like（TMEM 131L）在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義。方法通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TMEM 131L在104例非小細(xì)胞肺癌組織及36例癌旁正常組織的表達(dá)情況，Pearson χ2檢驗(yàn)分析TMEM 131L與臨床病理因素的關(guān)聯(lián)。結(jié)果TMEM 131L在肺癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織；TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與p-TNM分期、陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后呈顯著正相關(guān)。結(jié)論TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌中可能作為一種促癌基因起著促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移等關(guān)鍵作用，并可能成為診斷和治療的新靶點(diǎn)。

TMEM 131L；非小細(xì)胞肺癌；臨床病理因素

肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤，已成為人類因癌癥死亡的主要原因[1]。肺癌最常見(jiàn)的類型為非小細(xì)胞肺癌，約有80%以上的新發(fā)肺癌病例為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。此外，約有40%～50%的患者在確診時(shí)已經(jīng)發(fā)展為非小細(xì)胞肺癌中晚期。在過(guò)去的10多年中，針對(duì)肺癌的治療方法不斷改進(jìn)，但是其5年生存率仍然較低。因此，尋找新的有效治療非小細(xì)胞肺癌的靶點(diǎn)是目前的重要任務(wù)[2]。

Transmembrane 131-like（TMEM 131L）是一種跨膜蛋白，Bruno Canque等人2013年證實(shí)其在人胸腺上皮細(xì)胞中定位于細(xì)胞膜上，并且抑制經(jīng)典的Wnt/β-catenin通路[3]。因其結(jié)構(gòu)和TMEM 131類似，故命名為T(mén)MEM 131L，其基因定位于人染色體4q31.3，分L和S兩種亞型，均參與體內(nèi)免疫應(yīng)答[3]。

目前關(guān)于TMEM 131L的研究?jī)H局限于胚胎發(fā)育領(lǐng)域，而在人類非小細(xì)胞肺癌中是否存在TMEM 131L的表達(dá)，其表達(dá)有何臨床意義以及在腫瘤中是如何發(fā)揮其生物學(xué)作用，尚沒(méi)有相關(guān)的報(bào)道。在本研究中，我們通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法來(lái)檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌中TMEM 131L的表達(dá)情況及臨床意義，以研究TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌中可能起到的作用。

材料和方法

1 病人和樣本

本次研究獲得了中國(guó)醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。組織樣本取自104例（72例男性和32例女性）2006年至2010年在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院接受手術(shù)切除并診斷為肺鱗狀細(xì)胞癌或肺腺癌的患者，所有患者術(shù)前均未接受放療或化療，術(shù)后均接受標(biāo)準(zhǔn)化療。104例肺癌患者全部隨訪資料完整。每個(gè)患者的生存時(shí)間定義為從手術(shù)后的當(dāng)天到隨訪結(jié)束日期或死于腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的時(shí)間。根據(jù)2015世界衛(wèi)生組織（WHO）肺腫瘤分類對(duì)組織學(xué)診斷和分級(jí)進(jìn)行評(píng)價(jià)[4]，全部樣本統(tǒng)計(jì)了組織學(xué)分型、分化程度及腫瘤分期。根據(jù)UICC的TNM分期系統(tǒng)第七版[5]對(duì)肺癌腫瘤分期進(jìn)行。104患者的年齡范圍從31歲至77歲。其中，56例年齡超過(guò) 60 歲。樣本包括47例肺鱗癌和57例肺腺癌。其中21例腫瘤分化良好，83例被列為中分化或低分化。104例患者中有62例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

2 免疫組織化學(xué)染色

腫瘤手術(shù)切除的標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定并用石蠟進(jìn)行包埋，切片厚度為4μm。采用過(guò)氧化物酶法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。一抗孵育使用的抗體為鼠標(biāo)單克隆抗體抗TMEM 131L（1:200, 美國(guó)Santa Cruz生物技術(shù)有限公司），4°C孵育過(guò)夜；然后采用生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG二抗（1:1000，美國(guó)CST公司）37℃孵育30m in；洗滌后，用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（1:200，中國(guó)邁新公司）室溫孵育30m in；在含0.04%DAB-0.005%H2O2的0.05mol/L Tris-HCl緩沖液(pH7.6)中室溫呈色15s；復(fù)染使用蘇木精染色液，用濃度梯度酒精進(jìn)行脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。

3 結(jié)果判定

所有樣本進(jìn)行隨機(jī)檢測(cè)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)腫瘤細(xì)胞著色的百分比，TMEM 131L的表達(dá)被劃分成五個(gè)等級(jí)：0（無(wú)著色）；1（1%～25%）；2（26%～50%）； 3（51%～75%）；4（76%～100%）。根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分分別為0(陰性) ；1(弱陽(yáng)性) ；2(中度陽(yáng)性) ；3(強(qiáng)陽(yáng)性)。將兩種評(píng)分結(jié)果相乘，得到一個(gè)總得分，范圍在0～12之間?？傇u(píng)分小于4分為T(mén)MEM 131L低表達(dá)，大于等于4分為T(mén)MEM 131L高表達(dá)。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有的統(tǒng)計(jì)分析采用軟件為SPSS 22.0。Pearson χ2檢驗(yàn)用于評(píng)估TMEM 131L免疫反應(yīng)性表達(dá)和臨床病理因素之間可能的相關(guān)性。利用Kaplan-Meier法對(duì)患者進(jìn)行生存分析，利用log-rank測(cè)試比較不同因素下患者生存時(shí)間的區(qū)別。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)

在對(duì)104例肺癌及36例癌旁正常肺組織中的TMEM 131L進(jìn)行免疫免疫組織化學(xué)檢測(cè)顯示，TMEM 131L在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜以及細(xì)胞核中都有表達(dá)，以細(xì)胞質(zhì)定位為主(圖1)。104例非小細(xì)胞肺癌組織中，TMEM 131L在58例中存在高表達(dá)，高表達(dá)率為55.8%；在36例正常支氣管上皮中，TMEM 131L表達(dá)為陰性或弱陽(yáng)性(圖1)。以上結(jié)果說(shuō)明，TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)。

表1 TM EM 131L在非小細(xì)胞肺癌中的免疫反應(yīng)性表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系Tab.1 The relationship between TM EM 131L expression and the clinicopathologic features of NSCLC

2 TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

對(duì)TMEM 131L表達(dá)強(qiáng)弱與臨床病理因素相關(guān)性Pearson χ2檢驗(yàn)分析顯示，TMEM 131L高表達(dá)與腫瘤惡性分化程度正相關(guān)（P=0.0391）。另外，TMEM 131L高表達(dá)與pTNM分期（P=0.012）及陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.0149）有顯著正相關(guān)性（表1）。

進(jìn)一步分析TMEM 131L與生存時(shí)間的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，TMEM 131L高表達(dá)患者其生存時(shí)間明顯短于TMEM 131L低表達(dá)的患者（P＜0.05）(圖2)。

圖2 TMEM 131L免疫反應(yīng)性表達(dá)與NSCLC不良預(yù)后相關(guān)。TMEM 131L高表達(dá)患者生存時(shí)間明顯小于TMEM 131L低表達(dá)的患者的生存時(shí)間。Fig. 2 The positive correlation between TMEM 131L expression and poor prognoses in NSCLC. The survival time of patients w ith high TMEM 131L expression was significantly shorter than that of patients w ith low TMEM 131L expression.

討 論

研究表明TMEM 131L是定位于人胸腺上皮細(xì)胞細(xì)胞膜上的跨膜蛋白[3]，其在人類腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平和模式目前尚不清楚。我們通過(guò)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TMEM 131L在人類非小細(xì)胞肺癌的組織中存在高表達(dá)，且以細(xì)胞質(zhì)表達(dá)為主，其細(xì)胞質(zhì)的陽(yáng)性表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的低分化、高TNM分期、陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后呈顯著的正相關(guān)。

在非小細(xì)胞肺癌中，Wnt信號(hào)通路處于激活狀態(tài)，而TMEM 131L在這些上皮性腫瘤中存在著普遍的高表達(dá)信號(hào)，提示TMEM 131L可能促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌等上皮性腫瘤的發(fā)生發(fā)展；然而，Bruno Canque等人發(fā)現(xiàn)TMEM 131在人胸腺上皮細(xì)胞中定位在細(xì)胞膜上，并且抑制經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號(hào)通路，推測(cè)其機(jī)制可能是TMEM 131L與LRP5/6競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合Dvl，使其無(wú)法與Frizzled形成復(fù)合體，從而影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制經(jīng)典Wnt信號(hào)。然而，我們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，TMEM 131L在人類非小細(xì)胞肺癌中以細(xì)胞漿的定位表達(dá)為主，且胞漿中的TMEM 131L高表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的低分化、高TNM分期、陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后呈顯著的正相關(guān)，這提示TMEM 131L在胞漿中可能與在細(xì)胞膜上發(fā)揮著相反的生物學(xué)作用。推測(cè)可能是因?yàn)門(mén)MEM 131L在人胸腺上皮細(xì)胞和人類腫瘤組織細(xì)胞中定位的不同，決定其發(fā)揮不同的生物學(xué)作用。當(dāng)TMEM 131L定位與細(xì)胞膜時(shí)，可以通過(guò)降解磷酸化的LRP6抑制經(jīng)典Wnt/β-catenin通路[6]，而當(dāng)TMEM 131L定位在細(xì)胞漿中的時(shí)候，可能通過(guò)與CK1等激酶相互作用，進(jìn)而與Dvls結(jié)合，發(fā)揮促癌作用。下一步，我們將逐步通過(guò)Western blot實(shí)驗(yàn)、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)該設(shè)想?？傊?，TMEM 131L的表達(dá)調(diào)控是一個(gè)多因素、多途徑的復(fù)雜過(guò)程，對(duì)其的進(jìn)一步研究，將為腫瘤的診斷和治療提供新途徑，有望成為治療腫瘤的突破口之一。但目前的研究尚處于探索階段，這對(duì)今后的研究提出了更多的挑戰(zhàn)。

綜上，我們發(fā)現(xiàn)TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌中過(guò)表達(dá)并與腫瘤惡性分化程度、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后成顯著正相關(guān)，這些提示TMEM 131L可能成為肺癌診斷治療的新靶點(diǎn)，而TMEM 131L在非小細(xì)胞肺癌中的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。

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The expression of TMEM 131L in non-small cell lung cancer and its clinical signif cance

Du Jiang*, Zhang Xiupeng, Zhao Huanyu, Wang Enhua
(Department of Pathology, School of Basic Medical Sciences, China Medical University, Shenyang 110122, China)

ObjectiveTo investigate the expression and clinical signif cance of TMEM 131L (transmembrane 131-like) in nonsmall cell lung cancer (NSCLC).M ethodsThe expression of TMEM 131L in 104 cases of NSCLC tissue and 36 cases of adjacent normal tissue was detected by immunohistochem ical staining, and the correlation between TMEM 131L and the clinical pathological features was analyzed by Pearson’s χ2test.ResultsThe expression of TMEM 131L was signif cantly higher in lung cancer tissue than that in adjacent normal tissue (P＜0.05). Its expression in NSCLC was positively correlated w ith p-TNM staging (P=0.0012), lymph node metastasis (P=0.0149) and poor prognoses.ConclusionTMEM 131L m ight be a cancer-promoting gene in NSCLC, and play a key role in tumor developing processes such as tumor metastasis. It also can be a new target for diagnosis and treatment.

TMEM 131L; non-small cell lung cancer (NSCLC); clinicopathologic features

R361

A

10.16705/ j. cnki. 1004-1850.2017.03.007

2017-03-31

2017-06-05

國(guó)家自然科學(xué)基金（81572854）

杜江，男（1980年），漢族，博士，講師

*通訊作者(To whom correspondence should be addressed)：3624108@qq.com